MC4R基因在5个猪群体内的多态性分析 MC4R基因在5个猪群体内的多态性分析 吴华莉，张莺莺，黄 济，涂尾龙，王洪洋，曹建国，范 春，王胜昌，赵 莹，谈永松（1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海 闵行 201106；2.上海种猪工程技术研究中心，上海 浦东新区 201302；3.上海实验动物研究中心，上海 浦东新区 201302）黑素皮质激素受体基因家族（The melanocortin receptor gene family, MCR）由5个位于常染色体上的单外显子组成。在人、小鼠、牛和狗的...
吴华莉，张莺莺，黄 济，涂尾龙，王洪洋，曹建国，范 春，王胜昌，赵 莹，谈永松
（1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所，上海 闵行 201106；2.上海种猪工程技术研究中心，上海 浦东新区 201302；3.上海实验动物研究中心，上海 浦东新区 201302）
黑素皮质激素受体基因家族（The melanocortin receptor gene family, MCR）由5个位于常染色体上的单外显子组成。在人、小鼠、牛和狗的基因组中MC2R、MC4R和MC5R是共联的，而在猪的基因组中，共联组包括MC1R、MC2R和MC5R。MC4R（黑素皮质激素受体4基因）的变异与脂肪组织沉积相关[1]。MC4R在下丘脑室旁核 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达，在食物摄入和能量平衡的中枢控制中起着重要作用[2]。猪MC4R基因定位于1号染色体q22-q27[3]。猪MC4R基因存在一个错义突变（G→A），导致MC4R蛋白第298位天冬氨酸转变成天冬酰胺，该突变与胸腰椎间膘厚、臀部膘厚、平均背膘厚、眼肌宽度、眼肌面积、皮率呈显著性相关[4]。MC4R基因多态性与淮猪日增重和活体背膘厚显著相关[5]。本研究检测猪MC4R基因突变位点在杜洛克猪、长白猪、大白猪、申农猪和梅山猪群体内的基因型和等位基因频率，以及群体遗传学指标，期望为寻找与猪生长指标相关的分子标记提供基础 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 。
试验于2022年6—7月在上海市农业科学院畜牧兽医研究所进行。5个猪群体样品中，杜洛克（90头）、长白猪（78头）和大白猪（151头）来自上海祥欣畜禽有限公司，梅山猪（113头）来自于上海猪状元牧场，申农猪（76头）来自上海富民农场，共计508个样品，采用部位为猪耳组织块。PCR试验所用试剂和内切酶ClaⅠ购于宝生物工程有限公司。
1.2.1 DNA提取 采用AXYGEN基因组试剂盒提取猪耳组织DNA，测定DNA浓度，统一稀释样品浓度为80.0 ng/mL，-20 ℃保存备用。
1.2.2 引物及PCR反应条件 上游引物：5'-ATGA ACTCAACCCATCACC-3'；下游引物：5'-TTAATA TCTGCTAGACAAATCACAG-3'[6]。PCR反应体系：2×Taq PCR Master Mix 27.5 μL，DNA模板1.0 μL，上游引物0.5 μL，下游引物0.5 μL，RNase-Free ddH2O 20.5 μL，总体积为50 μL。PCR反应条件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，54 ℃ 45 s，72 ℃ 1 min，35个循环；72 ℃ 10 min。PCR产物采用1.0%琼脂糖凝胶电泳检测试验结果。
1.2.3 基因型分析 猪MC4R基因PCR扩增片段长度为999 bp，存在ClaⅠ内切酶位点。选取PCR扩增条带单一的样品，进行限制性内切酶试验，采用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测酶切结果。限制性内切酶消化试验的反应体系：PCR产物5 μL，10×Buffer 2 μL，ClaⅠ0.5 μL，ddH2O 8.5 μL，总体积为16 μL。酶切温度为37 ℃，反应时间为1 h。猪MC4R基因PCR扩增产物经过内切酶消化后产生的不同基因型判定标准见表1。
表1 猪MC4R基因酶切后的3种基因型
计算MC4R基因在5个猪群体内的基因型频率、等位基因频率，计算方法参见Reference[7]。采用GENEPOP 3.1软件计算基因杂合度（Heterozygosity, He）、纯合度（Homozygosity,Ho）、有效等位基因数（effective number of alleles,Ne）和多态信息含量（polymorphism information content, PIC）。
结果采用琼脂糖凝胶电泳检测MC4R基因PCR结果，如图1所示，目的片段大小为999 bp。
采用1.2%琼脂糖凝胶电泳检测内切酶试验结果。如图2所示，AA型为1条带，GG型为2条带，AG型杂合子为3条带。根据电泳检测结果统计MC4R基因在5个群体中的个体基因型。
由表2可知，MC4R基因在5个猪群体内的基因型频率和等位基因频率表现为：在杜洛克猪群体内检测出AG基因型为优势基因型，AA基因型略少，GG基因型较少，A等位基因为优势等位基因；在长白猪群体内检测出GG基因型为优势基因型，AG基因型略少，少量AA基因型，G等位基因为优势等位基因；在大白猪群体内检测AG基因型为优势基因型，AA基因型略少，GG基因型最少，A等位基因为优势等位基因。在申农猪群体内检测GG基因型为优势基因型，AG基因型较少，少量AA基因型，G等位基因为优势等位基因。在梅山猪群体内检测出GG基因型为优势基因型，AG基因型较少，未检测出AA基因型。
表2 MC4R基因在5个猪群体内的基因型频率、等位基因频率和群体遗传学指标
群体遗传学指标分析结果显示，MC4R基因在杜洛克猪和大白猪群体内PIC值在0.25～0.5之间，表现为中度多态；在长白猪、申农猪和梅山猪PIC值小于0.25，表现低度多态。
黑素皮质激素4受体（MC4R）是一种与体重调节有关的G蛋白偶联受体。人类基因研究已表明MC4R基因的两种移码突变与显性遗传形式的肥胖有关[8]。机体的体重维持是由复杂系统控制的，MC4R是调控猪生产性能性状的候选基因，在基因的高度保守区域发现Asp298Asn突变，并证实该突变位点产生的基因型与猪品系的背膘、生长速度以及总体采食量显著相关[9]。本试验检测在梅山猪，以及培育品种申农猪群体内GG基因型为优势基因型。这与刘桂兰等、强巴央宗等、陈敏等研究证实在中国地方品种群体内GG基因型为优势基因型的结果是一致的[4，10-11]。肖石军等研究证实GG基因型个体的胸、腰和臀部膘厚比AA基因型和AG基因型的厚，GG基因型生长速度快[12]。有研究表明，申农猪和梅山猪的背膘厚比外来品种杜洛克、长白猪和大白猪的要厚[13-18]。由此推测申农猪和梅山猪群体中GG基因型背膘厚可能高于AA基因型和AG基因型，但MC4R基因突变究竟是如何影响群体生长指标的，还需要收集性状加以验证。本试验检测G等位基因在长白猪呈高频分布，而A等位基因在大白猪群体内呈高频分布。这一结果与刘桂兰等、肖石军等研究结果是一致的[4，12]。
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