.实验准备：实验仪器，试剂，耗材等
名称 数量 提供
仪器 ChemiDoc MP 1 伯乐
Turbo 转印仪 1 伯乐
投影仪 1 伯乐
电泳槽及电泳仪 1 客户
移液枪， 0.5mlEP 管，玻璃仪器等 若干 客户
耗材 上样缓冲液（若有样品） - 客户
样品（蛋白 Marker ） - 伯乐
10X Tris/ 甘氨酸 /SDS，1L 电泳缓冲液 40 次 伯乐
Mini-PROTEAN TGX免染预制胶（ 10%分离胶） 40 次 伯乐
快速转印包 40 次 伯乐
化学发光试剂（不建议做抗体孵育演示） 40 次 伯乐
加粗部分需要用户准备
三 .实验
流程
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（一理论讲解部分）
1 需要
ppt
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，在 Demo 实验之前介绍 V3 流程。
（二实验操作部分）
1. 样品分离（使用预制胶可大大缩短实验时间）
1.1 取出并拆封一个 TGX 免染胶（ 456-8034），安装至 Mini PROTEAN Tetra，加入 1X 电泳缓冲
液约 1L（取 100mL 的 10X 溶液电泳缓冲液（ 161-0732），加去离子水定容至 1L），用移液枪轻轻
冲洗每个上样孔。
1.2 在首尾泳道加入 5uL 蛋白 Marker ， 其余泳道加入蛋白样品 10uL（与 2X 上样缓冲液 1:1 混
合）
Tips: 选择性使用客户的样品。
1.3 接通电泳仪电源，设置电压 300 V 15min 。
1.4 电泳结束， 取出凝胶，做好切角标记。
2. 可视化分离（ Visualize ）（免染胶无需染色即可观看分离结果）
2.1 将预制胶放置于 ChemiDoc MP 成像系统中，对免染预制胶成像。
Tips: 凝胶激活时间 5min 。
3. 蛋白转印（使用 Turbo 转印系统，提高转印效率及速度）
3.1 取出 Turbo 快速转印包（ 1704274），凝胶放置好，组成三明治结构，放置于 Turbo 中，设定好
程序（ 1 mini TGX gel ），运行 3min 。
3.2 转印结束后，取出三明治结构，取出膜及胶准备成像。
Tips: 转引包预冷条件下，效果更佳。
4. 确认转印（ Verify ）（无需丽春红染色，即可确认转印效率）
4.1 将转印后的预制胶放置于 ChemiDoc MP 成像系统中， “激活凝胶”选项选择“否” ，曝光时间
与前次一致，进行成像，可确认转印效率。
4.2 将转好的膜放置于 ChemiDoc MP 成像系统中，对膜进行成像。
5. 结果定量（ Validate ）（总蛋白归一化的优势）
5.1 使用模拟 ChemiDoc MP 的结果，展示如何在蛋白印记分析中以免染总蛋白作为归一化工具。
浙公网安备 33021202002483