（Excellenthandouttrainingtemplate）FISH技术临床应用荧光原位杂交（FluorescenceinsituHybridization，FISH）基本原理：应用荧光染料标记探针DNA，变性成单链后与变性后的染色体或细胞核靶DNA杂交，在荧光显微镜下观察并记录结果。生命科学中的“钓鱼”技术操作
流程
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简图制片预处理FISH结果分析破坏细胞膜利于探针杂交。蛋白酶消化、HCl处理变性杂交洗涤复染制备的质量新鲜程度操作流程简图标本为新鲜细胞制片：阈值建立采集20例正常人细胞。阈值测定：每例分析至少100个细胞，统计出现2个以上阳性信号细胞数目的百分比。阈值=平均数（M）+3X
标准
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差（SD）结果判断每例样本随机计数细胞（至少100个）如果检测值>阈值，判定为阳性结果；如果检测值<阈值，判定为阴性结果；如果检测值=阈值，加大观测样本细胞数目。结果判断FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用FISH技术在产前诊断中的应用FISH在泌尿系肿瘤中的应用FISH技术在宫颈癌检测中的应用其它FISH技术的临床应用FISH在血液及淋巴肿瘤中的应用赵荣骨髓象(CML)赵荣血象（CML）覃长江血象(MD/MPD)覃长江骨髓象(MD/MPD)BCR/ABL阴性(图片来自覃长江)MD/MPDBCR/ABL阳性(图片来自赵荣)CML陆晓逸骨髓象（CLL）D13S25/P53基因阴性（来自陆晓逸）CSP12基因阴性（来自陆晓逸）PML/RARa阳性(图片来自卜丽敏)PML/RARa阴性(图片来自彭志新)卜丽敏骨髓象FISH技术在产前诊断中的应用染色体异常的发生机率出生婴儿0.6%先天性智力障碍（MR）患者23%先天性心脏病13%SAB夫妇5%死胎和围产期死亡胎儿6.0%自然流产(前三个月)60%唐氏综合症21号染色体三体,95-97%多余的染色体来自母亲,唐氏综合症与母亲的年龄有关系,确切的病因不是很了解.活产新生儿发病率为1/800to1/1,100,唐氏综合症与文化、种族、社会阶层以及地理区域都没有必然的联系。智能较正常儿童低，认知困难，发育迟缓。他们也有很特殊的面貌，通常双眼距离较远、眼睛向上斜、鼻梁骨平坦，嘴、牙齿及耳朵均细小。肌张力低。Turner综合症1个x染色体的全部或者部分丢失，只发生在女性。是最常见的染色体异常导致的疾病(活产女性新生儿发病率大约为1/2500)身材矮小、卵巢不发育、性幼稚、蹼颈、肾脏和甲状腺有问题,骨骼畸形等生长激素治疗,雌激素替代治疗等21+13+GLP13/GLP21阴性FISH在泌尿系肿瘤中的应用常用诊断及监测膀胱癌膀胱镜检查：病人痛苦，难以接受细胞形态学检测：敏感性低尿液中抗原检测：虽灵敏性高于细胞形态学检测，但特异性较低，不能成为可靠的诊断指标。概述FISH检测：9号染色体部分（如p16位点）或全部丢失。3号、7号及17号染色体的非整倍性。膀胱癌的灵敏度大约80%,特异性大约96%非创伤性及非痛苦性概述疾病名称检测探针标记颜色探针定位探针名称患者中常见异常类型膀胱癌GLPP16/CSP17红/绿P16：9p21CSP17:17p11.1-q11.1P16：细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子2ACSP17:17号染色体着丝粒P16缺失；17号染色体非整倍性临床意义随着对膀胱癌遗传学改变的深入研究，人们发现9号染色体部分（如p16位点）或全部丢失是最常见遗传学改变，且这一改变与膀胱癌的早期发生密切相关。P16为抑癌基因，通过CDK4对细胞增殖分裂起负调控作用，CDK4与cyclinD形成复合物促进细胞从G1-S转换，促进细胞有丝分裂，P16基因异常在膀胱癌发生早期出现.膀胱癌FISH探针组(一)疾病名称检测探针标记颜色探针定位探针名称患者中常见异常类型膀胱癌CSP7/CSP3红/绿CSP7:7p11.1-q11.1CSP3:3p11.1-q11.13、7号染色体着丝粒3、7号染色体非整倍性临床意义膀胱癌的发展与染色体不稳定性紧密相连，特别是与3号、7号及17号染色体的非整倍性密切相关。3、7、17染色体的不稳定性与肿瘤的浸润行为有关，3，7，17改变在病程发展中出现。膀胱癌FISH探针组(二)CSP7/CSP3阴性CSP7/CSP3阳性FISH技术在宫颈癌检测中的应用传统巴氏细胞学涂片&液基薄层细胞检测(TCT）HPV病毒检测荧光原位杂交（FISH）检测临床检测
方法
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方法特异性（％）敏感性（％）形态学检测9055-80HPV检测64－9584-100FISH9090三种检测方法比较TERC（人类染色体末端酶）基因定位在3q26.3，该基因的扩增可阻止细胞凋亡，导致肿瘤产生宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有3号染色体长臂扩增。其中，涉及到的最重要的基因可能是TERC基因。该基因扩增能准确区分宫颈细胞高度癌前病变与低度癌前发育异常，鉴别诊断的敏感性及特异性均在90%以上；同时，这一扩增也能预测52%－96%的癌前病变有恶变的可能hTERC基因扩增的检测极有助于宫颈癌的筛查及早期诊断检测这一基因扩增的标准方法即为FISH技术宫颈癌&TERC基因GLPTERC/CSP3阴性GLPTERC/CSP3阳性演讲结速，谢谢观赏！Thankyou.PPT常用编辑图使用方法1.取消组合2.填充颜色3.调整大小选择您要用到的图标单击右键选择“取消组合”右键单击您要使用的图标选择“填充”，选择任意颜色拖动控制框调整大小商务图标元素商务图标元素商务图标元素商务图标元素
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