实验样品采集运输保存方法

TheponywasrevisedinJanuary2021实验样品采集运输保存 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.RNA实验样品采集、保存方法使用范围及样品量类别：MicroarrayService；SequencingService;PCRArray&PCRService样本量：样本样本量动物组织样品50-100mg哺乳动物培养细胞样品（悬浮细胞）1*107个哺乳动物培养细胞样品（贴壁细胞）15cm2植物组织样品100mg-1g，根据植物不同部位的组织决定组织需要量，尽可能多些，但不必超过1g动物组织样品新鲜组织样品A.使用RNAlater试剂取新鲜组织（注：动物死亡后尽快在10min内取材），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，所用组织必须切至厚度在一下，然后放入装有5倍体积RNAlater的离心管（或冻存管）中。4度孵育过夜，此时样品管需要横置以便组织块充分接触到RNAlater，然后转入-20中保存，样品在-20不会冻结，但溶液中可能会有一些晶体出现，这并不影响后续的RNA抽提。B.使用Trizol试剂取新鲜组织（1min以内），组织块以PBS或生理盐水清洗干净，每50-100mg组织加入1mlTrizol溶液匀浆裂解组织样品，最好冰上进行操作。匀浆的裂解液4度短期保存（1month），-20或者-70度长期保存。冻存组织生物体死亡后尽快（10min以内）切取新鲜组织，并以PBS或生理盐水清洗干净切成小块；培养液倒入离心管中，离心沉淀细胞，弃去上清液。细胞沉淀（1*107个）中加入1mlTrizol裂解液反复吸打几次后，目视可见细胞层溶液完全-70保存贴壁细胞从培养容器中吸出并弃去培养液培养瓶直接加入Trizol试剂，Trizol用量与细胞贴壁面积有关，15cm2细胞贴壁面积加入1mlTrizol。反复吸打几次后，目视可见细胞层溶解完全。-70度保存。植物组织样品准确取得所需新鲜组织后，如有必要可用PBS清洗干净，将所用组织切碎，装入冻存管中或者用锡箔包裹好。立即投入液氮中保存。2.血液类样品采集、保存方法适用范围及样品量全血/血细胞：MicroarrayService；SequencingService;PCRArray&PCRService血清/血浆：MicroarrayService；PCRArray&PCRService样本量样本样本量全血1-2ml（即每份样品2-4管）血浆1-2ml（即每份样品2-4管）血清1-2ml（即每份样品2-4管）在样品保存及转移过程中，应避免反复冻融样品一般建议用新鲜的血液标本进行试验，如果标本已经保存较长时间，请先联系技术部门确认样本是否适合进行实验。全血采集好全血，转移至单独的冻存管中，按照每400-500ul/管分装。短期保存可以再-20度或者-70度冰箱；长期保存放入液氮。血浆使用抗凝管采集全血，并尽快进行血浆分离：1000g离心10min，分离血浆和细胞组分（抗凝剂一定不能是肝素）将采集好的血浆转移至单独的冻存管中，按照每400-500ul/管分装。短期保存可以再-20度或者-70度冰箱；长期保存放入液氮。血清使用凝血管采集全血，采血后两小时内分离血清；采血后轻轻倒转采血管混合4-5次，直立置于室温待血液完全凝固，1000g离心10min，分离血清。将采集好的血清转移至单独的冻存管，按照每400-500ul/管分装。短期保存可以再-20度或者-70度冰箱；长期保存放入液氮。从全血中提取白细胞抗凝血收集取无菌的15ml离心管一只，首先用EDTA或者柠檬酸钠溶液充分吹打管壁，使离心管壁完全接触到该溶液，而后在管底留下少许该溶液（200ul左右）收集5ml全血后迅速用枪混匀或用手指拨动离心管底部混匀。防止部分血液凝固。全血白细胞分离（以3ml抗凝血为例说明）向一只15ml离心管中加入3ml抗凝血，而后加入9ml红细胞裂解液。盖紧管盖，温柔的颠倒混匀数下，不要剧烈震荡将离心管置于室温放置10min将离心管以2500g离心5min弃上清，尽可能将上清吸净，勿吸到管底白色斑块细胞弃去上清后在管底出现可见的白色斑块，此斑块为富集的白细胞。如果裂解不完全加入1mlPBS缓冲液重悬，然后重复第一步充分裂解后，加入1mlPBS缓冲液清洗一次2500g离心5min弃上清，可获得血液样品中全部白细胞的80%以上，而后可加入适量的Trizol，用移液枪充分吹打，混匀，直至出现清亮不粘稠的液体。而后可以将以上的Trizol试剂存在生物冰（0-4度）寄送，或者直接干冰寄送。实验样品采集、保存方法适用范围及样品量适用范围：MicroarrayService；SequencingService;PCRService样品量样本样本量细胞1*107个组织50-100mg悬浮细胞约1*107个细胞，低速离心收集，弃去培养液；加入2-5mlPBS悬浮细胞，转入小离心管中；低速离心沉淀细胞，弃去PBS；放入-70度冰箱保存。对于ChIP-chip实验为了获得理想结果，建议根据下述方法处理及保存悬浮细胞样品取107个悬浮细胞低速离心，用10ml培养基将细胞沉淀重悬于50ml离心管中；加入270ul37%的甲醛，轻轻混匀，室温孵育10min；该步骤最好在通风橱完成加入1ml的甘氨酸，轻轻混匀，室温孵育5min，中和甲醛；2000g离心5min，弃上清，用预冷的PBS/EDTA洗细胞两遍2000g离心5min，弃上清；收集到的样品-80度冻存。贴壁细胞约1*107个贴壁细胞，胰酶消化；加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体；加入2-5mlPBS悬浮细胞，转入小离心管中；低速离心沉淀细胞，弃去PBS放入-70度冰箱保存。对于ChIP-chip实验为了获得理想结果，建议根据下述方法处理及保存贴壁细胞样品组织采集新鲜组织（生物体死亡后10min内取材并保存好）组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块放入液氮或-70度冰箱保存4.蛋白实验样品采集、保存方法适用范围及样品量适用范围：MicroarrayServiceOtherService样本量：样本样本量血清和血浆100-200ul细胞107个组织50-100mg血清和血浆采集新鲜血液，分离血清或血浆，放入-20度或者-70度冰箱保存悬浮细胞约1*107个细胞，低速离心收集，弃去培养液；加入2-5mlPBS悬浮细胞，转入小离心管中；低速离心沉淀细胞，弃去PBS；放入-70度冰箱保存。贴壁细胞约1*107个贴壁细胞，胰酶消化；加入PBS悬浮细胞，低速离心收集，弃去液体；加入2-5mlPBS悬浮细胞，转入小离心管中；低速离心沉淀细胞，弃去PBS放入-70度冰箱保存。组织采集新鲜组织（生物体死亡后10min内取材并保存好）组织块以PBS或生理盐水清洗干净，切为小块放入液氮或-70度冰箱保存5.样品保存和运输注意事项将收集的各类样品用冻存管或离心管装好，保存在低温冰箱或者液氮中。所使用的冻存管或离心管、枪头等必须高温灭菌处理，装好样品后管口需要以封口膜封好。注意已保存的样品不要反复冻融。干冰运输根据干冰量准备大小适当的泡沫盒，在其中放入干冰（需要10公斤，至少为8公斤）和标本（用塑料袋或者塑胶手套装好），盒子内的空隙用旧报纸塞满，以防干冰挥发后有液体流出。泡沫盒须选择较厚的，以免在运输过程中破碎导致样品丢失，分别用封箱带密封。最后在外面套上一个纸盒子，也要用胶带密封。冰袋运输保存在RNAlater中的组织样本；保存于Trizol中的细胞样本或经过匀浆的组织样本在短期（5day）可使用冰袋运输。液氮运输冻存组织需要干冰或液氮运输。液氮无法快递，适合市内运输。常温运输本市内细胞样品也可以直接常温运送，运送时在培养瓶中装满培养液并以封口膜封口，然而某些实验条件中包含时间限制，建议冻存后运输。样品运输注意事项打包好的样品交于快递公司，不提及干冰等字样快递寄出，将快递单号告知销售，以便跟踪快递进程务必在周日、周一、周二寄出快递，以免到达上海的时间是周末，公司无法查收。