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3羟丁酸

牛庆慧　江月萍　王光兰等

[Summary] 目的 建立简便和灵敏的双试剂自动化分析法测定血清D-3羟丁酸。 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 在NAD和D-3羟丁酸脱氢酶存在下，用氯化硝基四氮唑兰（NBT）作为显色剂测定血清中的D-3羟丁酸。 结果 该法线性范围为0～7.0mmol/L，平均回收率为98.7%，批内变异系数和批间变异系数均小于2%，与对照试剂盒比较有良好的相关性（r2 =0.996），具有良好的抗干扰能力。150例健康人血清D-3羟丁酸含量为0.03～0.30mmol/L。 结论 NBT自动分析法测定D-3羟丁酸方法简便、灵敏可靠、适合临床应用。

[Key] D-3羟丁酸；血清；自动分析法；NBT

[] R446.1 [] B [] 2095-0616（2014）13-115-03

[Abstract] Objective To establish a simple and sensitive automatic method for determination of D-3-hydroxybutyric acid in serum with two reagents. Methods With the existence of NAD and D-3-hydroxybutyrate dehydrogenase， D-3-hydroxybutyric acid in serum was determined by NBT as a color-developing agent. Results The linearity range of the method was 0-7.0 mmol/L， average recovery rate was 98.7%， and both the intra-assay and inter-assay coefficients of variation were less than 2%. There was a good correlation compared with the reference kit （r2=0.996）， and the capacity of resisting interference was good. The concentration of D-3-hydroxybutyric acid in the serum of 150 healthy people was 0.03-0.30 mmol/L. Conclusion The NBT automatic analysis method for determination of D-3-hydroxybutyric acid is simple， sensitive and reliable， which is appropriate to be applied clinically.

[Key words] D-3-hydroxybutyric acid； Serum； Automatic analysis method； NBT

糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病，酮症及酮症酸中毒是糖尿病患者最常见的并发症[1-2]，糖尿病酮症酸中毒是指糖尿病患者在各种原因的作用下，胰岛素不足，生糖激素异常升高，而导致的高血糖、高血酮、水电解质酸碱失衡等。在肝脏中，脂肪酸氧化分解的中间产物乙酰乙酸、D-3羟丁酸及丙酮，三者统称为酮体，其中D-3羟丁酸是酮体主要的成分，约占其总量的70%，因此临床以检测血清中D-3羟丁酸的浓度来反映体内酮体的水平[3-4]。D-3羟丁酸检测方法有气相色谱法[5]、分光度法和酶法，酶法在准确性、抗干扰能力和重复性等方面具有特殊的优势[6]，但价格都比较昂贵。而国内现有国产D-3羟丁酸试剂盒所用的显色剂均为INT，还没有使用NBT作为显色剂的方法。我们首次报道以NBT作为显色剂，双试剂两点终点法自动化测定血清D-3羟丁酸的新方法。该法准确、灵敏、稳定，值得临床推广。

实验原理：采用酶化学比色法来测定血清中的D-3羟丁酸，先将血清中的D-3羟丁酸氧化为乙酰乙酸，同时将辅酶Ⅰ还原为还原型辅酶Ⅰ，还原型辅酶Ⅰ在黄递酶的催化下将NBT生成红色显色物质，在505nm处检测吸光度的变化来计算血清中D-3羟丁酸的浓度。

D-3羟丁酸 +辅酶Ⅰ乙酰乙酸 +还原型辅Ⅰ

还原型辅酶Ⅰ+NBT formazane（红色）

1 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与方法

1.1 试剂

2 结果

2.1 灵敏度

将总浓度为1.0mmol/L的D-3羟丁酸用生理盐水将做100倍稀释，同时测定10次，分别计算出各浓度梯度的标准差和平均值；当D-3羟丁酸的浓度为0.01mmol/L时，平均值-3标准差>3标准差。 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 明灵敏度可达0.01mmol/L。

2.2 线性范围

使用生理盐水对1份D-3羟丁酸浓度为8mmol/L的高值血清样本进行稀释，分别是0.01、0.02、0.04、0.08、0.20、0.40、0.80、2.00、4.00、8.00mmol/L 10个不同浓度，各浓度均检测5次， 进行相关分析，以每个浓度对应的吸光度值为y，对应的理论浓度为x。发现在0.01～8.00mmol/L浓度梯度内线性回归方程为y=1.0023x + 0.0032，r2=0.996，表明该方法在此浓度范围内呈线性。

2.3 精密度

分别对RANDOX公司的低值和高值质控以及1份患者随机血清共3个样本每天测定3次，检测平均值和变异系数（CV值），连续测定20d。见表1。

2.4 方法对比试验

分别用德国Diasys公司D-3羟丁酸试剂盒（x）和本试验方法（y）对80份浓度范围在0.01～8.00mmol/L的D-3羟丁酸临床血清标本进行检测，试验结果进行相关性分析，考察两种方法的相关性，最终得到的结果为：y=0.975x+0.34，r2=0.995，实验结果表明，本方法的实验结果与德国Diasys公司的D-3羟丁酸试剂盒具有良好的相关性。

2.5 回收试验

用RANDOX的D-3羟丁酸浓度为0.5mmol/L标准血清进行回收试验，来评价此方法的准确性，分别加入0.124mmol/L、0.642 mmol/L、2.471mmol/L的标准液，用来组成基础样本、回收样本1和回收样本2，回收率（%）=（回收样本检测值-基础样本检测值）/加入的标准液浓度，最终计算回收率为96.2%～102.4%，平均回收率为98.7%，说明该方法具有不错的检测准确性。

2.6 干扰试验

取1份混合血清，分别配成不同浓度的胆红素、甘油三酯和血红蛋白血清样本，使用生理盐水作对照，各个样本均检测10次，最终分析发现：三种常见的干扰物分别在100mg/dL、200mg/dL和200mg/dL时，对本试剂几乎无干扰。

2.7 稳定试验

加入防腐剂和稳定剂后，放于37℃中保存10d稳定性正常，测定结果没有明显变化，在4℃中能够开口保存30d稳定性正常。

2.8 正常参考范围

选择150名体检合格成年人，男80名，女70名，年龄20～65岁。空腹静脉取血，用本法测的P2.5=0.03，P97.5=0.3因此得出正常人随机血清D-3羟丁酸含量参考范围是0.03～0.30mmol/L。

3 讨论

近年来，我国糖尿病患病率逐渐增加，当发生此病机体细胞内葡萄糖的氧化利用障碍，此时机体动用体内脂肪，通过脂肪分解供能，肝脏脂肪酸代谢旺盛，产生大量酮体，从而导致酮症酸中毒的发生，所以及时准确的诊断此症的发生，对后续治疗有较大的临床意义。测定血液中D-3羟丁酸的浓度对糖尿病酮症酸中毒的诊断有着重要意义。在酮症酸中毒早期，尿酮水平无法测定时，血液中D-3羟丁酸即可测定。当患者出现酮症酸中毒的时候，血液中D-3羟丁酸浓度升高，此时检测血液中D-3羟丁酸浓度可以有效的检测患者的病情以及预测预后。目前国产试剂中均使用了INT作为显色剂，这种试剂具有稳定性差，使用不方便等方面的问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 ，故建立了一种新型的检测D-3羟丁酸的方法非常有必要[10-12]。

试剂中我们对黄递酶和D-3羟丁酸的浓度进行了梯度分析，最终选择现在的浓度，这样既保证了反应的线性和准确性，又可以通过添加保护剂保证了酶的稳定性，而且可以去除胆红素、甘油三酯的干扰。通过回收试验和对比试验，试剂的准确性较高。通过精密度试验，试剂的重复性较好。同时该方法的灵敏度为0.01mmol/L，该灵敏度完全能够保证临床检测的需要。0.01～8.00mmol/L的检测线性范围，与国外的试剂相比，具有更宽的线性范围，能够保证高值样本准确的检测。从稳定性试验来看，该方法在该试剂在37℃和开口4℃中均能够保证很好的稳定性，解决了保存的问题，表明在方法的试剂在市场应用中具有很好的前景。我们研究使用NBT作为显色剂的D-3羟丁酸试剂盒相比现有的试剂盒拥有更好的线性范围和稳定性，而准确性与国外的试剂盒比较也有很好的相关。实验结果表明选用NBT作为显色剂的该检测方法具有很好的前景，是一种适用于临床的值得推广的方法。

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（

-全文完-