实验一绪论及坐骨神经-腓肠肌标本制备

实验一绪论及坐骨神经-腓肠肌标本制备 渤海职业学院生理教研室 第一部分 生理学实验课绪论 一、生理学实验的目的 1(使学生逐步掌握生理学实验的基本操作技术，了解生理学实验 设计 领导形象设计圆作业设计ao工艺污水处理厂设计附属工程施工组织设计清扫机器人结构设计 的基本原则，进一步了解获得生理学知识的 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 ，验证和巩固生理学的某些基本理论。 2(提高学生对实验中各种生理现象的观察能力、 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 能力、独立思考和独立解决问题的能力。 3(在实验过程中，逐步培养学生在科学工作中的严肃的态度、严格的要求、严格的方法和严谨的作风。 二、生理学实验课的要求 (一)实验前 1. 教师集体备课 2(学生预习 (二)实验过程中 1. 教师应严格要求学生 2(学生应认真、仔细操作，观察实验现象，并如实 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 ，对引起各种生理现象的原因、意义进行分析与思考。 3(实验器材要安放整齐，布局合理，便于操作。要保持清洁卫生，随时清除污物。实验桌上不得放置与实验无关的物品。 4(爱护仪器与实验动物，注意节约各种实验材料。公用物品在使用完毕后应放回原处，以免影响别人使用。 5(保持实验室安静，不得嬉笑与高声谈话，以免影响别人实验。 6(遵守实验室规则，注意实验小组内的团结、配合与分工协作。 (三)实验后 1(学生应将实验用具整理就绪，放回原处。所用手术器械必须擦洗干净。实验用具如有损坏或缺少，应即报告指导教师。作好实验室的清洁卫生工作。 2(妥善处理实验动物，如实验结束后动物尚未死亡，应在教师指导下处死，而后放于指定地点。 3(整理实验记录，认真书写、及时交实验报告。 4(教师应认真批改实验报告。如发现不符合要求的实验报告，应指明问题，退回重写。 三、实验报告的书写 (一)实验结束后，均需根据指导教师的要求，每人写一份实验报告，并按时完成，及对送交指导教师评阅。 (二)书写实验报告要求文字简练、通顺，书写清楚、整洁，正确使用标点符号。 (三)在书写实验报告时，提倡学生间的相互讨论和争辩，但必须自己独立完成。否则，应重写。 (四)实验报告的格式与内容 1(注明姓名、专业、组别、日期。 2(实验序号及题目。 3(实验目的要求。 4(实验方法 应根据教师的具体要求写。一般情况下或重复使用的方法，可作简要说明。 5(实验结果 实验结果是实验报告的重要部分，应将实验过程中所观察或记录到的生理效应忠实地、正确地记述和说明。结果部分常需用实验记录，这就需要将实验记录进行合理地加工与剪贴，并加图号、图注及必要的文字说明。不得将原始记录原封不动地附在报告上。凡属定量的测量资料，均应以正确的单位和数值严格地写在报告上。 为了便于说明和比较，有些实验结果可以列表或绘图表示。 6(讨论与结论 讨论是根据所学的理论知识，对实验结果进行科学地分析和解释，并判断实验结果是否是预期的。如果出现非预期的结果，应分析其可能的原因。 讨论是实验报告的核心部分，可以帮助学生提高独立思考和分析问题的能力。不应盲目抄袭书本，应提倡学生根据自己的实验结果提出创造性的见解和认识，但必须是严肃认真、有科学依据的。 结论是从实验结果和讨论中归纳出一般的概括性的判断，也就是这一实验所验证的基本概念、原则或理论的简明总结。结论的书写应该是简明扼要的。 四、常用手术器械 2 常用手术器械包括手术刀、手术剪、手术镊、粗剪刀、蛙类毁髓针(探针)、玻璃分针等。 1(手术刀:执刀方法介绍 2(手术剪:剪皮肤或肌肉等粗软组织，也可用来分离组织。弯型手术剪剪毛。眼科剪主要用于剪血管或神经等柔软组织。 3(手术镊:主要用于夹持或牵拉切口处的皮肤或肌肉组织。眼科镊用于夹持细软组织。 4(粗剪刀:可用于剪皮肤、肌肉、内脏、骨髓以及结线等。 5(探针:毁坏蛙类脑髓和脊髓的器械。 6(玻璃分针 :分离神经与血管。 7(止血钳: 主要作用是分离组织和止血。 8(缝针 9(动脉夹:主要用于短期阻断动脉血流，如插动脉插管时使用。 五、实验动物的选择和麻醉 (一)动物的选择 健康的狗、猫、兔、大白鼠、小白鼠、豚鼠、蟾蜍或蛙等， 动物种类的选择需根据实验内容而定。 (二)动物的麻醉 适宜的麻醉状态是呼吸深慢而平稳，角膜反射与运动反应消失，肌肉松弛。 1. 常用麻醉剂的种类及用法 生理实验中多采用全身麻醉剂: (1)乙醚:是一种吸入性麻醉剂，适用于各种实验动物。 (2)戊巴比妥纳:适用于各类实验动物。常配制成3%的水溶液，一般由静脉或腹腔注射。 (3)氨基甲酸乙酯:又名乌拉坦或脲酯。常用浓度为20—25%。适用于多数动物:狗、猫、兔多用静脉或腹腔注射，蛙类用皮下淋巴囊注射。 (4)氯醛糖:常用浓度为1%，使用前须加热促其溶解，但不可煮沸。常采用静脉或腹腔注射。 2(麻醉剂的给药途径及方法 3 1) 静脉注射 2) 腹腔注射 3) 肌肉注射 4) 皮下注射 4 实验一 坐骨神经-腓肠肌标本的制备(必做) 【目的要求】 1(学习蛙类动物双毁髓的实验方法。 2(学习并掌握坐骨神经-腓肠肌标本的制备方法。 【动物与器材】 蟾蜍或蛙、常用蛙类手术器械、蛙板、玻璃板、固定针、锌铜弓、培养皿、滴管、纱布、粗棉线、任氏液。 脑和脊髓:讲握蟾蜍方法，进针部位和损毁方法。 1(损毁 2、去除躯干上部及内脏 3、剥皮 4、分离两后肢:注意操作要小心，切勿剪断坐骨神经。取一只后肢继续剥制标本，另一只放入任氏液中备用。 5、制备坐骨神经-腓肠肌标本 1) 取一侧下肢，腹位置于蛙板上。找到梨状肌，将其在尾骨的附着处剪断。小心分离其下的坐骨神经，认清坐骨神经在此处发出的3 个分支。在分支的中枢端结扎坐骨神经，并在结扎线的中枢端以及3 个分支的外周端剪断坐骨神经。轻轻提起结扎线，细心地对3 个分支略加分离，确认 从内直肌和半腱肌之间进入大腿腹面的一支，注意:此分支为支配腓肠肌的 神经。再将其它两个分支自坐骨神经起始处剪断，将保留的一支神经置于由 任氏液湿润的棉球下以保护之。 2)翻转下肢标本，将其背位置于蛙板上，找到腓肠肌。用尖镊子在其胫 骨附着点腱膜下开一小孔，穿线结扎。提起结扎线，用手术剪将结扎线外侧 的腱膜剪断。 3)轻轻提起结扎线，用眼科剪沿缝匠肌外侧缘仔细剪开肌膜，直至缝匠 肌在耻骨联合的附着处。为保护肌纤维，可在附着处剪下少量耻骨。用玻璃解剖针将缝匠肌以内侧缘为轴翻转180?，使其内表面向上，即可清楚地看到支配肌肉的神经在其下1/3 的内侧缘进入肌肉。随后将肌肉翻正复原，用眼科剪沿内侧缘由前向后剪开肌膜。注意:留下约2mm 神经进入处的肌膜，以便在下一步操作中保护神经不被牵拉。 5 4)用玻璃解剖针分离内大收肌和股内直肌，将在背面已分离的神经由分 离处穿至腹面，在此过程中需将支配其它肌肉的神经分支一一剪断。注意: 勿伤及支配缝匠肌的神经，这样即可把坐骨神经-缝匠肌分离出来。用镊子分别夹住耻骨和结扎线。 6、制备完整的坐骨神经-腓肠肌标本 7、检验标本的兴奋性 将标本移至盛有任氏液的培养皿内，用锌铜弓检查标本。 【注意事项】:制备标本过程中经常用任氏液湿润去皮的标本。 【思考题】 1(剥去皮肤的后肢，能用自来水冲洗吗,为什么, 2(金属器械碰压、触及或损伤神经及腓肠肌，可能引起哪些不良后果, 3(如何保持标本的机能正常, 6 实验二 刺激强度和刺激频率与肌肉收缩的关系(选做) 一、刺激强度与肌肉收缩的关系 【目的要求】 1(学习神经-肌肉实验的电刺激方法及肌肉收缩的记录方法。 2(观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。 【基本原理】 腓肠肌由许多肌纤维组成，当刺激支配腓肠肌的坐骨神经时，不同的刺激强度会引起肌肉的不同反应。当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩反应，此时的刺激为阈下刺激。当刺激强度逐渐增强时，可引起少数肌纤维发生收缩反应，这种最小收缩反应的有效强度为阈强度。随着刺激强度的加大，参加收缩反应的肌纤维数量增多，收缩力量也加大，此时的刺激为阈上刺激。当全部肌纤维同时收缩时，即出现最大的收缩反应，即使冉增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大。可以引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激强度。 【动物与器材】 蟾蜍或蛙的坐骨神经-腓肠肌标本、常用手术器械、BL-410生物信号处理系统及张力换能器、肌槽、培养皿、滴管、任氏液。 【方法与步骤】 1(将标本固定在肌槽内并连接记录系统。 2. 由弱至强调节单脉冲刺激强度，记录刺激强度及收缩曲线。 3(当刺激强度达到某一数值后，肌肉收缩曲线不再随刺激强度的增加而升高，即为最适刺激强度，记录。 【思考题】 1(如何保持标本在实验过程中机能稳定, 二、刺激频率与肌肉收缩的关系(选做) 【目的要求】 1(了解骨骼肌收缩的总和现象。 2(观察不同频率的阈上刺激引起肌肉收缩形式的改变。 7 【基本原理】 两个同等强度的阈上刺激，相继作用于神经-肌肉标本，如果刺激间隔大于单收缩的时程，肌肉则出现两个分离的单收缩;如果刺激间隔小于单收缩的时程，则出现两个收缩反应的重叠，称为收缩的总和。当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，出现多个收缩反应的融合，称为强直收缩。后一收缩发生在前一收缩的舒张期时，称为不完全强直收缩。后一收缩发生在前一收缩的收缩期时，各自的收缩完全融合，肌肉处于持续的收缩状态，称为完全强直收缩。 【动物与器材】 蟾蜍或蛙、常用手术器械、肌槽、BL-410生物信号处理系统及张力换能器、培养皿、滴管、任氏液。 【方法与步骤】 1(制备坐骨神经-腓肠肌标本并将其固定在肌槽上。选择适当刺激强度，以单脉冲刺激神经，记录肌肉收缩曲线。 2(刺激强度不变，以较长的间隔输出两个单脉冲刺激标本，肌肉则出现两个分离的单收缩，记录收缩曲线。 3(用同等刺激强度，缩短刺激间隔，刺激标本，记录肌肉收缩曲线。 4(改用连续刺激，以2次/s的频率刺激标本，记录肌肉收缩曲线。 5(依次改变刺激频率为6次/s、10次/s、20次/s和25次/s，记录肌肉收缩曲线。 【注意事项】:实验过程中要经常用任氏液湿润标本，每次刺激后应使肌肉休息30s。连续刺激不可超过5s。 【思考题】 1(讨论肌肉发生不完全强直收缩及完全强直收缩的条件，人们日常生活中哪些 动作属于强直收缩。 8 实验三 神经干动作电位的测定 (选做) 【目的要求】 1( 了解单相、双相动作电位的形成和波形，理解其产生的原因 2( 熟悉电生理仪器的使用方法。 【基本原理】 动作电位是神经兴奋的客观标志，表现为正处于兴奋的部位相对于静息部位来说呈负电性质，因此兴奋区和静息区之间存在电位差。若将两个记录电极置于完整的神经干表面，当动作电位先后流过二电极时，可记录到双相的曲线，叫做双相动作电位;若将两个记录电极置于神经干损伤部位的两侧，因神经纤维的完整性被破坏，动作电位传导受阻后，只能记录到单相的曲线，叫做单相动作电位。神经纤维的动作电位是“全或无”的，神经干是由许多神经纤维组成的，由于不同神经纤维的兴奋性不同，故神经干的动作电位与神经纤维的不同。神经干动作电位的幅度在一定范围内可随刺激强度的变化而变化，而不是全或无的。 【动物与器材】 蟾蜍或蛙，蛙手术器械、SBR-1型双线示波器、电子刺激器、刺激隔离器、神经标本屏蔽盒、蛙板、小烧杯、滴管、滤纸片、锌铜弓、任氏液、3mol/LKCl溶液。 【方法与步骤】 (一)坐骨神经干标本制备 按实验一剥制坐骨神经干标本，并在坐骨神经游离至膝关节处后再继续向下剥离，在腓肠肌两侧肌沟中找到胫神经和腓神经，任剪断一支而保留另一支，直到足趾，用线结扎后剪断。在制备过程中，要把神经周围的结缔组织分离干净，但勿损伤神经标本。 (二)仪器连接: (1)连接神经屏蔽盒和示波器。 (2)将神经屏蔽盒内所有电极用浸有任氏液的棉球擦净，保持盒内一定湿度，以免神经标本干燥。 (三)神经干动作电位观察 9 1(标本放置:用滤纸片吸去神经标本上过多的任氏液。用手术镊夹持标本两端的结扎线，将标本移至神经屏蔽盒内。盒内装有两对电极和一根接地线电极。其中一对为刺激电极，一对为引导电极，两对电极之间为一根接地电极。神经标本必须与5根电极良好地接触。神经标本的放置方向是中枢端接触刺激电极，外周端接触引导电极。 2(双向动作电位:增强刺激强度时可见动作电位在一定范围内随强度变化而变化。调节刺激强度，使其从0逐渐增加。当强度达到一定数值时，即可出现双相动作电位。当神经未受刺激时，两电极A、B之间无电位差，显示器扫描光点为一水平基线。当神经C处受到一次适宜强度的刺激即产生一个动作电位(即负电变化)，当动作电位传到电极A下方时，A、B间出现电位差，显示器上扫描光点向上偏转(电生理实验中，习惯规定负波向上)，当动作电位移到A、B间，A、B两点又无电位差，动作电位继续右移到B下时，A、B间又有电位差出现，且倒置，引起显示器光点向下偏转。所以显示器上显示了一个双相动作电位。 3(单相动作电位:用手术镊将两记录电极之间的神经夹伤，或用一小块浸有3mol/LKCl溶液的滤纸片贴附在引导电极处的神经干上，此时冲动则本能由A点传至B点，静息时A、B间电位相等。当刺激神经时，产生的动作电位只能传到损伤处，所以只能引起光点向上偏转一次，示波器上仅显示出一个单相动作电位。 【思考题】 1(说出动作电位的产生原理, 10 实验四 期前收缩与代偿间歇(选做) 【目的要求】 1(观察心室在收缩活动的不同时期对额外刺激的反应。 2(了解心肌兴奋性的变化及代偿间歇的发生机理。 【基本原理】 心肌的机能特征之一是具有较长的不应期，绝对不应期几乎占整个收缩期。在心室收缩期给以任何刺激，心室都不发生反应。在心室舒张期给以单个阈上刺激，则产生一次正常节律以外的收缩反应，称为期外收缩。当静脉窦传来的节律性兴奋恰好落在期外收缩的收缩期时，心室不再发生反应，须待静脉窦传来下一次兴奋才能发生收缩反应。因此，在期外收缩之后，就会出现一个较长时间的间歇期，称为代偿间歇。 【动物与器材】 蟾蜍或蛙、常用手术器械、蛙板、蛙心夹、电极、BL-410生物信号处理系统及张力换能器、橡皮泥或电极支架、滴管、任氏液 【方法与步骤】 1(损毁脑和脊髓，打开胸腔并暴露心脏，背位固定于蛙板上，连接刺激和描记装置。 2(记录正常心搏曲线作为对照。 3(选择刚能引起心室发生期外收缩的刺激强度(于心室舒张期调试)，分别在心室收缩的收缩期和舒张期给予单个刺激，观察心搏曲线有无变化 4(以同等刺激强度，分别在心室舒张的早期、中期和晚期给予单个刺激，观察心搏曲线的变化。 【思考题】 1(实验结果说明心肌的哪些生理特性, 2(心肌的不应期较长有何生理意义, 11 实验五 测定红细胞沉降率的方法。(选做) 【基本原理】 血液加抗凝剂后，吸入一血沉降管内，静置一小时后，观察红细胞下沉的mm 数，称为红细胞沉降率。它是以血浆层的高度来决定，血浆层越高，表示沉降率越快。红细胞沉降率的正常标准，随测定方法而异。如成年人血液的正常沉降率，韦氏法:男0—15mm/h、女0—20mm/h;潘氏法:男5—10mm/h、女6—12mm/h。红细胞的沉降明显分成三个时期:形成缗钱状红细胞簇，迅速下沉及最后聚集。缗钱状是红细胞叠连成串，红细胞的形态未引起不正常。红细胞的大小和数目影响聚集期。贫血症患者的沉降率增加;红细胞增多症患者的沉降率减少;月经及怀孕期的沉降率比正常高。 【实验器材】 刺血针、酒精棉球、血沉降管、血沉降管架、小表面皿、5%柠檬酸钠。 【方法与步骤】潘氏微量法 1(血沉管的刻度由上至下为0—100mm，内径1mm，容积约0.15ml。刻度“0”处有“K”标志，50mm 处有“P”标志。用前先以5%柠檬酸钠冲洗一次。 2(吸5%柠檬酸钠至刻度“P”处，吹入小表面皿中。 3(穿刺手指或耳垂采血，擦去第一滴血，将血沉管两次取血至刻度“K”处，迅速吹入有抗凝剂的器皿中，充分混合。 4(以血沉管吸取表面皿中混匀的抗凝血液至“K”处，擦净管尖血液，直立并固定于血沉管架上。 5(一小时后观察结果，记录血沉管中血浆层的高度。 【思考题】 1(引起红细胞沉降的原理是什么, 2(论述各种影响红细胞沉降率的因素。 12 实验六 红细胞渗透脆性的测定(必做) 【目的要求】 学会测定红细胞脆性的方法和配置不同浓度的NaCl溶液，根据结果分析血浆晶体渗透压对红细胞渗透脆性的影响，加深理解血浆渗透压相对恒定对维持红细胞正常形态的生理意义。 【基本原理】 溶液中，会失去水分发生皱缩;在低渗NaCl 溶液中，会因过红细胞在高渗NaCl 多水分进入红细胞而膨胀，甚至破裂，使血红蛋白释出，称为红细胞溶解。红细胞对低渗溶液具有不同的抵抗力，即红细胞具有不同的脆性，对低渗溶液抵抗力小，表示红细胞的脆性大，对低渗溶液抵抗力大，则表示红细胞的脆性小。各种有机溶剂、酸、碱等都会使红细胞的膜发生溶解，称为红细胞的化学性溶血。 【动物与器材】 (人)兔、3%红细胞混悬液、离心机、2ml 注射器、5ml 试管10 支、5ml 吸管3支、试管架、滴管、洗耳球、3.8%柠檬酸钠、1%和2%NaCl 溶液。 【方法与步骤】 1.3%红细胞混悬液的制备取兔血2ml，加入盛有3.8%柠檬酸钠溶液0.2ml的离心管中，混合，放入离心机中，转速3000 转/min，离心5 分钟。取出后，弃去上清液，加入生理盐水混合后再离心，然后除去上清液。同法重复一次，即得洗涤之红细胞。用生理盐水配成3%混悬液备用。 2(取试管10 支，从1—10 分别标记后，排列在试管架上，按表配制各种浓度的NaCl 溶液。 表2 10支试管中分别盛各种浓度的Nacl 溶液 试 液 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1%Nacl(ml) 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.6 3.6 4.0 2%Nacl(ml) 4.0 蒸馏水(ml) 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0 1.8 1.4 0.4 溶液浓度(%) 0.30 0.35 0.40 0.45 0.50 0.55 0.60 0.9 1.0 2.0 3(每支试管放入兔3%红细胞混悬液1—2 滴，摇匀，静置半小时后即可 观察各试管之溶血现象。 13 4(管内液体变红而透明者，称完全溶血。记录开始完全溶血管之溶液浓度，这代表红细胞的最高抵抗力，即最小脆性，正常为0.35—0.30%NaCl 溶液，通常以这个数值表示红细胞的渗透脆性。 5(管内液体混浊，上层带红色者，称不完全溶血。记录开始不完全溶血管之溶液浓度，这代表红细胞的最低抵抗力，即最大脆性，正常约为0.45%NaCl 溶液。 6(管内液体分两层，上层浅黄色透明，下层红色不透明者，称不溶血。 【思考题】 1(为什么在科研实验或临床上需用各种浓度生理盐水, 2(产生渗透性溶血与化学性溶血的机理有什么不同, 3(根据溶血程度，找出家兔红细胞对低渗溶液的最大抵抗力与最小抵抗 力。 14 实验七 ABO 血型鉴定(必做) 【目的要求】 1(学习用玻片法测定血型并观察结果。 2(观察红细胞凝集现象，掌握ABO 血型鉴定的原理。 【基本原理】 血型是指红细胞的血型，是根据红细胞膜外表面存在的特异性抗原(镶嵌于红细胞膜上的糖蛋白和糖脂)来确定的，这种抗原或凝集原是由遗传决定的。抗体或凝集素存在于血清中，它与红细胞的不同抗原起反应，产生凝集，最后溶解，由于这种现象，临床上在输血前必须注意鉴定血型，以确保安全输血。通常输血反应中大多数注意ABO 血型系统。 【实验器材】 显微镜、载玻片、刺血针、消毒牙签、A 型和B 型标准血清、生理盐水、酒精棉球。 【方法与步骤】 1(取一块清洁玻片，用蜡笔划上记号，左上角写A 字，右上角写B 字。 2(用小滴管吸A 型标准血清(抗B)一滴加入左侧，用另一小滴管吸B型标准血清(抗A)一滴加入右侧。 3(穿刺手指取血，玻片的每侧各放入一小滴血，用牙签搅拌，使每侧抗血清和血液混和。每边用一支牙签，切勿混用。 4(静置室温下10—15min 后，观察有无凝集现象，假如只是A 侧发生凝集，则血型为B 型;若只是B 侧凝集，则为A 型;若两边均凝集，则为AB型;若两边均 型(图3-7)。这种凝集反应的强度因人而异，所以有时需未发生凝集，则为O 借助显微镜才能确定是否出现凝集。 【思考题】 1(根据自己的血型，说明你能接受和输血给何种血型的人，为什么, 2(如何区别血液的凝集与凝固，其机理是否一样, 15 实验八 出血时间及凝血时间的测定(选做) 【目的要求】 学习测定出血、凝血时间的方法。 【基本原理】 出血时间是指从出血时起至血液在创口停止流出时止所需的时间，用以检查凝血过程是否正常。凝血时间是指从血液流出体外时起至凝固时止所需的时间，用以检查血凝过程的快慢。 【实验器材】 刺血针、秒表、小滤纸条、酒精棉球、碘酒、毛细玻璃管(长约10cm，内径0.8-1.2mm)。 【方法与步骤】 1(出血时的测定用酒精棉球将指尖皮肤消毒，再用无菌干棉球擦干。用刺血针穿刺手指约2—3mm 深，让血流自然流出，勿用手挤压。从穿刺后开始每隔半分钟用滤纸吸去血滴一次(不要触及皮肤)，直到血流停止，计数血滴可知出血时间。通常第一滴血血迹直径应在1—2cm。此法正常值为1—3min。 2(凝血时的测定——毛细管法穿刺指尖，让血自然流出，擦去第一滴血。用毛细玻璃管吸取第二滴血，直至充满管腔为止，立即记录时间。每隔半分钟折断毛细玻璃管一小段，约5—10mm，直至两段玻管之间有血丝连接时，表示血液已经凝固，此段时间即为凝血时间。正常值为2—7min。 【注意事项】 测定时，最好将毛细管两端用胶泥封闭，置于37?水溶中，以保持温度恒定。 【思考题】 1(血液从伤口流出，为什么会凝固, 2(测定止血与凝血时间有何实际意义, 16 实验九 蛙类心搏过程的观察与描记(选做) 【目的要求】 1(学习暴露蛙类心脏的方法，熟悉心脏的结构。 2(观察心脏各部分自动节律性活动的时相及频率。 3(学习在体蛙类心脏活动的描记方法。 【基本原理】 两栖类动物的心脏为两心房、一心室，心脏的起搏点是静脉窦。静脉窦的自动节律最高，心房次之，心室最低。正常情况下，心脏的活动节律服从静脉窦的节律，其活动顺序为:静脉窦、心房、心室。这种有节律的活动可以用机械方法或通过换能器记录下来，称为心搏曲线。 【动物与器材】 蟾蜍或蛙、常用手术器械、蛙板、蛙腿固定夹、蛙心夹、记纹鼓与通用杠杆或记录仪与张力换能器、秒表、滴管、培养皿、棉线、任氏液。 【方法与步骤】 (暴露心脏取蟾蜍一只，双毁髓后背位固定于蛙板上。左手持手术镊提起1 胸骨后方的皮肤，右手持金冠剪剪开一个小口，然后将剪刀由开口处伸入皮下，向左、右两侧下颌角方向剪开皮肤。将皮肤掀向头端，再用手术镊提起胸骨后方的腹肌，在腹肌上剪一口，将金冠剪紧贴胸壁伸入胸腔(勿伤及心脏和血管)，沿皮肤切口方向剪开胸壁，剪断左右乌喙骨和锁骨，使创口呈一倒三角形。左手持眼科镊，提起心包膜。右手用眼科剪刀剪开心包膜，暴露心脏。 2(观察心脏的结构从心脏的腹面(图4-1)可看到一个心室，其上方有两个心房，房室之间有房室沟。心室右上方有一动脉圆锥，是动脉根部的膨大。动脉干向上分成左右两分支。用蛙心夹夹住少许心尖部肌肉，轻轻提起蛙心夹，将心脏倒吊，可以看到心脏背面有节律搏动的静脉窦。在心房与静脉窦之间有一条白色半月形界线，称为窦房沟。前、后腔静脉与左、右肝静脉的血液流入静脉窦。 3(观察心搏过程仔细观察静脉窦、心房及心室收缩的顺序和频率。在主动脉干下方穿一条线，将心脏翻向头端，看准窦房沟，沿窦房沟作一结扎，称为斯氏第一结扎。观察心脏各部分搏动节律的变化，用秒表计数每分钟的搏动次数。待心房和心室恢复搏动后，计数其搏动频率。然后在房室交界处穿线，准确地结扎房 17 室沟，称为斯氏第二结扎。待心室恢复搏动后，计数每分钟心脏各部分的搏动次数。 4(记录心搏曲线按步骤1 暴露另一只蟾蜍的心脏，用系线的蛙心夹夹住少许心尖部肌肉。蛙心夹的系线与通用杠杆或张力换能器相连，用记纹鼓或记录仪记录心搏曲线。仔细观察曲线各波与心脏各部位活动的关系。 【思考题】 1(斯氏第一结扎后，房室搏动发生什么变化，为什么, 2(斯氏第二结扎后，房室搏动频率有何不同，为什么, 3(怎样证明两栖类心脏的起搏点是静脉窦, 18 实验十 心血管活动的神经体液调节(选做) 【目的要求】 1(学习直接测定和记录家兔动脉血压的急性实验方法。 2(观察某些神经、体液因素对心血管活动的影响。 【基本原理】 在正常生理情况下，人和高等动物的动脉血压是相对稳定的。这种相对稳定性是通过神经和体液因素的调节而实现的，其中以颈动脉窦-主动脉弓减压反射尤为重要。心血管活动还受到体液因素的调节。 【动物与器材】 家兔、手术台、常用哺乳类手术器械、BL-410生物信号处理系统及压力换能器、双凹夹、动脉插管、动脉夹、保护电极、纱布、棉球、丝线、注射器、生理盐水、3.8%柠檬酸钠、20%氨基甲酸乙酯、肝素(300单位/ml)、肾上腺素(1?10000)、乙酰胆碱(1?10000)。 【方法与步骤】 1(连接BL-410生物信号处理系统及压力换能器，动脉插管内注入肝素抗凝。 2. 手术 (1)取家兔称重、麻醉及固定剪毛。注意观察麻醉指征。当动物四肢松软，呼吸变深变慢，角膜反射迟钝时，表明动物已被麻醉，即可停止注射。 (2)切皮及分离皮下组织:颈部正中长约5—7cm的皮肤切口，用止血钳分离皮下结缔组织，首先看到胸锁乳突肌。再向下分离，便露出胸骨甲状肌和紧贴于气管上的胸骨舌骨肌。 (3)气管切开术:用止血钳由正中线将胸骨舌骨肌分离，暴露出气管于已气管下穿一丝线，打一活结。在喉头下2—3cm处的气管上作一倒“T”形切口，将气管插管插入气管中用线结扎，并固定于气管插。 (4)颈部神经血管分离术:可将血管神经束翻于食指之上，分离双侧颈总动脉并穿线备用。轻轻提起右侧颈总动脉下的备用线，即可看到3条神经:迷走神经最粗，呈白色，一般位于外侧;交感神经较细，但较减压神经稍粗，略呈灰色，一般位于内侧;减压神经最细，呈白色，一般位于迷走和交感神经之间。识别准确后，分离结缔组织膜，并穿线备用。 19 (5)插入动脉插管:右侧颈总动脉的远心端处结扎。近心端处用动脉夹将动脉夹住。于两者之间另穿一线，打一活结。用眼科剪在动脉上沿向心方向作一斜形切口。将准备好的动脉插管由切口插入动脉管内并固定。 3. 实验观察: 放松动脉夹，调节三通管旋扭，此时显示器出现血压波动曲线，随后可按以下实验项目进行观察。 (1)记录正常血压曲线，识别一级波(心波)与二级波(呼吸波)。 (2)夹闭对侧颈总动脉15s，观察记录血压之变化。 (3) 用中等强度的电刺激刺激减压神经，血压有何变化,切断之。以同样强度的电流依次刺激减压神经的中枢端和外周端，观察记录血压变化， (4) 刺激迷走神经，血压有何变化,在双结扎后切断，分别刺激其外周端与中枢端，观察记录血压变化 (5) 耳缘静脉注入肾上腺素0.2—0.3ml，血压有何变化，为什么, (6) 耳缘静脉注入乙酰胆碱0.2—0.3ml，血压有何变化，为什么, 【注意事项】 1(一项实验后，须待血压基本恢复后再进行下一项实验。 2(随时注意动脉套管的位置，特别是动物挣扎时，避免扭转而阻塞血流或戳穿血管。 3(随时注意动物麻醉深度，如实验时间过长，动物经常挣扎，可补注少量麻醉剂。 4(注意保温:深度麻醉可使外周血管扩张，冬季保温不好常引起动物死亡。 5.血液凝固的处理一般血凝易发生在动脉插管的尖端。在轻度凝血时，可用止血钳夹闭动脉插管远端的连接管，而后双手挤压管壁，可将套管内的小血块压出。在凝血严重时，首先应用动脉夹夹闭动脉插管近心端的动脉，而后剪开结扎线，取下插管进行清洗。在给家兔补注少量肝素以后，再插入动脉套管。 6.动脉插管应与血管方向一致，且放置稳妥，以防扭转或插管尖端刺破动脉管壁。 7.在分离颈总动脉及穿线时，切勿伤及其下的神经;在颈动脉近甲状腺处有甲状腺前动脉，分离时应稍靠其下，以免损伤。 【思考题】 20 1(为什么水银检压计的零位必须与兔心在同一水平上, 2(你所解剖的家兔颈部迷走、交感和减压神经的位置是否正常,如有变异，试绘一简图表示。 3(根据实验内容，小结在正常情况下，家兔动脉血压的神经和体液调节。 21 实验十一 人体的心音听诊( 必做) 【目的要求】 了解听诊器的主要结构，学习心音听诊的方法和部位，识别第一心音与第二心音。 【基本原理】 心音是由心脏瓣膜关闭和心肌收缩引起的振动所产生的声音。用听诊器在胸壁前听诊，在每一心动周期内可以听到两个心音。第一心音:音调较低(音频为 40 次/s)而历时较长(0.12s)，声音较响，是由房室瓣关闭和心室肌收缩25— 振动所产生的。由于房室瓣的关闭与心室收缩开始几乎同时发生，因此第一心音是心室收缩的标志，其响度和性质变化，常可反映心室肌收缩强、弱和房室瓣膜的机能状态。第二心音:音调较高(音频为50 次/s)而历时较短(0.08s)，较清脆，主要是由半月瓣关闭产生振动造成的。由于半月瓣关闭与心室舒张开始几乎同时发生。因此第二心音是心室舒张的标志，其响度常可反映动脉压的高低。 【实验器材】 听诊器 【方法与步骤】 1(受试者安静端坐，胸部裸露。 2(检查者带好听诊器，注意听诊器的耳具应与外耳道开口方向一致(向前)。以右手的食指、拇指和中指轻持听诊器胸端紧贴于受试者胸部皮肤上，依次由二尖瓣听诊区?主动脉瓣听诊区?肺动脉瓣听诊区?三尖瓣听诊区，仔细听取心音，注意区分两心音。 3(如难以区分两个心音，可同时用手指触诊心尖搏动或颈动脉脉搏，此时出现的心音即为第一心音。然后再从心音音调高低、历时长短认真鉴别两心音的不同，直至准确认别为止。 【注意事项】 1(实验室内必须保持安静，以利听诊。 2(听诊器耳具应与外耳道方向一致。橡皮管不得交叉、扭结，管切勿与 它物摩擦，以免发生摩擦音影响听诊。 3(如呼吸音影响听诊，可令受试者暂停呼吸片刻。 22 【思考题】 1(第一心音和第二心音是怎样形成的,它们有何临床意义, 23 实验十二 人体动脉血压的测定及其影响因素(必做) 【目的要求】 1(了解血压计的构造，学习并掌握人体间接测压法的原理和方法。 2(观察在正常情况下，某些因素对动脉血压的影响。 【基本原理】 测定人体动脉血压最常用的方法是间接测压法，是使用血压计在动脉外加压，根据血管音的变化来测量动脉血压的。通常血液在血管内流动时并没有声音，但如给血管以压力而使血管变窄形成血液涡流时则可发生声音(血管音)。用压 -20)在上臂给肱动脉加压，当外加压力超过动脉的收缩压时，动脉血脉带(图4 流完全被阻断，此时用听诊器在肱动脉处听不到任何声音。如外加压力低于动脉内的收缩压而高于舒张压时，则心脏收缩时，动脉内有血流通过，舒张时则无，血液断续地通过血管，形成涡流而发出声音。当外加压力等于或小于舒张压时，则血管内的血流连续通过，所发出的音调突然降低或声音消失，故恰好可以完全阻断血流所必须的最小管外压力(即发生第一次声音时)相当于收缩压。在心舒张时有少许血流通过的最大管外压力(即音调突然降低时)相当于舒张压。由前一实验可知，在正常情况下，人或哺乳动物的血压是通过神经和体液调节而保持其相对的稳定性。但是血压的稳定是动态的，是在不断地变化和调节中得到的，不是静止不变的。人体的体位、运动、呼吸以及温度等因素对血压均有一定影响。 【实验器材】 血压计、听诊器等 【方法与步骤】 血压计是由检压计、袖带、打气球三部分组成。 1(受试者脱左臂衣袖，静坐5min。 2(松开打气球上的螺丝，将压脉带内的空气完全放出，再将螺丝扭紧。 3(将压脉带裹于左上臂，其下缘应在肘关节上约3cm 处，松紧应适宜。受试者手掌向上平放于台上，压脉带应与心脏同一水平。 4(在肘窝部找到动脉搏动处，左手持听诊器的胸具置于其上。注意:不可用力下压。 5(听取血管音变化右手持打气球，向压脉带打气加压，此时注意倾听声音变 24 化，在声音消失后再加压30mmHg，然后扭开打气球之螺丝，缓慢放气(切勿过快)，此时可听到血管音的一系列变化，声音从无到有，由低而高，而后突然变低，最后完全消失。然后扭紧打气球螺丝继续打气加压，反复听取声音变化2—3 次。 6(测量动脉血压重复上一操作，同时注意检压计之水银柱和声音变化。在徐徐放气减压时，第一次听到血管音的水银柱高度即代表收缩压。在血管音突然由强变弱时的水银柱高度即代表舒张压，记下测定数值后，将压脉带内的空气放尽，使压力降至零。再重测1 次后，将测定值填于表内。 7(体位对血压的影响体位改变反映重力对血液的影响发生变化，通过对血压的调节，保持适宜的器官血流量。 (1)受试者仰卧于实验台上，休息5min 后测量其血压。 (2)受试者取立正姿势15min，其间每隔5min 测量血压一次，并将测量数值记入表中。 8(呼吸对血压的影响 (1)向压脉带内打气加压后，徐徐放气到听见收缩压的血管音为止，扭紧打气球螺丝。让受试者作缓慢的深呼吸1min，而后即刻测量其血压。 (2)让受试者作一次深吸气后紧闭声门，对膈肌和腹肌施以适当的压力，在可能坚持的时间内测量其血压，并将数值填入表中。 9(运动对血压的影响让受试者作原地蹲起运动，1min 内完成30 次，共做2min。运动后立即坐下，30s 测量血压一次，直至血压恢复正常。精确记录每次测量血压的时间，画出血压恢复过程与时间的函数关系曲线，并将变化最大的血压数值记入表中。 【思考题】 1(袖带过松或过紧对测定的血压正常值有何影响, 25 实验十三 呼吸运动的调节(选做) 【目的要求】 1(学习测定兔呼吸运动的方法。 2(观察并分析肺牵张反射以及影响呼吸运动的各种因素。 3(进一步掌握测定动脉血压的有关技术。 【基本原理】 人体及高等动物的呼吸运动所以能持续地节律性地进行，是由于体内调节机制的存在。体内、外的各种刺激，可以直接作用于中枢或不同的感受器，反射性地影响呼吸运动，以适应机体代谢的需要。肺牵张反射是保证呼吸运动节律的机制之一。血液中CO分压的改变，通过对中枢性与外周性化学感受器的刺激及2 反射性调节，是保证血液中气体分压稳定的重要机制。 【动物与器材】 兔、兔手术台、常用手术器械、血压测定装置、张力换能器、刺激器、刺激电极、气管插管、注射器、橡皮管、3%乳酸、钠石灰瓶、二氧化碳球胆、20%氨基甲酸乙酯、生理盐水。 【方法与步骤】 1(将家兔麻醉固定剪毛，切开颈部皮肤，分离气管并插入气管插管。再分离出一侧颈总动脉与双侧迷走神经，穿线备用。 2(剑突软骨分离术:切开胸骨下端剑突部位的皮肤，并沿腹白线再切开长约2cm的切口。细心分离剑突表面的组织，并暴露剑突软骨与骨柄。用粗剪剪断剑突骨柄。可见剑突随膈肌的收缩而自由运动。 3(将缚有长线的金属钩钩于剑突中间部位，线的另一端连于张力换能器。 4(从颈总动脉插入动脉插管，并通过记录动脉血压。 5(观察项目 (1) 记录正常的呼吸运动和血压曲线 (2)吸入二氧化碳，观察并记录呼吸运动的改变，同时注意血压的变化。 (3)用钠石灰瓶造成缺氧，观察并记录呼吸运动和血压的变化。 (4)增加无效腔，观察并记录呼吸运动和血压的变化。 (5)耳缘静脉注入3%乳酸，观察并记录呼吸运动和血压的变化。 26 (6)切断一侧迷走神经，观察并记录呼吸运动的变化。再切断另一侧，对比呼吸的变化。分别刺激迷走神经中枢端与外周端，观察并记录呼吸运动 【思考题】 1(血液中CO增多或缺O时，呼吸运动有何改变，通过哪些途径, 22 2(根据实验结果分析肺牵张反射，包括迷走神经吸气抑制反射与迷走神经吸气兴奋反射的反射途径以及对维持正常呼吸节律的意义。 3. 双侧切断迷走神经以后，呼吸运动的变化说明什么问题, 27 实验十四 消化道平滑肌的生理特性(选做) 【目的要求】 1(了解哺乳动物离体肠段的一般生理特性。 2(学习离体器官灌流的一种方法。 【基本原理】 哺乳动物的胃肠平滑肌具有自动节律性收缩、伸展性、紧张性和对理化刺激较敏感等生理特性。这些特性对维持消化管一定压力，保持胃肠等一定的形态和位置，适合于消化管内容物的理化变化具有生理意义。在整体内受中枢神经系统和体液因素的调节。本实验观察及记录哺乳动物等离体肠段的一般特性及在一些药物作用下引起的各种效应。 【动物与器材】 兔、平滑肌离体灌流恒温装置、常用手术器械、BL-410生物信号处理系统、张力换能器、温度计、铁支架、O、棉线、培养皿、任氏液、肾上腺素(1?10000)、2 乙酰胆碱(1?100000)、1mol/LNaOH、1mol/LHCI 【方法与步骤】 1(小肠平滑肌标本制备漂洗。 2. 仪器连接和肠管固定，保持供氧和台氏液恒温。 3(描记肠管正常活动曲线。 4(依次加入各种药物，观察和记录肠段运动的变化。 (1)肾上腺素(1?10000) 2滴 (2)乙酰胆碱(1?100000) 1—2滴 )1mol/LHCl 1—2滴 (3 (4)1mol/LNaOH 1—2滴 (5)1%CaCl1—2滴 2 (6)降温至25? (7)升温至42? 【注意事项】 1(为避免麻醉剂对小肠活动的影响，所以要用铁锤猛击兔头部，使之迅速昏迷后即取出小肠段。 28 2(游离及取出肠段时，动作要快，但要避免过度牵拉或使组织干燥而影响其活性。整个过程应保持营养液恒温和通入O。 2 3(每加入一次药物前需先描记一段肠段运动曲线，加入药物出现效应后，立即冲洗，更换营养液，待活动恢复后，再进行另一次试验。 【思考题】 1(为什么加入各种药物会引起离体肠段活动的变化,其机理是什么, 29 实验十五 人体体温测量 (必做) 【目的要求】 了解人体体温的测量方法，加深对正常体温的记忆。 【基本原理】 血液循环是体内传递热量的重要途径，血能将热量带到全身各处，是不同组织器官之间的热量得到交换，故人体各部位的体温基本趋于一致。 【实验物品】 水银体温计(腋表、口表)酒精棉球、干棉球。 【方法与步骤】 1、将体温计取出，用酒精棉球擦拭，并将水银柱甩到35。C以下。注意检查体温计是否完好无损。 2、测量体温 (1)腋窝测量法:受试者静坐数分钟，解开上衣，擦干腋下汗水。检查者将体温计水银端放于受试者腋窝深处紧帖皮肤，令受检者曲臂紧帖胸壁，夹紧体温计，10分钟后取出，检试记录。 (2)口腔测温法:受试者静坐数分钟，检查者将口表水银端斜放于受检者舌下，令受检者闭口用鼻呼吸，勿用牙咬体温计，3分后取出，用干棉球擦干，检视记录。 立即回室内测量口腔和腋下的 (3)测量运动后体温:受试者去室外运动5分， 温度各一次。检视记录，比较同一人、同一部位运动前后体温有何变化。 【注意事项】 甩体温表时不可触及它物，防止碰碎。 30 实验十六 尿生成的影响因素(选做) 【目的要求】 1(学习输尿管插管技术。 2(观察影响尿量的几种因素。 【基本原理】 尿的生成过程包括:肾小球的过滤作用;肾小管与集合管的重吸收作用;肾小管与集合管的分泌作用。在整体内，这3个过程往往受到生理性的调节。凡影响这些过程的因素，都可影响尿的生成而引起尿量的改变。 【动物与器材】 家兔、手术台、常用手术器械、BL-410生物信号处理系统及压力换能器、刺激器、保护电极、动脉插管和输尿管插管、注射器、20%氨基甲酸乙酯溶液、20%葡萄糖注射液、肝素生理盐水溶液(100单位/ml)、生理盐水、去甲肾上腺素(1?10000)、垂体后叶素(5单位/ml)、速尿 【方法与步骤】 1. 将家兔麻醉固定，颈部和下腹部剪毛。先在颈部手术插气管插管;再分离左侧颈总动脉和右侧迷走神经，左颈动脉插入动脉插管。 2(在下腹部正中线切皮开腹，将膀胱移出腹腔,进行输尿管插管。认清输尿管进入膀胱背侧部位后，细心地分离出一侧输尿管。先在靠近膀胱处穿线结扎，再在离此结扎线约2cm处穿一条线，用眼科剪在管壁上剪一斜向肾侧的小切口，插入充满生理盐水的细塑料管，用缚线结扎固定。直接计数导尿塑料管流出的尿滴数，算出尿流量(ml/min)。 3(连接血压记录系统，记录。 4(待尿流量和血压稳定后，即可进行下列各项实验观察。每项实验开始时，都应先记录一段尿量和血压曲线作为对照;然后进行注射或刺激，并连续记录和观察至效应明显和恢复过程。 (1)自耳缘静脉注射温热(38?)的生理盐水30ml，观察血压和尿量的变化。 (2)自耳缘静脉注射1?10000去甲肾上腺素0.5ml，观察其变化。 (3)自耳缘静脉注射20%葡萄糖液15ml，观察其变化。 (4)自耳缘静脉注射垂体后叶素2单位，观察和记录其变化20min。 31 (5)自耳缘静脉注射速尿5mg/Kg，观察和记录其变化。 (6)结扎并剪断右侧颈迷走神经，用中等强度的连续脉冲刺激其外周端20—30S，使血压降低至40—50mmHg。观察尿量的变化。 【注意事项】 1(实验前可向兔静脉或皮下祝一定量生理盐水，以增加其基础尿流量。 2(实验中需多次进行耳缘静脉注射，注射时应从耳缘静脉远端开始，逐步移近耳根。手术的创口不宜过大，防止动物的体温下降，影响实验。 3(输尿管手术的难度较大，应注意防止导管被血凝块堵塞，或被扭曲而阻断尿液的流通。 【思考题】 1(试分析实验中尿量和血压出现这些变化的机制。 32 实验十七 色盲检查(必做) 【目的要求】 学会检查色盲的方法。 【实验用品】 人、色盲检查图 【方法与步骤】 、色盲检查图种类很多，在使用前，应详细阅读 说明书 房屋状态说明书下载罗氏说明书下载焊机说明书下载罗氏说明书下载GGD说明书下载 。 1 2、在充足均匀的自然光线下，检查者逐页翻开检查图，让受检者尽快回答所见的数字或图形，注意回答正确与否，时间是否超过30秒，倘若有误，应按色盲检查图的说明进行判定。 33 实验十八 实验设计 【目的要求】 1(在教师的指导下，根据实验室的现有条件，以小组为单位选出实验题目。 2(在查阅资料的基础上，完成实验设计，以训练实验验证或解决某一实际问题的设计能力。 【方法与步骤】 1(由教师介绍开展设计实验的目的、意义，以及从选题、设计实验、实验准备、完成实验、整理结果以至写出报告的全过程。 2(由教师介绍本教研室的仪器设备及现有条件。力图使学生选出切合实际的课题。 3(实验小组选择教师提供的课题或自行命题，并报教师审批。 4(根据本组可选课题，分头查阅有关文献资料、分工负责、汇集讨论，最后写出实验设计，交教师审阅。 【实验设计内容】 实验设计的内容应包括下列诸项。 1(课题名称。 2(目的要求本实验最后达到的目的。 3(基本原理实验的依据与思路。 4(动物器材与药品。 5(方法与步骤简要的实验方法、观察指标与程序。 【实验设计的基本原则】 学生在确定课题后进行实验设计需要注意以下基本原则。 1(科学性 2(严谨性 3(实验条件的一致性 4(可重复性 5(动物的选择 6(指标的选择 【课题举例】 34 1(观察箭毒对神经-肌肉接点的阻滞作用。 +3. 试证明神经干动作电位的产生与Na的关系。 4(观察兔减压反射调节动脉血压的范围。 5(试证明温度对肌肉收缩的影响。 35