提取DNA的
方法
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拟南芥提取DNA的方法
实验目的:提取拟南芥DNA，便于分子育种的目的基因克隆
研钵及研杵 试验仪器:台式离心机 (Eppendorf)、 离心管多只、
、恒温水浴锅、多种规格的移液枪和枪头、
试验药品: Edward 提取溶液[ 内含200 mmol/L Tri-Hcl( pH 值7. 5), 25 mmol/L EDTA( pH 值8. 0), 250mmol/L N aCl 0. 5% SDS(W /V ) ]、氯仿、异戊醇、异丙醇、RNAase、 试验材料:幼嫩的叶
实验步骤:
1、取拟南芥新鲜幼嫩的小叶片2,3片，放入1.5mL的离心管里，先加入 Edward 提取溶液100µL(便于研磨)，用研棒充分地磨碎叶片，再加入提取液300µL，快速充分混合。
2、65?水浴15分钟以上。
3、加入400µL(的氯仿:异戊醇(24:1)，4?，12000rpm/min离心5分钟。 4、 取上清300µL转至新的1.5mL离心管中，加入等体积的异丙醇，混匀，4?，12000rpm/min离心5分钟。
5、弃上清，70%乙醇洗涤沉淀2次，吹干。
6、沉淀用20~30µl含有0.1mg/ml RNAase A的ddH2O 溶解。贮存在–20 ?冰箱里 7、用0.8%的琼脂糖凝胶检测提取的拟南芥DNA。
参考文献:杨双，阮燕晔等。一种简易的拟南芥幼苗微量DNA提取方法【J】沈阳农业大学学报，2005-02,36(1):99-100
徐平丽，赵晋平等。一种适宜拟南芥PCR检测的DNA提取方法【J】安徽农业科学，2010,38(13):6653-6654
籽用南瓜提取DNA的方法
吴会会
试验目的:提取籽用南瓜的DNA，用于转基因突变体的鉴定
试验器材:离心机、 离心管、 研钵和研棒、 水浴锅、 分光光度记、 电泳设备 试验药品:提取液CTAB、氯仿、异戊醇、异丙醇、RNAase、1, 的琼脂糖凝胶 试验材料:选取籽用南瓜新鲜叶片若干，装入塑料袋中，置于一7O? 冰箱冻存过夜。 试验步骤:
1、在50 mL 离心管中，加入20 mL 的CTAB (2,CTAB，100 mmol,L Tris—HCl (pH8.0，2O mmo|,L EDTA，1.4 mmol,L Nacl)，在65? 预热。
2、 取约5 g在一70? 冰箱冻存过夜的南瓜叶片，研磨至粉末状，转移至预热的离心管中，混匀置于65?水浴锅中保温60 min，并不时轻轻转动离心管。
3、 加2O mL氯仿,异戊醇(24:1)，4? 下13 000 r?min-离心10 min后，转移上清至另一新管中。
4、 加2倍体积的预冷异丙醇，混匀后静止10 min，挑取絮状物于新离心管。
5、用冰乙醇清洗沉淀，倒置晾干后溶于含RNAase的灭菌dHO200µL中，一20?冰箱保存，222
备用。
6、计算DNA的浓度并分析纯度。
用紫外分光光度计测定定波长为260和280 nm 的光吸收值，分别计为OD和OD，DNA 样品260280质量浓度=OD x 5x50( g?mL。)，该试验稀释5倍。计算DNA的浓度并分析纯度。 260
7、提取的DNA用1, 的琼脂糖凝胶进行电泳分析DNA的完整性。如果条带较清晰、无RNA 条带。说明DNA提取过程中，几乎没有被污染，RNA去除干净。
参考文献:赵茜，徐丽珍。快速提取籽用南瓜基因组DNA方法的研究[J].黑龙江农业科学2011(10):14,15
浙公网安备 33021202002483