PEAR1、PTGS1基因多态性与缺血性脑卒中患者复发的相关性

缪 阳 孟中如 卞海林 王红霞

江苏省盐城市第一人民医院药学部，江苏盐城 224000

缺血性脑卒中是我国致死率最高的疾病之一，复发率高达17.7%，极大的威胁人民健康[1]。目前各国循证指南[2-3]均推荐阿司匹林等抗血小板药物作为缺血性卒中二级预防的重要策略，然而实践发现阿司匹林抵抗（aspirin resistance，AR）会显著降低抗血小板治疗的疗效，提高缺血性卒中复发的风险[4]。血小板内皮聚集受体1（platelet-endothelial aggregation receptor 1，PEAR1）和前列腺素内过氧化物合酶1（prostaglandin-endoperoxide synthase 1，PTGS1）等 基因多态性不仅是导致AR的重要因素，还会引起抗血小板疗效的差异[5-6]，但其与缺血性脑卒中复发的直接关联尚不完全清楚[7]。为此，本研究回顾性分析我院缺血性脑卒中患者中PEAR1、PTGS1基因型的分布情况，并探讨基因多态性与脑卒中复发之间的关联性，以期能通过开展用药前药物基因组学检测，指导临床用药决策，预防或减少脑卒中复发。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择盐城市第一人民医院神经内科2018年7月至2021年6月315例住院患者进行单中心、回顾性病例对照研究。以入院时既往是否发生过脑卒中将患者分为两组：首发缺血性脑卒中组243例、复发缺血性脑卒中组72例。复发缺血性脑卒中组病例为既往有缺血性脑卒中病史，规律服用阿司匹林预防（每天1片，100 g/片，拜耳医药保健有限公司，国药准字J20171021），再次出现遗留神经功能缺损症状加重或新发神经功能缺损症状，此次入院头颅CT或MRI显示存在新病灶的患者（CT结果有临床影像一致的描述；MRI有责任病灶DWI高信号/ADC低信号的证据）。本研究经盐城市第一人民医院医学伦理委员会通过。

纳入标准：患者年龄≥18 岁，具有缺血性脑卒中相应体征，且经脑CT或MRI确诊符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2018》[8]中诊断标准；均接受PEAR1和PTGS1基因型检测。排除标准：心源性或出血性脑梗死患者；阿司匹林过敏患者；接受免疫抑制剂、抗凝药物治疗或服用影响血小板功能类药物者；有恶性肿瘤，血液疾病，癫痫等神经系统疾病或消化性溃疡病史者；有急慢性感染性疾病以及严重心、肝、肾等多脏器功能障碍或衰竭者。收集年龄、性别、BMI、吸烟史、饮酒史、既往史以及并发症等资料。

1.2 检测方法

采集2 ml患者静脉外周血，置于EDTA抗凝管中进行检测（PCR-荧光探针法）。取适量通用样本稀释液加入待测样本中充分混合后备用。取2 μl待测样本的稀释液、阳性质控品、阴性质控品，分别加入装有3种PCR反应液的反应管中，37℃温浴3 min后6000 rpm离心40 s，再次涡旋3 s混匀，然后6000 rpm离心5 s后将反应管放置在Fascan48E仪器上进行测序。基因检测采用西安天隆科技有限公司的Fascan 48E多通道荧光定量分析仪及配套测序反应通用试剂盒。

1.3 统计学方法

采用SPSS 23.0软件对数据进行统计分析，符合正态分布的计量资料采用均值±标准差（）表示，不符合者采用中位数及四分位数间距[M（P25，P75）]表示；计数资料用[n（%）]表示，组间比较采用χ2检验；计量资料比较符合正态分布者采用独立样本t检验，不符合者采用秩和检验；采用logistic回归模型进行多因素分析。P＜ 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者临床资料单因素分析

两组组比较，BMI、性别、高血压病、糖尿病、冠心病、吸烟及饮酒史、TC、TG、HDL-C、Hcy、血小板等比较，差异无统计学意义（P＞ 0.05）。但复发组平均年龄和D-二聚体显著高于首发组，LDL-C显著小于首发组，差异有统计学意义（P＜ 0.05）。见表1。

表1 两组患者单因素分析表

2.2 PEAR1和PTGS1基因的分布特征

315例缺血性脑卒中患者中， PEAR1等位基因变异发生率为34.92%；PTGS1等位基因变异发生率为25.87%。经χ2检验，发现各基因型分布频率均符合Hardy-Weinberg平衡（P＞ 0.05），说明样本具有群体代表性。见表2。

表2 PEAR1和PTGS1基因多态性频率分布

2.3 PEAR1和PTGS1基因多态性比较

PEAR1基因多态性的分布在两组之间差异有统计学意义（P=0.031），复发组中野生型GG占比29.16%，杂合突变性GA占比54.17%，纯合突变型AA占比16.67%；首发组中GG占比44.03%，GA占比47.33%，AA占比8.64%。野生型GG/突变型（GA+AA）在两组间分布差异有统计学意义（χ2=5.089，P=0.024）。见表3。PTGS1基因多态性的分布在两组之间差异无统计学意义（P＞ 0.05），复发组中野生型AA占比51.39%，杂合突变型AG占比38.89%，纯合突变型GG占比9.72%；首发组中AA占比58.44%，AG占比33.33%，GG占比8.23%。

表3 PEAR1和PTGS1基因型分布及等位基因比较

2.4 相关因素分析

以是否再发缺血性脑卒中为因变量，以单因素分析中有显著差异的3个因素（年龄、D-二聚体、LDL-C）及PEAR1突变（GA+AA）为自变量，进行相关因素的logistic回归分析，得到年龄（OR=1.028）、D-二聚体（OR=1.170）、LDL-C（OR=0.642）是缺血性卒中复发的独立相关因素，见表4。

表4 再发缺血性脑卒中相关因素的logistic回归分析

3 讨论

根据文献报道，年龄、性别、有吸烟或饮酒史、冠心病、遗传因素以及血压、血糖、血脂、同型半胱氨酸水平升高等都是影响缺血性脑卒中复发的相关因素[9]。本研究分析结果表明年龄、D-二聚体、LDL-C是缺血性脑卒中患者复发的独立相关因素。但复发组低LDL-C水平与既往研究中缺血性脑卒中复发的已知危险因素相矛盾[10]，这可能由于本研究中复发组患者入院前大多服用降脂药进行卒中二级预防有关。

近年来研究证实再发缺血性脑卒中的独立危险因素之一就是AR，而PEAR1、PTGS1等基因多态性会影响蛋白的结构或构象，使得阿司匹林抗血小板作用在不同个体间产生差异，诱发AR，进而导致患者再发缺血性脑卒中[4-6]。PEAR1是一种血小板跨膜蛋白，参与血小板激活及血栓形成，其磷酸化加强了GPIIb/IIIa纤维蛋白原受体的激活，从而促进血小板聚集。研究表明，PEAR1基因与血小板功能及抗血小板药物的作用都有很强的相关性[11]，突变基因型GG是AR的危险因素[12]。本研究结果显示复发的缺血性脑卒中患者中PEAR1突变型（GA+AA）比例显著高于首发患者（P＜ 0.05），但多因素回归分析结果显示PEAR1突变对缺血性脑卒中复发的影响无统计学意义（P＞ 0.05）。一方面可能由于本研究纳入的样本量有限，另一方面原因可能是PEAR1基因多态性会影响AR发生，但与缺血性脑卒中复发并无直接关联。

阿司匹林通过抑制环氧合酶-1（COX-1）的作用，而COX-1主要由PTGS1基因编码，从而减少花生四烯酸转化为血栓素（TX）A2，阻断血小板的聚集。基于既往PTGS1基因的研究，其突变与AR发生相关[13-14]，也与心肌梗死的复发有显著关联性[15]。本研究通过比较首发及复发脑卒中患者的PTGS1各基因型的分布，结果表示两组间无显著差异，且分布频率均符合Hardy-Weinberg平衡，说明样本具有群体代表性，所以PTGS1基因多态性与缺血性卒中复发无关联性。脑卒中复发是多种危险因素交互作用下的结果，各因素相互之间有协同或拮抗作用。PTGS1突变对AR的作用可能为其他因素拮抗，导致其与脑卒中复发不相关。

总之，本研究中缺血性脑卒中患者基因多态性发现大部分患者PEAR1和PTGS1基因为野生型，且复发患者中PEAR1基因突变型（GA+AA）显著高于首发患者。但PEAR1和PTGS1基因突变与缺血性脑卒中复发无统计学相关性，可能由于导致缺血性脑卒中的再发因素较为复杂，未来需要大规模的研究进一步验证。

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