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冰冻切片免疫组化

冰冻切片免疫组化1冰冻切片4~8um,室温放置30分钟后，入4C丙酮固定10分钟（另：丙酮先在-20C预冷,然后在4C固定片子15分钟,固定后在室温下干燥后再做免疫组化），PBS洗,5分钟X32用3%（另0.3%）过氧化氢孵育5~10分钟（另：最好是用3%H2O2甲醇溶液，室温20分钟。此配方不易产生脱片。配制方法是在9ml甲醇中加30%H2O21m，l混匀后使用，每次新鲜配制），消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗,5分钟X235~10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿洗，4滴加适当比例稀释的一抗或...

1冰冻切片4~8um,室温放置30分钟后，入4C丙酮固定10分钟（另：丙酮先在-20C预冷,然后在4C固定片子15分钟,固定后在室温下干燥后再做免疫组化），PBS洗,5分钟X32用3%（另0.3%）过氧化氢孵育5~10分钟（另：最好是用3%H2O2甲醇溶液，室温20分钟。此配方不易产生脱片。配制方法是在9ml甲醇中加30%H2O21m，l混匀后使用，每次新鲜配制），消除内源性过氧化物酶的活性。PBS洗,5分钟X235~10%正常山羊血清（PBS稀释）封闭，室温孵育10分钟。倾去血清，勿洗，4滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液，37C孵育1~2小时或4C过夜。5回收一抗，PBS冲洗，5分钟X3次。6滴加适当比例稀释的生物素标记二抗（1%BSA-PB稀释），37C孵育10~30分钟；或滴加第二代生物素标记二抗工作液，37C或室温孵育10~30分钟。PBS冲中洗，5分钟X3次。显色剂显色（DAB或AEC）。10自来水充分中洗，复染，封片。如果你的组织曾放在多聚甲醛中固定的话，建议还是抗原修复效果比较好，如果没在甲醛中浸泡，无需抗原修复。如果你的片子切完后在冰箱中保存的话，做之前，从冰箱取出后先室温半小时，然后入37C烤箱一小时，再进行免疫组化实验，掉片现象会少一点。我们以前片子从-20C取出后，接着就做免疫组化，片子掉得很多。

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