实验细菌总数的测定一、实验目的1、掌握菌落总数的原理和定方法。2、掌握食品细菌总数的测定报告方式。二、实验原理菌落总数：是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH、需氧性质等），所得1g或1ml检样中所含细菌菌落的总数。按照本方法所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。菌落总数主要作判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。二、实验原理将样品制成一系列不同的稀释液，使样品中微生物个体分散成单个细胞状态。再取一定量的稀释液加入无菌平皿中，将融化后冷却至45℃左右的培养基倒如平皿中15ml，摇动平皿使其混合均匀。培养后统计菌落数目，一般认为每一个菌落是由一个细胞增殖后形成的，所以可计算出样品的含菌量。三、实验材料无菌吸管1ml、10ml，三角烧瓶（500ml），玻璃珠，无菌培养皿，试管，无菌净化台、营养琼脂培养基、生理盐水或其他释释液：定量分装于玻璃瓶和试管内灭菌等四、实验操作检验程序：检样做成几个稀释倍数的稀释液选择2-3个适宜的稀释度各取1ml分别加入灭菌平皿中每皿内加入适量的营养琼脂（36℃,48h）菌落计数报告四、实验操作1.检样的稀释以无菌操作，将检样10g（或10ml）剪碎以后，放于含有90ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min-100000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。2.编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6、各2套。另取6支盛有9ml无菌水的试管，排列于试管架上，依次标明10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。四、实验操作3.稀释用1ml无菌吸管精确地吸取1:10稀释液1ml放入10-2的试管中，注意吸管尖端不要碰到液面，以免吹出时，管内液体外溢。然后仍用此吸管将管内悬液来回吸收三次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。另取一支吸管自10-2试管吸1ml放入10-3试管中，吸吹三次，……、其余依次类推。整个稀释过程如图四、实验操作4.加样用3支1ml无菌吸管分别精确地吸取10-4、10-5、10-6的稀释液1ml，对号放入编好的无菌培养皿中。5.倒平板于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化后冷却至45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基15ml左右，置水平位置，迅速旋动混匀，同时，将营养琼脂倒入一加有1ml稀释液（不含样品）的无菌平皿中做空白对照试验。待凝固后，倒置于36±1℃温室中培养48±2。四、实验操作6、菌落计算方法（1）菌落计数方法做平板菌落计数时，可用肉眼观查，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平板的菌落数后，求出同稀释度的各平板平均菌落总数。（2）菌落计数的报告①平板菌落数的选择选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余的一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代
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全皿菌落数。平皿内如有链状菌落生长时（菌落之间无明显界线），若仅有一条链，可视为一个菌落数；如果有不同来源的几条链，则应将每条链作为一个菌落计。四、实验操作②稀释度的选择应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数字。若所有稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之。四、实验操作若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。③菌落数的报告菌落数在100以内时，按其实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面的零数，也可用10的指数来表示。五、实验报告1.结果将计数结果填入下表稀释度菌落数每毫升中总活菌数10-410-510-6平平平123123123均均均（1）为什么溶化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板？（2）同一种菌液用血球计数板和平板菌落计数法同时数，所得结果是否一样？为什么？2.思考题
浙公网安备 33021202002483