Thedocumentwasfinallyrevisedon2021羧基磁珠与蛋白偶联方法羧基磁珠与蛋白偶联方法来源： 时间：2009-6-623:34:26简介BioMag和BioMagPlus超顺磁珠适用于磁分选细胞、细胞器、蛋白、免疫球蛋白、核酸及其它生物或非生物体系中的分子。BioMag和BioMagPlus磁珠
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关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
面不规则，因此具有比较大的表面积，可以增加磁珠与偶联分子的接触机率，提高偶联效率。此外，这两种磁珠90%以上为氧化铁，可以加快磁分选速度，这特别适用于大批量，高能量分选样品。BioMagandBioMagPlus磁珠采用的工艺制备，只不过BioMagPlus经过了另,外的去除细尘处理，偶联试剂盒中提供的就为此类磁珠。BioMagPlus羧基磁珠表面的羧基经过二亚胺EDAC活化后，即可以与蛋白偶联。Bangs公司的BioMagPlusCarboxylProteinCouplingKit适用于蛋白与BioMagPlus超顺磁珠的偶联，此kit提供了可供5次偶联的试剂和磁珠。材料BioMagPlus羧基磁珠:，μm，20mg/mLEDAC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide):15mL尖头离心管:5tubesBioMag磁分离器MES缓冲液(pH:2x175mL淬灭液(1MGlycine,pH:25mL洗涤缓冲液:125mL实验步骤活化移取(10mg)的BioMagPlus羧基磁珠至15mL尖头离心管内，并放置在磁分离架上直到上清液变完全透彻后，用吸管小心移弃上清。加5mLofMES缓冲液充分混匀洗涤.将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复Step2,三次.最后一次洗涤后,重悬磁珠于5mL的MES缓冲液中。将EDAC从冷藏处取出置于室温30分钟。准确称取所需的EDACEDAC/mgBioMagPlus磁珠)加入装有磁珠的离心管内，剧烈振荡摇匀。室温下，将离心管置于旋转混匀仪上活化反应30分钟。反应过程中，注意不让磁珠沉淀聚积在一起。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复Step2,四次。蛋白偶联计算需要偶联的蛋白，抗体量.一般地，每mg活化的羧基磁珠可以偶联20-500ug的蛋白（抗体），可适量添加一些载体蛋白，如BSAFractionV，增加反应体系中的总蛋白量，从而可以起到一定的封闭作用。保证抗体偶联的正确方向。将蛋白加至5mLMES缓冲液中。吸取50μL蛋白液于950μL的MES缓冲中.配成1：20的稀释液.标记为偶联反应前蛋白液.置于一旁用于后面的偶联率计算。将剩下的蛋白液加到装有活化磁珠的离心管内，剧烈振荡混匀，室温下，将离心管置于旋转混匀仪上偶联反应16-24小时。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心收集上清.标记为偶联后蛋白液，用于计算偶联率。重悬磁珠于5mLMES缓冲液中，振荡摇匀。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复Step6,一次加5mL的淬灭液，振荡摇匀，室温下，将离心管置于旋转混匀仪上30分钟。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。洗涤和贮存偶联后的磁珠加5mL洗涤缓冲液并剧烈振荡摇匀。将离心管放在磁分离架上直到上清液变清后.用吸管小心移弃上清。重复Step1,三次。最后一次洗涤后,重悬磁珠于2mL洗涤缓冲液内，此时磁珠的浓度约为5mg/mL.置于2-8摄氏度保存。Notes偶联时切记不要用有氨基.Tris)或是羧基的.acetate,citrate)缓冲液。偶联时，非偶联的吸附无可避免会有一些，这可以通过偶联后的洗涤来去除。延长振荡的时间有利于重悬BioMagPlus磁珠。贮存贮存于2-8?C。冷冻,干燥,或是离心都可能会使磁珠发生不可逆的聚积，影响实验结果。
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