乳酸脱氢酶(LDH)测定操作规程（SOP）一、用途本产品用于体外定量测定血清、血浆样品中乳酸脱氢酶（LDH）的活性。二、临床意义（一）概述乳酸脱氢酶（LDH），又称L－乳酸－NAD+氧化还原酶，酶编号为EC1.1.1.27，分子量约为34000道尔顿。LDH是一种细胞质酶，存在于所有组织细胞中。由于组织中的LDH浓度比血浆高约500倍，即使组织的轻微损伤也将导致血清中活性的明显增高，在肝、心肌、骨骼肌和肾中发现高度组织特异性活性的酶。（二）临床意义乳酸脱氢酶增高主要见于心肌梗死、肝炎、肺梗死、某些恶性肿瘤、白血病等。某些肿瘤转移所致的胸腹水中乳酸脱氢酶活力往往升高。目前，常用于心肌梗死、肝病和某些恶性肿瘤的辅助诊断。（三）医学决定水平170U／L:此值在参考范围以内，等于或低于此值可排除许多与LDH升高有关的疾病，而考虑其他的诊断。此值还可作为病人自身的对照，用来与以前或将来的测定值作比较。300U／L：高于此水平时，应考虑到可能引起LDH升高的各种疾病，如心肌梗塞、肝病变、传染性单核细胞增多症、进行性肌营养不良等。因此，应作其他各种试验，以作出明确诊断。血清溶血可使测定值增高，应予以注意。500U／L：高于此值，常见于巨幼细胞性溶血，急性白血病、慢性粒细胞性白血病、转移癌和肝昏迷等，此时应作其他多种检测来作出正确诊断。三、检验原理L-乳酸＋NAD+LDH丙酮酸＋NADH＋H+NADH的生成速率与样品中LDH活性成正比，在340nm波长处，通过连续监测吸光度的上升速率(△A／min)，即可计算出样品中LDH的活性。四、样品血液样品原则上采集晨起空腹血（禁食12小时）；患者处于平静、休息状态，减少患者由于运动、饮食带来的影响；静脉采血时患者应取坐位或卧位；止血带使用后1分钟内采血，回血后立即松开；正确使用抗凝剂；防止溶血；防止过失性采样。样品运送过程中应防止过度振荡、防止样品容器的破损、防止样品被污染、防止样品及唯一性标志的丢失和混淆，防止样品对环境的污染、水分蒸发。LDH测定样品为不溶血的血清、血浆（肝素抗凝）。样品应在低温条件下运输保存，样品中LDH在室温保存可稳定2天。五、试剂（一）试剂组成R：试剂11L-乳酸62mmol/LR：试剂22氧化型辅酶Ⅰ（NAD+）16.7mmol/L酶类校准品（需另购）不同批号试剂中各组份不能互换。（二）试剂准备R和R试剂为即用型液体试剂，开瓶装载即可使用，用12后应及时冷藏保存。（三）试剂的保存及稳定性1.不能冰冻试剂。2.未开瓶的R和R试剂应在2～8℃密闭避光贮存，稳12定期为瓶签标示的有效期。开瓶后的试剂应在2～8℃保存，稳定期为30天。（四）试剂性能可接受的指标空白吸光度：试剂空白在主波长340nm、副波长405nm处，10mm光径下，吸光度值≤0.700。（五）试剂使用中的注意事项1.严格按照试剂说明书的要求使用试剂。2.试剂2～8℃密闭避光贮存可稳定至瓶签标示的有效期。对超过有效期的试剂不能使用。3.严禁放置0℃以下保存。4.试剂开瓶后，如果长期放置，会吸收空气中的二氧化碳，导致pH值下降，造成测定值不准确，因此请尽快使用。5.当试剂变混浊或被污染或空白吸光度值＞0.700时，
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明试剂已失效，应弃去。6.装载试剂时防止产生气泡，否则结果无法保证。7.不同批号的试剂之间尽管批间差很小，但仍然不能混用，否则试剂的稳定性将无法保证。（六）预防危险发生的注意事项使用时应避免与人体接触，当试剂误入口中或眼中，或者附着到皮肤上的时候，请立即用大量清水冲洗，如有必要，请接受医生的治疗。（七）处理废弃物时的注意事项试剂反应后所产生的废液及使用后的包装材料应集中收集后按照相关法规进行废物处理。六、操作步骤1.基本参数方法：速率法样品/试剂：1/50主波长：340nm反应温度：37℃副波长：405nm反应时间：10min2.操作（1）二步法加入物空白（B）校准（C）测定（U）样品（μl）----6校准品（μl）--6--蒸馏水/生理盐水6----（μl）试剂R（μl）2402402401混匀，37℃恒温5分钟。试剂R（μl）6060602混匀，37℃恒温1分钟，340nm波长处以空白管调零测定初始吸光度，然后准确测定平均每分钟吸光度变化率△A/min。(2)一步法工作液配制：根据测定所需试剂量，取R和R按4:1比12例混合即为工作液。加入物空白（B）校准（C）测定（U）样品（μl）----20校准品（μl）--20--蒸馏水/生理盐水（μ20----l）工作液（μl）100010001000混匀，37℃恒温1分钟，340nm波长处以空白管调零测定初始吸光度，然后准确测定平均每分钟吸光度变化率△A/min。3.操作流程图空白调零延迟测定读数主波长:340nm时间:副波长:405nm温度:37℃5分钟1分钟1-2分钟μR1:240lR2:60样品:6μlμl4.计算样品LDH活性（U/L）△×F=A/min理论F值：F=8199注：由于理论F值是在理想条件下计算出的，每个实验室使用仪器和测定条件都不一样，故如果用理论F值计算，可能存在偏差，应使用校准品进行校准。七、参考值范围109-245U/L八、注意事项（一）本试剂尽管具有较好的抗交叉污染能力，但仍然建议各实验室应根据仪器性能及实验室条件做好防止交叉污染的工作。（二）试剂与样品用量可根据不同仪器的需要，在试剂样品体积比例不变的条件下，适当增加或减少试剂与样品的用量。（三）采用必要的预防措施使用试剂，试剂使用后应立即盖紧瓶盖，避免污染。（四）准确的结果取决于准确校正的仪器、温度及时间的控制。（五）红细胞内LDH含量比血清或血浆高数倍，样品应尽量避免溶血。（六）药物、抗凝剂、促凝剂、分离胶等其他物质都可能对测定值造成无法预知的干扰。当怀疑标本存在这些干扰物质的影响时，请停药后或采用无任何添加剂的血清进行测定。（七）由于有些试剂中含有高浓度的L型LDH作为工具酶，可能会导致交叉污染，使结果偏高，故该项目在通道排序时不能放在这些试剂项目的后面。九、安全性提示血清等样品可能含有病毒、细菌等病源微生物，操作者有被感染的潜在危险性，操作时应采取防范措施；试剂反应后所产生的废液及使用后的包装材料应集中收集后按照相关法规进行废物处理。
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