HessenwasrevisedinJanuary2021提取RNA到PCR检测全部实验步骤提取RNA（以下步骤都在冰盒中进行）TRLzol加入培养皿中（1ml），静置5min后，将每个面都吹一下，转入的离心管（附一）加入氯仿，量为TRLZOL的五分之一，悬空打入，然后摇匀静置5min，然后离心：4℃，12000g，15min吸取三层中最上层的水层，加入等量的异丙醇，悬空打入，混匀，静置10min，离心:4℃，12000g，10min，吸去上清液加入1ml的75％的乙醇，离心：4℃，12000g，5min（重复两遍）吸干酒精，静置10min使酒精风干，再加入20μl的DEPC水，加入后吹打几下，使RNA溶解。用DEPC水稀释10-20倍，每份总量为10μl，既9μl的水和1μl的RNA，测RNA浓度（附二）逆转录，总体系10μl，RNA加入量不超过500ng，但是尽量靠近500ng。5×Prime2μlRTEnzymeμl10μlPrimerμlRandomμlμlRNADEPC水先配好前四样的混合液，后两样根据测的RNA浓度计算，保证RNA不超过500ng按照要求加入药品，放入仪器中，设置HAO，10μl逆转录。转录完成后，取1μl的样品，稀释10倍，用Q5000测浓度，一般都是120-130，所以可以稀释13倍，使cDNA不超过100ng。算好总量，提前混合PCR体系：SYBRGREENμl使用前离心，再根据
说明
关于失联党员情况说明岗位说明总经理岗位说明书会计岗位说明书行政主管岗位说明书
书溶解成母液，再稀释10倍成为工作液DEPC水μl前引物μl后引物μlDNA模版1μl前后引物和模版稀释后都需要涡旋离心。加入SYBRGREEN需要避光，准备八连管。PCR仪器使用前先打开预热30min，打开GFXmanager软件，File里打开Protocol，选择设定好的程序，再点next，设定plate，setting里的Target（目标名称）和Sample（样品名称）UNK目标引物名称样品名称选择样品位置，名称，直到显示点击开始运行。附一：台内操作手套在细胞间拿，所有物品进入都需酒精灭菌，离心管需用镊子夹出使用，出操作台要带上一层一次性的手套防止污染。附二：测浓度需要用一组空白的溶剂进行BLANK，确定基线。，每份样品涡旋离心使其浓度均匀。使用Q5000进行测量BLANK空白校准Measure测样品浓度Sampletype测量种类260/280纯度，左右，不低于260/230有机残留，左右每次用完都用二次水湿润的纸擦一次，干燥的纸擦一次，每个样品测三次。导出到Excel。退出系统exit关闭机器，罩上罩子。
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