代谢组学开展实验方案

代谢组学开展实验 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！试验方案和试验细节终止反应（淬灭）培养基与菌体分离胞内代谢物提取胞内代谢物监测数据分析代谢组学解释代谢组学试验基础思绪怎样终止关键原因:酶活、温度、溶剂、时间方法:60%甲醇、50%甘油水溶液;5min,1h…..怎样分离关键:菌体形态;发酵液粘稠度方法:离心,过滤怎样提取怎样监测怎样分析怎样解释关键问题关键原因关键:细胞壁方法:超声破碎、研磨、反复冷冻关键:是否含有挥发性;论文目方法:GC-MS;LC-MS;或者二者联用关键:数据是否含有同时性？系统误差小方法:Matlab、NISTlibrary、Golmmetabolomedatabase、AMDIS关键:解释FK506高产原因方法:与FK506合成相关联（前体？分支代谢？能量？）文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！终止反应（淬灭）培养基与菌体分离胞内代谢物提取胞内代谢物监测数据分析代谢组学解释终止反应（淬灭）方案一【1】5mL20mL甘油:水=3:2【1】Villas-Bôas,S.G.andP.Bruheim,Coldglycerol–saline:Thepromisingquenchingsolutionforaccurateintracellularmetaboliteanalysisofmicrobialcells.AnalyticalBiochemistry,.370(1):p.87-97.【2】Smart,K.F.,etal.,Analyticalplatformformetabolomeanalysisofmicrobialcellsusingmethylchloroformatederivatizationfollowedbygaschromatography-massspectrometry.Nat.Protocols,.5(10):p.1709-1729.【3】Bölling,C.andO.Fiehn,MetaboliteProfilingofChlamydomonasreinhardtiiunderNutrientDeprivation.PlantPhysiology,.139(4):p.1995-.方案二【2】5mL20mL甘油:生理盐水水=3:25min5min关键:终止酶活方法:胞内温度≤-10℃溶液温度:依据细胞壁厚度而定策略:用甲醇或者甘油降低水凝固点 公式 小学单位换算公式大全免费下载公式下载行测公式大全下载excel公式下载逻辑回归公式下载 :ΔTf=Tf*–Tf=Kf*m（m为溶液质量摩尔浓度,Kf为凝固点下降常数）方案二【3】5mL20mL甲醇:水=3:2（可变动）5min文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！培养基与菌体分离终止反应（淬灭）培养基与菌体分离胞内代谢物提取胞内代谢物监测数据分析代谢组学解释关键:菌体形态、发酵液粘稠度方法:离心【1】淬灭液双蒸水0.22μm0.45μm0.8μm1.0μm失败原因:①丝状菌体,相互交联,堵塞孔径。②淀粉、葡萄糖、和糊精灭菌后,本身就是一个“浆糊”,严重堵塞孔径废液缸1.转速和时间时间通常为4min~5min,转速大小依据具体菌体而定:离心结束后,菌体刚好贴在管壁,不结团,加入PBS或蒸馏水后,轻微震荡即可重新悬浮。2.天然复合培养基面临难题天然复合培养基（关键为蛋白胨、酵母粉）成份复杂,假如清洗不洁净,会混入提取液中,严重影响试验结果3.生理盐水中NaCl和PBS中钠盐、钾盐会干扰试验结果。整个过程必需带手套,枪头不能接触其她物质。4.FK506发酵液处理①转速为2700rpm,4min②采取去离子水洗涤菌体③将培养基中酵母粉（不溶物）改为酵母提取物（可溶）过滤清洗【2】淬灭液PBS或生理盐水或蒸馏水菌体沉淀反复三次【1】Smart,K.F.,etal.,Analyticalplatformformetabolomeanalysisofmicrobialcellsusingmethylchloroformatederivatizationfollowedbygaschromatography-massspectrometry.Nat.Protocols,.5(10):p.1709-1729.【2】Ding,M.-Z.,X.Zhou,andY.-J.Yuan,Metabolomeprofilingrevealsadaptiveevolutionof<i>Saccharomyces<i>cerevisiaeduringrepeatedvacuumfermentations.Metabolomics,.6(1):p.42-55.文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！终止反应（淬灭）培养基与菌体分离胞内代谢物提取胞内代谢物监测数据分析代谢组学解释胞内代谢物提取关键原因:细胞壁G+菌单层,（20~80nm）,组分简单。90%肽聚糖（含量高,交联度大）,10%胞壁酸。G-菌多层,（10-15nm）,组分复杂。内壁层还有较少肽聚糖（含量低,交联度疏松,2-7nm）,外膜层为脂多糖、磷脂和脂蛋白,约8nm真菌厚25nm,占细胞干重25%。分为三层:葡聚糖、甘露聚糖和蛋白质方法:三轮冷冻与解冻液氮-196℃中冷冻5min,冰上0℃解冻15min液氮研磨称量反复冷冻超声破碎菌体研磨文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！终止反应（淬灭）培养基与菌体分离胞内代谢物提取胞内代谢物监测数据分析代谢组学解释气质联用要求:沸点≤350℃,分子量＜1000,能完全气化,气化后对色谱柱和仪器无损伤（比如Ar、二氧化碳、水、甲醇、HCl和HNO3等）适用物质:关键是有机类小分子物质,包含烷,醇,胺,酯,醚,烯,酮,醛,羧酸,呋喃和吡啶衍生物,异氰酸酯、异硫氰酸酯、硫化物和部分脂类。特点:①测定物质少（相对于液质）②灵敏度高,精度高,适合测定≥nmol级物质关键原因:①分子量＜1000②沸点＜350℃③或者经过衍生化,能够含有挥发性（300℃成气态）胞内代谢物监测-气质联用文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！终止反应（淬灭）培养基与菌体分离胞内代谢物提取胞内代谢物监测数据分析代谢组学解释关键原因:①分子量0-10,000胞内代谢物监测-气质联用已知化合物中约80%化合物是亲水性强、挥发性低有机物,热不稳定化合物及生物大分子,这些化合物分析不宜用气相色谱分析,只能依靠液相色谱文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！最终试验方案——淬灭与提取5mL三轮冷冻与解冻液氮中冷冻5min,冰中解冻15min（地点:东配）发酵液（地点：东配）（地点:东配）（地点:西配）震荡2s25ml、-40℃60%甲醇,5min40℃乙醇浴-9℃、3500rpm、离心5min5ml去离子水溶液4℃,离心3次-9℃、5000g、离心5min2ml、-30℃、50%甲醇溶液-9℃、5000g、离心5min2ml冷甲醇水溶液(50%(vol/vol),−30℃重新悬浮-9℃、5000g、离心5min-80℃储藏50%甲醇:4mL60%甲醇:25mL×1个2.63%NaCl:5mL-40℃乙醇浴容器:1个-30℃乙醇浴容器:1个5mL移液枪、1mL移液枪一般冰盒:1个（提前装好冰）离心机需提前30min调整温度至-9℃-80℃冰箱需提前跟小闻老师协商以上试剂必需提前一天在对应温度保藏测定菌体干重液氮称取5mg文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！最终试验方案——衍生化-80℃储藏0.5ml1.5ml离心管0.3mg/ml（浓度231um/l）D4succinicacid50ul1.5ml离心管震荡1min冷冻5min1.5ml离心管60ul（50ul）20mg/ml甲氧胺盐酸30℃反应90min80ulMSTFA37℃反应90min进样瓶2h冷冻干燥机1.5ml离心管材料：0.5mL离心管:1个移液枪：1mL和100μL各一把×1进样瓶：1个水浴锅：提前1h调节温度。浮漂：*个文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！试验过程与试验数据单菌落斜面（28℃,13d）3层纱布过滤（10-8个/mL）种子液接种量:1mL;载液量:40mL条件:28℃,46h,220rpm500mLM1M2×25×25进风口3.5d4.5d5.5d6.5d7.5d取样检测文章如果有不当或者不妥的地方，请您联系我修改文章或者删除文章，文章来源于网络收集，如果有侵权的问题，请联系我沟通协调改正，非常感谢您！