出口食品沙门氏菌属的检验方法1．仪器和设备1．1恒温培养箱：36±1℃1．2恒温水浴箱：45±1℃1．3高压灭菌锅1．4均质器1.5冰箱：0-4℃和-15～-20℃1．6试管:18×150mm12mm×100mm1．7锥形瓶:500ml250ml1．8平皿：直径为90mm1．9灭菌吸管1．10灭菌均质杯1．11酒精棉1．12天平:感量0.1g2．培养基的制备2．1亚硒酸胱氨酸增菌液（SC）称取23g于1升蒸馏水中在无菌容器中溶解，定量分装备用。2．2亚硫酸铋琼脂（BS）称取49.6g于1升蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，冷却至55℃，摇匀，倾注灭菌平板备用。培养基不需要高压灭菌，平板为橙黄色。2．3胆硫乳琼脂称取64.3g于1升蒸馏水中，浸泡15分钟，煮沸至完全溶解，冷却至55℃，倾注灭菌平板备用。培养基不需要高压灭菌，新制备的培养基为玉白色不透明，2．4三糖铁（TSI）称取65g于1升蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管12mm×100mm，每管约2～4ml，115℃15分钟高压灭菌，制成高层斜面备用，桔红色。2．5尿素酶琼脂基础（U）称取2.21g于95ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121℃15分钟高压灭菌，冷却至55℃灭菌加入40％尿素溶液5ml，混匀，分装灭菌试管12mm×100mm，每管2～3ml，制成斜面备用。实验与判断：大量接种于37℃培养24±2h，强阳性反应为深红色，弱阳性为粉红色，阴性为黄色或不变色。2．6赖氨酸脱羧酶培养基（LD）称取1.9g于100ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管12mm×100mm，每管1～1.5ml，，121℃15分钟高压灭菌备用。试验与判断：大量接种于37℃培养24±2h，阳性反应为紫色，阴性反应为黄色。2．7吲哚培养基（I）称取1.6g于100ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装试管12mm×100mm，每管1～1.5ml，121℃15分钟高压灭菌。2．7．1试验接种于37℃培养24±2h，滴加柯凡克试剂0.1ml。2．7．2判断阳性反应出现红色环；阴性为黄棕色环。2．8V-P半固体琼脂（VP）生化管试验：接种后于37℃培养24±2h，将甲液0.2ml(约6滴)加入试管中，摇匀，再加乙液0.1ml（约3滴），再摇匀。判断：阳性反应立即或在15min内呈现红色，阴性为铜色。阴性结果在1h后再做一次检查。有些试管在数小时后红色会逐渐消失，此仍作阳性反应。2．9丙二酸钠生化管（M）试验与判断：接种大量幼嫩试菌，于37℃培养24±2h，阳性反应为普蓝色；阴性不变色。2．10卫矛醇半固体（D）试验与判断：穿刺接种待试菌，于37℃培养24±2h，阳性反应为黄色阴性不变色3．操作程序3.1分离培养在装有225ml无菌水再加入25g样品（无于37℃培养24±2h划线接种BS和DHL中加上5.2gSC菌操作）琼脂平板各一个于37℃培养24～每个平板至少挑取分别接种LD和U接种后不须灭菌接48h2个典型或可疑菌管，种针，直接接种TSI于37℃培养24±2h挑取菌落后的琼脂至少保留24h，以备平板,应置于4～8℃必要时复查。沙门氏菌落特征琼脂平板沙门氏菌落特征BS琼脂棕褐色或灰色至黑色，有时有金属光泽，周围培养基呈棕色或黑色，有些菌株呈灰绿色，周围培养基不变或微变暗DHL琼脂无色半透明有黑色中心或几乎全为黑色，有些菌株无色半透明3．2按下表进行试验与判断：TSI和LD培养基筛选TSI琼脂LD培养基初步判断斜面底层产气硫化氢KA＋（－）＋（－）＋可疑沙门氏菌属KA＋（－）＋（－）－可疑沙门氏菌属AA＋（－）＋（－）－非沙门氏菌属KK＋/－＋/－＋/－非沙门氏菌属注：K－产碱；＋－阳性反应；（－）－少见反应；A－产酸；－－阴性反应；＋/－－阳性或阴性反应。TSI和U琼脂筛选TSI琼脂U琼脂初步判断斜面底层产气硫化氢KA＋（－）＋（－）－可疑沙门氏菌属KA＋（－）＋（－）＋非沙门氏菌属AA＋（－）＋（－）＋非沙门氏菌属KK＋/－＋/－＋/－非沙门氏菌属注：K－产碱；＋－阳性反应；（－）－少见反应；A－产酸；－－阴性反应；＋/－－阳性或阴性反应。4．生化试验4．1将符合可疑沙门氏菌属特征的TSI琼脂培养物，按下表进行生化试验。序号生化项目沙门氏反应1U试验－2V-P试验－3LD试验＋4吲哚试验－5丙二酸钠试验－6卫矛醇试验d注：＋－阳性反应；－－阴性反应；d－反应不定。4．2所有生化试管均于37℃培养24±2h。4．3生化试管结果符合沙门氏菌属特性按血清学试验进行。4．4血清学试验4．4．1检查培养物有无自凝性在洁净的玻片上加一滴生理盐水，将待试培养物混合于生理盐水滴内，使成为均一性的浑浊悬液，将玻片轻轻摇动30～60s，在黑色背景下观察反应（最好用放大镜观察）。如菌体彼此相凝集成明显或比较显小颗粒状物，即认为有自凝性，反之无自凝性。4．4．2检查“O”抗原对无自凝性的培物，按3.4.1的程度进行试验,但以多价“O”血清代替生理盐水,在2min判断结果.如为阳性结果以单价“O”血清进行分群试验.如为阴性结果,必要时,可结合生化试验结果按“Vi”抗原进行试验,再以多价和单价“O”血清进行试验.4．4．3检查“Vi”抗原按3.4.1的程序进行,但以“Vi”血清代替生理盐水。5．报告结果：5．1报告阳性结果：发现沙门氏菌。5．2报告阴性结果：未发现沙门氏菌。
本文档为【出口食品沙门氏菌属的检验方法】，请使用软件OFFICE或WPS软件打开。作品中的文字与图均可以修改和编辑，
图片更改请在作品中右键图片并更换，文字修改请直接点击文字进行修改，也可以新增和删除文档中的内容。
该文档来自用户分享，如有侵权行为请发邮件ishare@vip.sina.com联系网站客服，我们会及时删除。
[版权声明] 本站所有资料为用户分享产生，若发现您的权利被侵害，请联系客服邮件isharekefu@iask.cn，我们尽快处理。
本作品所展示的图片、画像、字体、音乐的版权可能需版权方额外授权，请谨慎使用。
网站提供的党政主题相关内容(国旗、国徽、党徽..)目的在于配合国家政策宣传，仅限个人学习分享使用，禁止用于任何广告和商用目的。
浙公网安备 33021202002483