昆明山海棠种子检验规程研究

—9—现代中药研究与实践2017年第31卷第2期Chin.Med.J.Res.Prac.,2017Vol.31No.2昆明山海棠Tripterygiumhypoglaucum(Levl.)Hutch为云南著名民族药，根主要含有生物碱、二萜类、三萜类、倍半萜类等具有生物活性的化学物质，具有祛风除湿、活血通络、消肿止痛、杀虫解毒的功效[1-2]。有显著的抗炎作用和细胞免疫等作用。主治类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、红斑狼疮病、麻风病、肾病、银屑病、癌症、白血病等[3-4]。近年来，对山海棠的化学研究，功效研究以及栽培方面的研究都是热点[5]。但对种子标准的研究却未见 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 。据野外观察，昆明山海棠种子成熟度基金项目：云南省科技领军人才项目（2014HA001）作者简介：苏　钛（1981―），男，硕士，高级工程师，研究方向：药用植物资源与生物技术研究。E-mail:kusutai2000@aliyun.com昆明山海棠种子检验规程研究苏　钛1,2,3，杨红英4，郑　雷1,2,3，邱　斌1,2,3（1.云南省药物研究所，云南昆明650111；2.云南白药集团创新研发中心，云南昆明650111；3.云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室，云南昆明650111；4.云南中医学院，云南昆明650500）摘　要：目的　研究昆明山海棠种子检验规程。 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 　参照农作物种子质量检验规程对昆明山海棠种子扦样、种子净度、真实性、吸水特性、种子质量、含水量、生活力、发芽率等进行研究，建立起了昆明山海棠的种子质量检验规程并对30份样品进行检测。结果　种子质量采用百粒法，昆明山海棠千粒重为6.01~11.81g；种子含水量为8.21%~9.81%；生活力测定采用TTC法：在70℃恒温避光条件下，种子在0.05%TTC溶液中染色8h。结论　本规程适用于昆明山海棠种子检验。关键词：昆明山海棠；种子；检验规程中图分类号：R282.2文献标识码：A文章编号：1673-6427(2017)02-09-04doi:10.13728/j.1673-6427.2017.02.003StudiesonSeedDeterminationPracticeofTripterygiumhypoglaucum(Levl.)HutchSUTai1,2,3,YANGHong-ying4,ZHENGLei1,2,3,QIUBin1,2,3(1.YunnanInstituteofMateriaMedica,Kunming650111,China;2.YunnanBaiYaoGroupinnovationandR&Dcenter,YunnanInstituteofMateriaMedica,Kunming650111,China;3.YunnanProvinceCompanyKeyLaboratoryforTCMandEthnicDrugofNewDrugCreation,YunnanInstituteofMateriaMedica,Kunming650111,China;4.YunnanUniversityofTCM,Kunming650500,China）Abstract:Objective　TostudytheprocedureofseedgradingscaleofTripterygiumhypoglaucum.MethodsBasedonrulesforAgriculturalSeedTestingtoresearchtheseedofTripterygiumhypoglaucum,whichincludedthetestofsampling,seedpurity,water-absorbing,weightper1000seeds,moisturecontent,seedviability,germinationrateandsoon.30casesofseedofTripterygiumhypoglaucumqualitytestingrulessampleshaveestablished.Results　Weightper1000seedswas6.01~11.81g,moisturecontentis8.21%~9.81%.TTCtotestviability:inconstant70℃andaviodinglight,seedsdyed8hin0.05%TTC.Conclusion　ThisruleapplytoinspectseedofTripterygiumhypoglaucum.Keywords:Tripterygiumhypoglaucum;seed;inspectionrules差异较大，外形、大小差异亦较明显，种子检验是保证种子质量的主要手段，因此，为保证药材生产的高效进行，参考农作物种子质量检验规程[6]，对昆明山海棠种子检测方法进行研究，从而制定昆明山海棠的种子质量标准。1　 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 昆明山海棠种子采自昆明市、楚雄州、大理州、蒙自市各地。经过云南省药物研究所戚育芳正高级工程师鉴定为昆明山海棠Tripterygiumhypoglaucum(Levl.)Hutch。植物标本保存于云南—10—现代中药研究与实践2017年第31卷第2期Chin.Med.J.Res.Prac.,2017Vol.31No.2省药物研究所标本馆。 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 1　种子采样表Tab.1　Seedsamplingtable种子编号采集地点海拔（m）KMSHT-01昆明市团结乡2010KMSHT-02昆明市谷律乡2300KMSHT-03昆明市豹子箐1890KMSHT-04昆明市太平镇2001KMSHT-05昆明市太平镇册俄1919KMSHT-06昆明市西山区猫猫箐2281KMSHT-07大理宾川宾居镇2400KMSHT-08大理宾川宾居镇乌龙坝3010KMSHT-09楚雄永仁县江底河1000KMSHT-10楚雄永仁县江底河1200KMSHT-11楚雄大姚县赵家店2060KMSHT-12楚雄大姚县赵家店2630KMSHT-13楚雄大姚县赵家店2630KMSHT-14楚雄大姚县赵家店2600KMSHT-15文山市老寨乡1860KMSHT-16文山市老寨乡1860KMSHT-17文山市老寨乡1860KMSHT-18文山市乐薄竹诗冲1900KMSHT-19文山市乐薄竹诗冲1690KMSHT-20文山市乐薄竹诗冲1900KMSHT-21文山市马关县1400KMSHT-22蒙自市鸣鹫乡1780KMSHT-23蒙自市鸣鹫乡1880KMSHT-24蒙自市鸣鹫乡1790KMSHT-25普洱市龙潭镇1680KMSHT-26楚雄—平浪佛台山2060KMSHT-27楚雄—平浪佛台山1980KMSHT-28楚雄—平浪佛台山2000KMSHT-29楚雄—平浪佛台山2600KMSHT-30楚雄—平浪佛台山23002　方法2.1　扦样用徒手减半法分取送验样品，经过混合后组成一个原始样品。从原始样品中分取送检样品。2.2　种子净度分析实验中的昆明山海棠种子是由从不同地方采集回来的果穗剥皮脱粒得到的，所以里边没有杂质，也没有其他种子，所以净度为100%。2.3　真实性考察采用种子形态鉴定法，根据种子形态特征及基础数据来鉴定。不同地方分别随机取50粒种子，置于平底玻璃片上，在体式显微镜1倍视野下，用镜台测微尺，量取种子的长、宽、厚度。2.4　种子吸水特性分析称取1g种子浸入水中每隔1h将种子捞出吸干种子表面水分之后称取，直至恒重，重复3次。2.5　种子质量检测按GB/T3543.7-1995《中国农作物种子检验规程》其他项目检验规定采用百粒法和千粒法测定不同地方种子样品质量。2.6　不同地方的昆明山海棠含水量测定采用高恒温烘干法（130℃）测定昆明山海棠种子的含水量。2.7　种子活力测定目前种子检验规程中生活力测定标准方法为氯化三苯基四氮唑（TTC）法，预实验结果显示TTC法可作为昆明山海棠测定生活力的有效方法。因此，本实验采用TTC法测定昆明山海棠种子生活力。针对TTC染色温度、染色时间、染色浓度等条件进行摸索，确定昆明山海棠种子活力检测的标准，并对昆明山海棠种子进行染色，确定种子生活力。2.8　种子发芽实验采用水选法，选出饱满的种子，用乙醇（75%）消毒，然后用蒸馏水冲洗。考察不同发芽床、不同温度（15、20、25℃）、不同光照条件对种子发芽的影响。3　结果与分析3.1　地方种子真实性鉴定3.1.1　昆明山海棠果实及种子形态　　昆明山海棠翅果多为长方形或近圆形，果翅宽大，长1.2~1.8mm，宽1.0~1.5cm，先端平截，内凹或者近圆形，基部心形，果体长仅为总长的1/2宽仅占翅的1/4或1/6，窄椭圆线状，直径3~4mm，中脉明显，侧脉稍短，与中脉密接。蒴果具3片膜质翅，红色，距圆形，长约1.5cm，直径约1.2cm，具斜脉纹，种粒褐色至黑色，卵形或长卵形，具三棱（图1）。图1　昆明山海棠（A、花，B、果，C、种子，D、胚）Fig.1　Tripterygiumhypoglaucum（A.blossom;B.fruit;C.seed;D.embryo）3.1.2　昆明山海棠种子的基本特征　　分布测量昆ACDB—11—现代中药研究与实践2017年第31卷第2期Chin.Med.J.Res.Prac.,2017Vol.31No.2明山海棠种子的长、宽、厚度数据。综合分析种子的长、宽、厚度，种子的长度为0.50~0.69cm，种子宽度为0.20~0.35cm，种子厚度为0.19~0.21cm。3.2　昆明山海棠种子吸水特性测定将1g昆明山海棠种子浸泡在水中每隔1h捞出称取重量结果见图2，种子在一开始时重量上升的比较迅速，增长速度慢慢降低，在吸差不多6h时重量趋于稳定。由图2可看出昆明山海棠种子吸水过程有个阶段即快速吸水阶段、吸水缓慢阶段、吸水饱和阶段，0~3h为种子的快速吸水阶段，3~6h为种子的缓慢吸水阶段，7~9h为种子的吸水饱和阶段，8h后，重量恒定，故浸种时间为8h。图2　种子吸水曲线图Fig.2　Theseedsuctionfigure3.3　质量测定用百粒法测定KMSHT-7、KMSHT-22、KMSHT-26三份样品，测定值之间的变异系数为0.08%、0.15%、0.09%，小于4.0%，千粒法测定KMSHT-7、KMSHT-22、KMSHT-26三份样品，样品两重复间差数与平均值之比分别为0.78%、0.75%、0.93%，均小于5％，说明两种方法的检验结果有效，故采用较为简单的百粒法测定昆明山海棠的种子质量，昆明山海棠千粒重为6.01~11.81g。各地种子千粒重见表2。3.4　含水量测定采用高恒温烘干法0.5、1、1.5、2h测定含水量，种子在开始30min内迅速失去水分，之后缓慢失水，在烘干1.5~2h时，测得种子的含水量值趋于稳定因此采用高温烘干1.5h测定昆明山海棠种子水分。测定昆明山海棠种子含水量为8.21%~9.81%（表2）。3.5　生活力测定考察不同的染色温度、时间以及TTC浓度，以昆明山海棠胚完全、部分着色、不着色，颜色为鲜红色、无色为判定标准，判定有无活力（图3）。确定昆明山海棠种子在70℃恒温避光条件下，种子在0.05%TTC溶液中染色8h。不同产地的昆明山海棠生活力见表2，结果显示，不同产地的种子生活力差异显著。表2　昆明山海棠测定各项参数Tab.2　Determinationoftheparameters编号饱满度（%）千粒重（g）含水量（%）发芽率（%）生活力（%）KMSHT-0195.7111.4648.9095.6593.00KMSHT-0290.6211.1128.9095.6095.63KMSHT-0389.9611.2538.6895.0087.66KMSHT-0491.6210.9689.6094.6586.00KMSHT-0593.2610.9698.9694.0088.35KMSHT-0693.5610.8129.2395.1079.36KMSHT-0743.336.96159.3080.0080.00KMSHT-0850.366.88829.8180.0282.00KMSHT-0963.2111.8138.5286.0087.20KMSHT-1043.6511.6528.4187.2196.32KMSHT-1153.3610.3658.230.0082.36KMSHT-1252.9810.2988.3463.2385.23KMSHT-1350.6611.6988.2732.5685.20KMSHT-1461.7511.7608.5088.6288.63KMSHT-1562.629.8658.4956.6384.23KMSHT-1660.369.5658.2856.3580.26KMSHT-1751.528.9988.5685.3681.32KMSHT-1852.639.7549.0386.3688.36KMSHT-1953.009.7538.9480.0084.24KMSHT-2052.509.3698.9267.6679.26KMSHT-2150.859.2678.6775.0060.00KMSHT-2226.876.0059.360.0063.20KMSHT-2324.966.2139.250.0036.22KMSHT-2434.037.16358.5280.3296.20KMSHT-2530.236.9988.7683.2390.20KMSHT-2635.006.5648.6983.6389.01KMSHT-2734.237.2149.0279.6988.68KMSHT-2830.557.1689.3275.6386.65KMSHT-2970.107.84848.3480.3289.60KMSHT-3060.657.9668.2180.0080.23图3　不同TTC浓度与染色时间下昆明山海棠种子染色Fig.3　SeeddyeingindifferentconcentrationsofTTCandtime3.6　发芽实验3.6.1　发芽的最适宜温度及光照　　不同温度及光照条件下种子发芽差异较大，（25℃+光照12h）处（下转第16页）1.61.411.20.80.60.400.20hg1234567890.05%0.1%0.3%0.5%2h4h8h—16—现代中药研究与实践2017年第31卷第2期Chin.Med.J.Res.Prac.,2017Vol.31No.2参考文献[1]　国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京:中国医药科技出版社,2015:274.[2]　王　建,赵应学.不同种质类型广西莪术挥发油成分多样性研究[J].药物分析杂志,2010,30(6):1072-1075.[3]　杨　妮,戴　昱,王　建.不同种质广西莪术植物形态、药材性状及挥发油产量的聚类分析[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(2):12-15.[4]　黄海燕,杜红岩,乌云塔娜.基于杜仲转录组序列的SSR分子标记的开发[J].林业科学,2013,49(5):176-181.[5]　信朋飞,臧巩固,赵立宁.大麻SSR标记的开发及指纹图谱的构建[J].中国麻业科学,2014,36(4):174-183.[6]　王洪振,王　姝,邝盼盼.DNA分子标记技术及其在植物育种中的应用[J].吉林师范大学学报(自然科学版),2016,(1):108-111.[7]　杨林栋.分子标记技术及其在大白菜遗传育种中的应用[J].安徽农业科学,2015,43(4):30-33.[8]　上官凌飞,李晓颖,宁　宁.杏EST-SSR标记的开发[J].园艺学报,2011,38(1):43-54.[9]　杨　妮,苏伟敏,靳雅惠.适用于SSR分析的广西莪术DNA提取方法考察[J].中国实验方剂学杂志,2015,21(4):81-83.[10]　朱晓敏,王弦云,陈龙灿.杜仲SSR-PCR反应体系建立及引物筛选[J].安徽农业大学学报,2013,40(3):387-392[11]　郭　敏,李　毅,马彦军.山生柳SSR-PCR反应体系优化[J].草业科学.,2012,29(05):13-15.[12]　SijuS,DhanyaK,SyamkumarS,etal.ParthasarathyDevelopment,CharacterizationandCrossSpeciesAmplificationofPolymorphicMicrosatelliteMarkersfromExpressedSequenceTagsofTurmeric(CurcumalongaL.)[J].MolBiotechnol,2010,44:140-147.[13]　KomatsuK,SasakiY.Morphological,genetic,andchemicalpolymorphismofCurcumakwangsiensis[J].NatMed,2008,62:413-422.[14]　SigristMS,PinheiroJB,Azevedo-FilhoJA,etal.DevelopmentandCharacterizationofmicrosatellitemarkersforturmeric(Curcumalonga)[J].PlantBreeding,2009,129:570-573.[15]　肖小河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