连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性的研究

连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性的研究 专业:农产品加工与贮藏 研究方向:食品化学 获得学位名称:工学硕士 获得学位时间:年月 华中农业大学食品科技学院 二?年六月 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 否 如需保密,解密时间 年 月 日 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果.尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已 经发 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 或撰写过的研究成果,也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位 或证书而使用过的材料,指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究 所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明,并表示了谢意。 时间:砌年‘月上日 研究生签名:丝力』磊 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定,即学生必须按照 学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本;学校有权保存提交论文的印刷版和电 子版,并提供目录检索和阅览服务,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、 汇编学位论文。本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学 位论文的全部或部分内容,同时本人保留在其他媒体发表论文的权力。 注:保密学位论文即涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的 论文在解密后适用于本授权书. 缘二亥 导师签名: 学位论文作者签名:盗:乌二寿 签名日期:/年乡月日 签名日期:?历年乡月日 注:请将本表直接装订在学位论文的扉页和目录之问连续酶解花生蛋白及其 花生多肽抗氧化活性研究 目 录 摘 要??.??.. 英文缩略表及中文对照 第一章前言?.. .花生的概况??.. .花生蛋白的研究现状..花生蛋白的组成及其营养? ..花生蛋白加工的利用现状? ..花生蛋白酶解的研究进展? .抗氧化肽的研究进展?. .酶膜反应器在蛋白酶解过程中的研究进展?.. ..酶膜反应器的概念和原理? ..酶膜反应器的特点? ..酶膜反应器的分类? ..酶膜反应器在蛋白酶解过程的应用 ..酶膜反应器在蛋白酶解过程中存在的问 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 及其解决 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 ??. .本课题研究的意义、目的和内容??. ..本课题研究的意义和目的. ..研究的内容. 第二章连续酶解花生蛋白的工艺研究?.. .材料与方法..材料和试剂. ..主要仪器?.. ..实验方法?. .结果与 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 ..单因素实验结果与分析?. ..响应面分析. ..连续酶解和间歇酶解的比较??.华中农业大学 届硕士学位论文 .结论与讨论第三章花生多肽体外抗氧化活性的研究? .材料与方法..材料与试剂. ..主要仪器..实验方法?.. .结果与分析..花生多肽的还原能力??.. ..花生多肽对?自由基的清除能力?. ..花生多肽对扣自由基的清除能力? ..花生多肽对超氧阴离子一?自由基的清除能力 .结论??. 第四章花生多肽体内抗氧化活性的研究? .材料与方法..材料与试剂. ..主要仪器?. ..实验方法?。 .结果与分析..花生多肽对小鼠血清中、、和.的影响??.. ..花生多肽对小鼠肝脏中、、和.的影响??.. ..花生多肽对小鼠心脏中、、和.的影响??一 .讨论??. 第五章花生多肽不同组分特性的研究.材料和方法..材料与试剂一 ..主要仪器?.. ..实验方法?.. .结果与分析.分离纯化研究 ..花生多肽的连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 ..不同组分?自由基和超氧阴离子自由基清除能力的测定 ..花生多肽不同组分的氨基酸组成研究?. ..花生多肽不同组份分子量分布研究??. .讨论??. 结论与展望参考文献 致谢? 硕士期间发表文章附 图连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 摘 要 花生蛋白是花生榨油后的副产物,一般作为食品或饲料的原料。本文以花 生蛋白为原料,选用碱性蛋白酶,连续酶解并得到酶解产物即花生 多肽。同时对花生多肽的体外和体内的抗氧化性进行研究,并对其进行初步 的 分离纯化,进一步研究各个分离组分的氨基酸和分子量分布。此研究旨在为 工 业化连续酶解花生蛋白及花生多肽在功能性食品上的应用提供理论依据,并 以 此提高花生蛋白的附加值。主要研究内容和结果如下: .连续酶解花生蛋白的工艺研究。以水解度为指标,选用 碱性蛋白酶,采用酶膜反应器连续酶解花生蛋白。通过单因素试验选取试验 因 素与水平,并确定了操作压力为.。同时设计了四因素值、温度、底 物浓度和加酶量三水平的中心组合响应面试验。得出最佳工艺条件为:., 温度,底物浓度%,加酶量/。通过在最佳水解条件下进行水解, 实际得到为.%。 .花生多肽体外抗氧化活性的研究。考察了花生多肽的还原能力、?自 由基清除能力、”自由基清除能力和超氧阴离子一?自由基清除能力。 结果显示,花生多肽具有良好的还原能力,且对这几种自由基均具有不同程 度 的清除能力。随着花生多肽浓度的增大,其还原能力和对这几种自由基清除 能 力都增强。同时还测定了花生多肽对?自由基和超氧阴离子一?自由基 清除能力的半抑制浓度值,花生多肽对?自由基清除能力的值为 ./,对一?自由基清除能力的值为./。 .花生多肽体内抗氧化活性的研究。采用一半乳糖诱导衰老小鼠作为模型, 分别以小鼠的血清、肝脏和心脏组织中的丙二醛含量、超氧化物歧化 酶,谷胱甘肽和谷胱甘肽过氧化物酶.活性作为评 价指标,探讨花生多肽在生物体内的抗氧化作用。结果显示:与模型组比较, 高剂量的花生多肽能极显著降低一半乳糖致衰模型小鼠血清、肝脏和心脏中 含量.,并极显著提高和.的活力.,同时 显著增的含量.。同时还发现,与模型组比较,各花生多肽给 药组含量均有不同程度的降低,含量、和.活力均有一定 程度的升高,且与花生多肽的给药量存在明显的量效关系。华中农业大学届 硕士学位论文 .采用葡聚糖凝胶 .对花生多肽进行初步的分离纯化,对其 各个组分进行氨基酸成分和分子量分布进行研究,探讨其与抗氧化活性的相 关 性。花生多肽分离纯化后得到组分和组分这两个组分,通过比较?和 超氧阴离子一?自由基的清除能力,发现组分的抗氧化活性高于组分。 同时对组分和组分进行氨基酸分析得出,组分和组分中不同种类氨基 酸含量相差较大,且组分中疏水性氨基酸含量接近%,远高于组分中的 含量。在分子量分布研究中发现,组分和组分中%的肽段主要集中在 ?之间,其中组分中分子量分布更为分散些。 关键词:花生蛋白;酶膜反应器;连续酶解;花生多肽;抗氧化活性; ?连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究, , . , ., ., . . . : . . . ? , ,.. ,, .., 。,%/. . %. , . . ‘ 。一 . . ? . 一 .一 ./, ./. 华中农业大学届硕士学位论文 . , , ?, . : , ,. . ., . . . .一 , .,‘ 一‘ .., ,. . %, . ,.: ; ; ; ; ; ,二苯基一.苦基肼 ,一一 丙二醛超氧化物歧化酶 谷胱甘肽 ? 谷胱甘肽过氧化物酶三氯乙酸等电点生物价 ,’一连氨一乙基 ,?一一 苯并噻唑啉磺酸 二氨盐 ,叔丁基甲 .一?一 基苯酚 连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 第一章前言 .花生的概况 花生 .为豆科落花生属的一年生草本植物,俗称香果、 地果、落花生,主要生长在亚热带和热带及其地中海地区张敏,。花生 是我国乃至全世界广泛种植的经济作物之一,也是六大油料作物之一,其种植 面积仅次于油菜,居油料作物第二位。在我国,花生的种植地区非常广泛,南 起海南岛,北到黑龙江,东自台湾,西达新疆,但主要集中在山东、河北、河 南、安徽等省,占全国花生产量的%以上。随着花生种植面积和单产的逐年增 加,我国花生年产量从年起超过印度,居世界首位。年,我国花生 年产量已接近万吨,约占世界总产量的四成马铁铮,。 花生有很高的保健功效,在民间又称为“长生果,适用于治疗营养不良, 各种贫血、咳嗽痰喘、肠燥便秘、乳汁缺乏等症。在我国的医书就记载了许多 关于花生的妙用,《本草纲目》载:“花生悦脾和胃、润肺化痰、滋养补气、清 咽止痒;《滇南草本》载:“花生盐水煮食治肺痨,炒用燥火行血,治腹内冷积 肚疼:《药性学》载:“食用花生养胃醒脾,滑肠润燥。目前研究发现,花生 中含有多种抗衰老成分,其中尤以单不饱和脂肪酸、白藜芦醇、一植物固醇、 叶酸和微量元素等成分的作用突出万书波,。这些成分对于调节人的免 疫,预防心脑血管疾病有着重要作用。同时花生还含有其他杂粮少有的能促进 人体新陈代谢、增强记忆力、益智延寿的胆碱和卵磷脂等营养成分。花生壳中 ,。 含有木犀草素及谷甾醇,这些组分可降血压、降血脂 , 脂肪和蛋白是花生的主要成分,其脂肪含量约为%%,仅次于芝麻, 而高于大豆;而其蛋白含量约为%%,则仅次于大豆。目前,在我国花生 主要用于榨油,直接食用占其次。由于主要采用热榨和浸提法提取油脂,导致 花生饼粕中的蛋白严重变性,只能作为饲料而不再适合食用,从而无法提高花 生蛋白这一广阔资源的附加值。近年来,逐渐认识到利用花生蛋白这一资源的 重要性,通过采用新的技术,如低温冷榨法、水酶法等提取花生油,不仅提高 了花生油的品质,而且得到了低变性的花生饼粕,从而为进一步充分利用花生 蛋白资源成为了可能吴文海等,。华中农业大学届硕士学位论文 .花生蛋白的研究现状 ..花生蛋白的组成及其营养 花生蛋白质中约有%是水溶性的,称作清蛋白,其余%为球蛋白,由花 生球蛋白和伴花生球蛋白两部分组成周瑞宝,。花生球蛋白存于糊粉粒或 蛋白体内,伴花生球蛋白则存于细胞质中。韦一能年等采用聚丙烯酰 胺凝胶电泳、等电聚凝、等电聚焦后进行、醋酸纤维膜电泳等方 法对花生蛋白进行分析,发现等电聚焦可显示条区带,其中条很明显;而聚 丙烯酰胺凝胶电泳和花生蛋白乳状液的醋酸纤维膜电泳的结果都是条区带, 其 中条明显,说明花生蛋白有两种主要组分和一种次要组分。杨晓泉等 年分离纯化了三种主要的花生蛋白:花生球蛋白、伴花生球蛋白及蛋白, 采用.及.研究这些花生蛋白的组成。.显示花生球蛋 白由两个酸性亚基.、.,.、.和三个碱性亚基.、 .,.,.组成,伴花生球蛋白仅有一个亚基、.,而 蛋白共用两个等电点.、.,主要是个以离解形式的多肽组成而 非亚基形式存在。同时杨晓泉等年专门对蛋白进行研究,发现蛋 白富含天冬氨酸、谷氨酸和精氨酸,与花生脱脂蛋白的 氨基酸组成相似,但其蛋氨酸和半胱氨酸含硫氨基酸含量明显 高于脱脂花生蛋白粉。通过对蛋白进行差示扫描热分析,得出其耐热性较强, 有很强的亲水性。这可能是由于富含和等含硫氨基酸,形成多个二硫键, 对整个蛋白质的构象其稳定作用。 花生蛋白粉作为一种廉价的蛋白质资源,其蛋白含量高于牛奶、猪肉和牛 肉等,且基本不含胆固醇。在植物蛋白资源中花生蛋白的营养价值仅次于大 豆 蛋白,其功能与大豆蛋白接近,但其抗营养因子比大豆少很多,故比大豆蛋白 更易吸收。而与菜籽,棉籽蛋白相比,所含毒性物质较少,食用安全性较高。 花生蛋白含有人体所必须的种氨基酸,蛋白质的生物价为,功效 比为.,易被人体所消化吸收。花生蛋白中必需氨基酸的含量如表 卜所示裴剑慧等,。 连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 表?花生蛋白中必需氨基酸的含量/ ?/ 标准 氨基酸名称 花生蛋白 氨基酸名称 标准 花生蛋白 . 异亮氨酸 . . . 亮氨酸 . . . 赖氨酸 蛋氨酸 . . . 苯丙氨酸 苏氨酸 . . . 色氨酸 . . . 缬氨酸 从表卜中可以看出,花生蛋白中的必需氨基酸除蛋氨酸和赖氨酸含量较 低外,缬氨酸、苏氨酸和异亮氨酸含量均接近联合国粮农组织所规定的标准, 其 他三种都超过此标准。 花生蛋白在食品工业中广泛应用,花生过敏现象日益严重,特别是欧美国 家。根据目前研究发现,自从年 从花生原料中发现第一个致敏蛋 白并命名为一之后,现在已经识别出了种致敏蛋白包括糖蛋白。按 照国际过敏原统一命名标准分别为:、、、、、 和 ,其中%的病人血清都识另 和 ,所以它们是主要的 致敏原丛艳君等,。与牛奶、鸡蛋等过敏原不同,花生过敏一般不随年 龄增长而消退,只有%左右的患者随年龄增长不再对花生过敏李宏和张红誉, 。由于在加工过程中,花生中的过敏原不易被破坏,而且目前还没有找到 一种合适的方法对花生进行脱敏,所以限制了花生蛋白更为广泛的应用。 .。花生蛋白加工的利用现状 目前我国花生蛋白的主要在饲料中应用,作为动物的蛋白补充剂。而在食 品中主要产品是花生蛋白粉,作为食品加工的基础原料。由于花生蛋白粉具有 良好的加工功能性,如持水性、溶解性、乳化性、凝胶性、起泡性和泡沫稳定 性等,可以广泛用于肉制品加工、谷物及焙烤食品、植物蛋白饮料、调味品和 休闲食品等,起到改善产品品质和营养结构的作用。熊柳等年研究将 花生蛋白粉添加到面条中,能有效改善面条的品质,提高面条营养价值。其花 生蛋白粉添加量为%时,面条蛋白质含量可达%,面条更加耐煮,烹调损失 率减少.%,拉伸长度增加%。为了扩大花生蛋白的应用范围,利用物理改 性加热、冷冻、加压和辐射等、化学改性酰化、磷酸化、共价交联和乙酰华中农业大学届硕士学位论文 化等和酶法改性来提高花生蛋白的功能性质,使其具有更好的加工性能。潘 秋琴等采用低摩尔比/花生蛋白体系对花生蛋白进行磷酸化改性,使其等 电点由.降至.,同时溶解性、乳化能力和乳化稳定性显著提高潘 秋琴等,。而美国、日本在花生蛋白方面研究居世界领先地位,可以生产 注射、乳化、凝胶、分散等多种类型的花生蛋白产品,广泛用于肉制品、乳 制品、焙烤食品等行业董贝森,。 ..花生蛋白酶解的研究进展 研究发现,碱性蛋白酶对花生蛋白的水解有较好的作用,可以得到 较高的水解度。史军等年选用碱性蛋白酶和复合蛋白酶 分别对花生蛋白进行水解。结果表明对花生蛋白是水解能力优 于,最终优化条件为:%底物、?、%酶,,酶解,此条件下 水解度达到.%。同时还发现花生肽具有较强的抗氧化性,且随水解度的增 加而提高。王建化等年以水解度为指标,比较和蛋白 酶水解花生蛋白,也得出的水解效果比好。张宇吴年 分别考察了、、、和中性蛋白酶.对花生蛋白的 水解效果,以短肽得率和水解度为指标,其中以效果最好, 最佳水解条件为:温度?、底物浓度%,酶用量/,水解时间。 同时还研究了分步酶解花生蛋白,在酶解的基础上,通过比较、 、和中性蛋白酶.继续水解花生蛋白的能力,得效 果最好。水解度比单酶水解提高了.%,短肽得率提高了 近%。谭斌等年通过比较.中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和胰酶对花 生蛋白的水解能力,得出其水解能力依次为:.中性蛋白酶木瓜蛋白酶 胰酶。 张伟等年采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、复合风味酶固/ 液和木瓜蛋白酶水解花生蛋白制备血管紧张素转化酶抑制肽,通过体外 检测法测定其抑制率,其中碱性蛋白酶水解物的抑制率最大。最佳水解条 .,水解时间 件:温度为.?,底物浓度为.%,酶与底物质量比.%, 为时,其抑制率可达.%。同时黎观红等年比较碱性蛋白酶 卜连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 有很强的抑制活性,而的水解物则显示较弱的抑制率。 总之,花生蛋白的酶解研究非常多,但都只局限于单酶酶解、复合酶解和 分步酶解,有关连续酶解花生多肽的研究未见报道。 .抗氧化肽的研究进展 目前有关抗氧化肽的研究非常多,主要集中在各种蛋白酶解液中含有的抗氧 化活性肽,其中蛋白来源主要从植物蛋白和动物蛋白。同时抗氧化肽按来源 可分 为天然抗氧化肽和蛋白水解产生的抗氧化肽。 当前研究最多,其抗氧化机理研究最清楚的天然抗氧化肽是肌肽和谷胱甘 肽。肌肽是一种水溶性二肽,由一丙氨酰组氨酸以??构成的二肽, 广泛存在于脊椎动物的骨骼肌,它能够抑制由金属离子、血红蛋白、脂酶和 单线 态氧、超氧阴离子、羟自由基以及?催化的脂质氧化张梦寒等,。 谷胱甘肽是一种是由谷氨酸、甘氨酸和半胱氨酸组成的三肽,广泛存在于动 植物 体内,是体内重要的自由基清除剂。 一般来说,植物、动物蛋白经过适当的酶解,可以产生具有抗氧化活性的肽, 其活性相比蛋白有很大的提高。酶解液的抗氧化活性强弱与选用的蛋白酶种类、 酶解的条件和时间有很大的相关性。且不同分子量段的多肽,其抗氧化活性差别 也很大。所以研究酶的选择、酶解条件和时间,及其不同肽段的抗氧化活性差异 一直是活性多肽的研究重点。 植物蛋白主要以大豆蛋白和玉米蛋白研究居多,也包括花生蛋白、米糠蛋白、 麦胚蛋白等。周徐慧年利用碱性蛋白酶在其最佳条件下酶解汉 麻籽蛋白来制备抗氧化肽,/酶解产物的自由基清除率为.%, 显出较好的抗氧化活性。通过分离纯化,采用.?分析,得到具有 较强抗氧化活性组分的氨基酸序列分别为、、 或。朱艳华年通过测定玉米多肽的还原能力、超氧阴离 子清除能力,自由基清除能力等指标,发现玉米多肽有较强的抗氧化能力。 刘丽娜等年通过研究超滤过后的花生多肽对红细胞溶血、肝脏 与肝线粒体的脂质过氧化以及肝线粒体肿胀度的影响,发现花生多肽能有效抑制 有羟基自由基引起的脂质过氧化,保护生物膜,减轻肝线粒体肿胀程度,其具有 很强的抗氧化能力。华中农业大学届硕士学位论文 动物蛋白则以乳蛋白、胶原蛋白和水产品蛋白研究较多。等年 研究发现利用胰蛋白酶水解一种鱼的鱼皮,其酶解液有很强的超氧阴离 子、自由基淬灭能力,并且分离纯化一种氨基酸序列为..?. ?.的抗氧化肽。李琳年选用酶解鳙鱼肉, 得到具有较强自由基清除能力的抗氧化肽。等人年利用 .凝胶色谱柱分离毛鳞鱼水解物得到四个组分,采用一胡萝卜素一 亚油酸模型分析每个组分的抗氧化性,发现有一个组分有显著的抗氧化性, 另有 两个呈弱抗氧化性,还有一个表现出促氧化性作用。 等人年 利用蛋白酶酶解乳清蛋.,发现酶解的酶解液有最强的还原性。 .凝胶色谱柱分离酶解液,得到个部分,其中分子量为 利用 ..的部分有最强的自由基清除能力。 其他种类的蛋白,也是目前研究的热点,如叶蛋白、昆虫蛋白和骨蛋白等。 年利用鲭鱼肠道内天然酶酶解阿拉斯加鳕鱼的骨架,利用 . 超滤将酶解液分为五个部分,其中部分分子量小于具有最强的抗 氧化活性,并进一步分离得到氨基酸序列为....研的多肽,其 分子量为。刁静静等将骨蛋白利用碱性蛋白酶水解.,测定 其水解液的还原能力、金属螯合能力和清除自由基能力,发现底物浓度为%, 水 解的水解液有较高的抗氧化活性。肖红年采用碱性蛋白酶水 解中华稻蝗蛋白,通过测定体外抗氧化指标和小鼠的抗衰老实验,得出中华 稻蝗 蛋白酶解液有很好的抗氧化活性。 等年将苜蓿叶蛋白利用 碱性蛋白酶水解,发现其水解液有很强的抗氧化活性,且其中.%的 多肽分子量低于。 .酶膜反应器在蛋白酶解过程中的研究进展连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 可能是由于在固定化过程中,酶的空间构型发生变化或者酶的接触面减小而造 成的。所以为了能够降低蛋白水解的工业成本,克服以上两种方法的不足,现 在提出了一种新的蛋白酶解方法一利用酶膜反应器装置连续酶解蛋白。 ..酶膜反应器的概念和原理 酶膜反应器是将酶催化反应和膜分离耦合在一起的装置, 集反应、产品 分离和酶回收再利用于一体,它是在膜反应器上改进而成的。膜反应器最早应 用于微生物的培养,年用透析装置培养出了牛痘苗细胞,年 ’ 第一次提出膜反应器概念,从此膜反应器应用到了许多领域,包括生物、化工、 环境、农业和食品等领域.. .,。酶膜反应器的原理是利用膜 的选择透过性和膜两侧的推动力如压差、电势差等,来分离出产物,同时将 酶和未完全水解的底物截留,使其重新回到反应体系中。这样可以大大提高酶 使用的重复性,同时还可以减少酶解过程中产物抑制现象,从而可以获得较高 ’ 的酶解反应速率和转化率。酶膜反应器主要包括反应装置和膜分离装置,其中 膜分离装置是整个设备的关键,它决定着酶膜反应器整体运行的稳定性。随着 材料科学的发展,具有高效分离、抗污染性、耐高温和酸碱性的膜将不断优化, 酶膜反应器的使用的效果将会逐步提高,应用的范围越来越广。图为酶膜 反应器的结构简图。 卜反应罐;。匾温水浴锅;一蠕动泵;一膜分离装置;一成品罐;一酸或碱液 罐;一料液罐;一搅拌器; 图卜酶膜反应器结构简图 .?..酶膜反应器的特点 与传统的间歇式反应器相比,酶膜反应器有如下优点:由于集酶解反应 华中农业大学届硕士学位论文 和产物分离于一体,可以实现连续化操作;酶的反复利用,减少酶成本的投 入;有选择性的移出反应产物,减小了产物抑制现象,提高了反应速率和底 物转化率;通过膜的选择性,可以控制水解产物分子量大小,从而可以获得 较均一的产物。 ..酶膜反应器的分类 根据不同的分类方式,可以进行如下分类: 根据反应器中酶的状态不同,可以分为游离化和固定化酶膜反应器。 游离化酶膜反应器是将酶与底物直接混合反应,利用膜的选择性将酶截留住, 再返回到反应器中,继续酶解反应,由此达到酶的重复利用。此方法酶可均匀 地分布于底物中,酶与底物充分接触,反应速度快,反应较完全,但存在着酶 易发生剪切失活和酶的泄漏现象,使酶活和反应器运行的稳定性受到较大影响。 固定化酶膜反应器是通过酶的固定化技术如化学结合法、物理吸附法等将 酶固定在膜上,形成酶膜。通过这种方法减少了酶的泄漏损失,使反应器更加 稳定,但酶的分布往往不均匀,传质阻力较大姜忠义和陈洪钫,。 根据膜材料的不同,又可分为有机和无机酶膜反应器。有机膜材料主 要是一些高分子的碳氢氧的聚合物及其衍生物,如醋酸纤维素、聚醚和聚砜等 陈静,。随着膜材料科学的发展,无机膜材料应用的范围越来越广。比 其有机膜,它具有耐高温、耐酸碱、易于清洗等方面的优势,成为今后发展的 主要方向。 根据膜分离技术的不同和截留分子量,由大又可以分为渗析酶膜 反应器、反渗透酶膜反应器、超滤酶膜反应器和纳虑酶膜反应器。可以根据产 物分子量的大小来选择所需要的类型。在蛋白水解的过程中,超滤应用的最广。 因为功能性多肽的分子量一般分布在以下,而酶的分子量一般为 ,超滤膜的分子截留量为.,所以超滤膜能在此范围内起到 好的分离作用。 依据酶膜反应器的构造或流体力学特性的不同,酶膜反应器可分为连续性搅拌式反应器 和活塞流动式反应器 ,彭益强和方柏山,。 根据传质推动力的不同,有可以分为压差酶膜反应器、浓差酶膜反应连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 器和电位差酶膜反应器。 ..酶膜反应器在蛋白酶解过程的应用 蛋白通过水解,其功能性大大提高,产生的多肽具有多种功能性质如抗 氧化性、抗疲劳和促进肠道益生菌的生长等,可以广泛地应用于食品工业,如 添加到饮料和婴儿奶粉,做成功能性饮料和营养配方奶粉和临床营养品。但是 由于传统的间歇式酶解反应有许多缺点,阻碍了功能性多肽在食品工业上的应 用。随着酶膜反应器这个概念的提出,及其不断地改进,通过酶膜反应器来水 解蛋白,使其在工业上的应用成为可能。一般在酶膜反应器中酶解蛋白的过 程 如下:加入一定浓度和体积的底物于反应罐中底物加入前要经过离心或 者过滤,将反应罐置于水浴锅或保温套中,同时调节酶解反应所需的温度和 值;通过计算将一定量的酶加入到反应罐中,预先水解一段时间;开 动机器,即酶膜反应器开始运行,收集透过液,即所需的产品。在此过程中, 为保持酶解反应的连续性和维持反应罐中液面平衡,需加入底物。同时根据 值的变化加入酸或碱,使值维持在酶解反应最适值。现在天津大学的吴玉凤 等人研制出了酶膜反应器的控制系统,可以自动控制酶膜反应器所需的温度、 值和反应罐中的体积吴玉凤等,,大大提高了酶膜反应器自动化控制, 使其在工业上应用成为可能。 ...在植物蛋白酶解过程中的应用 植物蛋白来源广、产量大、价格便宜,有着其它蛋白无可比拟的优势。特 别是经过榨油后的各种饼粕,不仅有着较高的蛋白含量,如花生粕中粗蛋白含 量近高达%,而且价格更加低廉,如能充分利用这一资源,提高其经济附加值, 可以形成一条可观的产业链。其中通过酶解这些植物蛋白生产功能性多肽是个 很好的出路,是目前人们研究的热点。王文杰和王璋年利用酶膜反应 器对大豆分离蛋白进行连续化水解进行了研究。为了获得大豆分离蛋白在酶 膜反应器的最佳水解工艺条件,以平均水分通量。。姆和蛋白质回收率忡。。为 指标,通过响应面分析方法对初始水分通量”初始蛋白浓度和初始蛋白酶 浓度/进行优化;得出以上个因素对?壮和一。。的影响显著,并存在 显著差异,并得出了个因素的最佳工艺条件,最后试验得到在最佳工艺条件 下 哪。和帅。。。分别为.%和.%。..’等人年研究了 华中农业大学届硕士学位论文 紫苜蓿蛋白在酶膜反应器中的情况。他们选取了酶和底物的浓度、透过液的 流 量、反应的体积和滞留时间为参数,优化最佳工艺条件,最终得到蛋白转化率 为.%。同时他们研究发现选用截留分子量为的超滤膜,没有发现 明显的酶活损失。等人年使用截留分子量分别为和 的酶膜反应器对大豆分离蛋白分别进行连续性酶解。他们研究发现 经过不同截留分子量的膜的透过液在为时完全溶于水;在水分活度为 ..时,比大豆蛋白水的结合能力提高了..倍。还有透过液的抗氧化 性比其大豆分离蛋白有显著性提高,截留分子量为的透过液的抗氧化性 比截留分子量为的透过液的抗氧化性要高。最后他们还考察了酶膜反应 器的稳定性,得出反应器可以进行长达的连续酶解过程。. 等人年又利用酶膜反应器水解大豆分离蛋白制备血管紧张素转化酶抑 制剂。他们从五种不同的蛋白酶中选出水解产生的水解物具有最高的 抑制活性。再以半抑制浓度值为指标,得出大豆分离蛋白在酶 解下的最佳的工艺条件。同时还对膜的截留分子量?进行了选 择,得出截留分子量为时,透过液的值从.降低. /,的抑制性大大提高,且肽的回收率达到.%。在以上最佳工 艺条件下,酶膜反应器可以稳定的连续生产超过。 ...在牛乳蛋白酶解过程中的应用 当今国内外应用酶膜反应器研究牛乳蛋白主要集中在乳清蛋白和酪蛋白这 两个部分,其中乳清蛋白是研究的重点。因为它是很多牛乳产品加工的副产 物, 来源广泛,价格便宜。陈静年为降低牛乳蛋白致敏性和提高消化率,先 将牛乳中酪蛋白与乳清蛋白的比例调节为:以模拟母乳,再用酶膜反应器 生产牛乳蛋白水解物。在此研究过程中以温度、值、底物浓度,酶与底物的 比例/和压力为影响因素,得出最佳的工艺参数;同时发现酶膜反应器在连 续化工作以后,生产效率下降。等人年也是通过利用酶膜反 应器水解乳清蛋白,使其抗原性降低了.%,扩展了它的使用范围。他们经 过长时间的运行,没有发现酶有明显的失活,底物的转化率可以达到%左右; 通过分析酶解物分子量的分布主要集中在以下,占到总量的.%。 等人年选取底物浓度、酶浓度和初始透过液通量 连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 个影响因素,利用响应面优化乳清蛋白在切变流酶膜反应器中的工艺参数。 同 时他们还发现在增加酶浓度的情况下,透过液比率化眦、残留酶活“和透 过液蛋白回收率印姗。都有所增加;随着初始透过液通量的增加,残留酶活发 生了下降。齐崴等人年采用酶膜反应器连续水解酪蛋白制备酪蛋白磷 酸肽,得出截留分子量为的中空纤维膜对胰蛋白酶及酪蛋白几乎完全截 留。通过动力学模型推导发现初始底物质量浓度、初始酶浓度、初始反应体积 和初始膜渗透通量与米氏常数和酶解反应转化率成反比关系。同时将间歇和 连续酶解过程进行比较分析,得出连续酶解的米氏常数和酶解反应转化率 其间歇酶解都大大提高,证明酶膜反应器可以大幅提高蛋白酶的利用率和酶解 效率。 ...在其他蛋白酶解过程中的应用 目前有关应用酶膜反应器水解蛋白的研究主要集中在植物蛋白和牛乳蛋白 这两方面,而有关其它种类蛋白的研究报道较少,主要是鱼肉加工中剩余的废 弃物如鱼皮和动物的血液等。等人年使用木瓜蛋白酶分子 量.?对血红蛋白进行连续性酶膜反应,探讨都为无机的微滤膜平 均孔径为.和截留分子量为超滤膜对酶截留方面的差别。他们发 现经过个小时酶解后,通过微滤膜后的酶活损失达到%,而超滤膜只有%, 所以超滤膜截留酶的效果比微滤膜好。同时他们指出当切变流速达/时, 酶和血红蛋白都发生了变性,水解度下降;当加入倍的最适底物浓度于反应器 中,没有观察到底物和产物的抑制现象。和年创新地采用 个酶膜反应器串联水解鳕鱼皮,来制备抑制肽,经过分离纯化得到一组新的 抑制肽,并进行了氨基酸序列的测定。 ..酶膜反应器在蛋白酶解过程中存在的问题及其解决方法 利用酶膜反应器水解蛋白比传统的间歇式水解有着无可比拟的优势,却存 在一些问题,限制了它的应用,其中酶的失活和遗漏、膜的污染是两个主要方 面。由于以上两个原因造成了酶膜反应器不能长时间稳定地运行,且酶的利 用 率下降。通过等人年的研究发现,当切变流速增大到一定程 度时,可以造成酶的变性,从而使酶发生失活。同时还证明了酶的遗漏和膜的 孔径有关,孔径越大酶透过的越多,所以要选择合适的膜来减少酶的遗漏。膜 华中农业大学届硕上学位论文 的污染形成是一个很复杂的过程,影响的因素很多,例如操作时的跨膜压力、 底物的浓度、膜的种类、操作温度和溶液的值等。随着跨膜压力的增大,膜 的通透量增大;当压力达到一定程度,浓差极化现象加剧,膜表面的凝胶层逐 渐增厚,从而造成膜的通透量下降。底物浓度越大,粘度越大,减小了蛋白质 分子在溶液的扩散系数,加重了浓差极化现象,从而造成膜污染的加剧。无机 膜的抗污染性比有机高分子膜好,所尽量选择无机膜。操作温度越高,溶液粘 度就越低,则浓差极化现象减弱,从而减轻膜的污染。由于蛋白质在偏离等电 点时,溶解性增大,亲水性增强,被膜吸附在膜表面的量就会减少,则减轻膜 的污染;但值过高,蛋白会发生变性冯彪等,年; ., 年; .,年。所以在进行酶膜反应器水解蛋白的时候,优化以上主 要参数,使反应能够稳定长时间地运行;同时,还要考虑到酶解过程的最适条 件;综合考虑,选出最佳参数条件。等人年研究了底物浓度、操 作压力和溶液中的离子强度三个因素对连续化水解酪蛋白糖肽的影响,并得 出 了最佳工艺条件。 除了优化操作参数外,人们还通过其他方法来减轻膜的污染。.等 人年在酶解前通过对山羊的乳清蛋白液进行预处理先加热?, 然后在?条件下微滤。他们发现在获得相同透过液流量时,料液没有经过 预处理,酶膜反应器所需的操作压力是经过预处理的倍,所以适当地进行料液 的预处理可以减轻膜的污染。等人年在有关酶膜反应器的文章中 提到将蛋白液预先水解,以降低料液的粘度,可以减轻膜的污染。 酶膜反应器水解蛋白溶液后由于膜的污染,造成膜通透量的下降,从而使膜 分离效率的降低,所以必须对膜进行清洗。由于膜的材质、污染物的种类和污染 情况的不同,所以必须选择正确的清洗方法和清洗剂。这样既可以取得好的效果, 而且也可以节约成本王涛等,年。清洗方法大体可分为物理清洗法、化 学清洗法和混合清洗法。清洗剂的种类较多,例如酸性或者碱性溶液、表面活性 剂和专业清洗剂等。由于蛋白的特殊性,容易造成膜的严重污染,所以清洗比较 困难。一般是应用混合清洗法,选择多种清洗剂来处理膜的污垢。江连洲等人 年专门研究了超滤大豆酶解液后膜的清洗。他们先用一温水清洗 . ,再用.%含酶清洗剂在。下清洗. ,再用?水清洗后,膜 连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 通量恢复度达.%;并指出清洗温度是最大的影响因素。 .本课题研究的意义、目的和内容 ..本课题研究的意义和目的 ...提高花生蛋白的附加值 花生是我国的六大油料作物之一,资源丰富。在我国花生除直接食用和出口 外,主要用于榨油,但榨油后的花生粕未能充分地利用。花生粕中含有%左右 的蛋白,是一种很好的植物蛋白资源何东平等,。目前国内市场上有花 生蛋白粉产品,主要是冷榨花生粕直接粉碎的粗产品,蛋白含量为%%, 一般作为食品加工的基础原料张宇吴和王强,。大量研究发现,蛋白在 适合的条件下进行酶解,可产生的具有较高活性的多肽,而生物活性多肽的价值 是蛋白的几十倍。所以研究花生蛋白的酶解工艺,以此得到产量高和活性高的花 生多肽,从而可以提高花生蛋白的附加值。 ...提供工业连续酶解生产花生多肽的基础数据 目前水解蛋白普遍采用间歇酶解工艺,存在酶不能重复使用;生产成本高; 反应时间长;生产效率低;每批次产品质量难控制等问题,而酶膜反应器可以很 好的解决这些问题。而有关连续性酶解花生蛋白的研究未曾见报道。本实验通过 利用先进的酶膜反应器设备酶解花生蛋白,探讨最佳的酶解工艺条件,从而为能 在工业上的应用提供指导。 ...提供花生多肽在功能性食品上应用的理论依据 目前具有抗衰老功能性食品是研究的热点,而抗氧化活性肽具有来源广泛、 价格低廉、纯天然和较高的生理活性更是研究的重点。通过对花生多肽进行体外 和体内的抗氧化性研究,来评价花生多肽的抗氧活性的强弱。并以此为花生多肽 在功能性食品上的应用提供理论基础。 ..研究的内容 .研究利用酶膜反应器连续酶解花生蛋白的最佳工艺。 .通过选用还原能力、?自由基清除能力、“自由基清除能力和超氧 阴离子一?清除能力这四个抗氧化指标,来评价花生多肽的体外抗氧化能 力。华中农业大学届硕士学位论文 .利用一半乳糖诱导亚急性衰老小鼠模型,探讨花生多肽的体内抗氧化效果。 .采用葡聚糖凝胶色谱对花生多肽进行初步的分离纯化,并比较各个组分的体 .外抗氧化活性,同时对其氨基酸和分子量分布进行研究。 连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 第二章连续酶解花生蛋白的工艺研究 花生是我国的六大油料作物之一,资源丰富。在我国花生除直接食用和出 口外,主要用于榨油,但榨油后的花生粕未能充分地利用。花生粕中含有% 左右的蛋白,是一种很好的植物蛋白资源何东平等,。目前国内市场上 有花生蛋白粉产品,主要是冷榨花生粕直接粉碎的粗产品,蛋白含量为%一 %,一般作为食品加工的基础原料张宇吴和王强,。研究发现,花生 蛋白进行酶解后产生的生物活性肽具有多种功能活性,如降血压,抗氧化等, 其相对分子量大多分布在以下。同时通过对各种蛋白酶的选择研究,发现 碱性蛋白酶对于花生蛋白的水解优于其它种类蛋白酶,并且产生的生 物活性肽的功能活性也优于其它蛋白酶水解产生的史军等,;王瑛瑶和 王璋,;何东平等,;黎观红等,,所以本文选用碱性 蛋白酶来水解花生蛋白。 目前水解蛋白普遍采用间歇酶解工艺,存在酶不能重复使用;生产成本高; 反应时间长;生产效率低:每批次产品质量难控制等问题,而酶膜反应器可以 ,是将酶催化 很好的解决这些问题。酶膜反应器 反应和膜分离耦合在一起的装置,集反应、产品分离和酶回收再利用于一体, 它是在膜反应器上改进而成的。当前国内外有关利用酶膜反应器酶解蛋白的 研究不是很多,主要集中在牛乳蛋白的酶解上 .,; .,;齐崴等,; ,,而酶解花生蛋白的研究未曾见 报道。本实验通过利用先进的酶膜反应器设备酶解花生蛋白,采用截留相对 分 子量为的聚砜膜,探讨最佳的酶解工艺条件,从而为能在工业上的应用 提供指导。 .材料与方法 ..材料和试剂 花生蛋白粉蛋白质.%,水分.%,脂肪.%,灰分.%:市场购买; 碱性蛋白酶:食品级,酶活力.×,丹麦公司;其他试剂均为 分析纯。华中农业火学届硕士学位论文 ..主要仪器 ‘ 仪器名称 型号 生产厂家 台式离心机. 上海安亭科学仪器厂 冷冻干燥机 美国公司 上海虹益仪器仪表有限公司 计一 恒温水浴锅. 常州澳华仪器有限公司 . 电动搅拌机 上海标本模型厂 半自动凯氏定氮仪 一 上海新嘉电子有限公司 . 超滤机 广州洁圣膜技术有限公司 超滤机使用中空纤维超滤膜,膜材料为聚砜膜,膜面积为.,截留分子 量为,操作温度:??。 ..实验方法 ...测定方法 蛋白质含量测定:凯氏定氮法 蛋白酶活力测定:改进的酚法 .,: 蛋白质水解度测定:.法檀志芬等,。 ××二×土×二×%? :水解度,%;:水解过程中所消耗的碱量儿;:碱液的浓度/; :水解液中蛋白质的质量;氨基的平均解离度;‰:为未水解时 单位质量蛋白质所含肽键的总数,/,对花生蛋白而言,.张宇 昊和王强,。 ...花生蛋白的制备张伟等, 花生蛋白粉一溶解料水比:一碱溶?,加/调到 .,浸提一离心/一收集上清液一酸沉加/ 调.一离心/下层沉淀一冷冻干燥一花生蛋白蛋 白含量.% ...花生蛋白连续酶解工艺流程 称取一定量的花生蛋白溶于适量水中,配置成一定浓度的花生蛋白液, 连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 放在恒温水浴锅中达到反应温度,然后调节值为设定值,?加入一定单位的 碱性蛋白酶,先在反应器中进行酶解.,并滴力/的溶液 维持反应体系恒定, 记录 混凝土 养护记录下载土方回填监理旁站记录免费下载集备记录下载集备记录下载集备记录下载 滴加的体积。再开启超滤装置使水解液经泵流入超 滤装置中,压力控制在.,用量筒接收透过液,截留液回流至反应器, 同时滴加儿的溶液维持反应体系恒定,记录滴加的体积。在连续 酶解过程中,透过液每达至时,添已调节到相应的一定浓度的花 生蛋白液至反应器中,以维持反应体系的体积和底物浓度近似保持恒定,连 续 酶解后结束反应,最后清洗超滤机。下图为酶膜反应器连续酶解花生蛋白的 工艺流程图。 .反应罐;.恒温水浴锅;.蠕动泵;一膜分离装置;.透过液收集罐;一碱液 罐;.料液罐;.搅拌器; 图.酶膜反应器连续酶解花生蛋白的工艺流程图 .一 ...响应面试验设计 本试验采用.的中心组合实验设计原理,在单因素试验的基础 上,选取值,温度,底物浓度和加酶量这个因素进行因素水平的响 应面设计。试验因素水平见表.。华中农业大学届硕士学位论文 表.响应面试验因素水平表 一 .结果与分析 ..单因素实验结果与分析 ... 值对水解度的影响 在底物浓度为%,反应温度控制在。,加酶量为/,反应操作压 力为.条件下,分别取不同的反应值为,,,,,按照花生 蛋白连续酶解工艺流程进行酶解,结果见图?。 ? 筋 加 善 墙 蓬 加 囫 圆 内心,值 图. 与水解度的关系 . 由图.可知,水解度随着值的升高而增大,当值为时,水解 度达到最大,继续升高时水解度迅速下降。因此确定最适值在附近。 ...温度对水解度的影响 在底物浓度为%,反应值为,加酶量为/,反应操作压力为 .肝条件下,分别取不同的反应温度为,,,,?,按照花生 蛋白连续酶解工艺流程进行酶解,结果见图?。连续酶解花生蛋白及其花生多 肽抗氧化活性研究 ,..。.。。,。。。.......,..。。.....。, 一 温度? 图.温度与水解度的关系 . 分析图.可以得出,水解度随着温度的升高而迅速增大,当温度为 时,水解度达到最大,温度继续升高时水解度开始下降。因此确定最适温度在 ?附近。 ...底物浓度对水解度的影响 在值为,反应温度控制在?,加酶量为/,反应操作压力为 .条件下,分别取不同的底物浓度为%,%,.%,%,%,按照花生 蛋白连续酶解工艺流程进行酶解,结果见图。 加坞埔挖? ,世琏长 旧 ?囵 . 底物浓度% 图?底物浓度与水解度的关系 . 由图得出,在底物浓度为%时,水解度最大,若底物浓度继续增大, 水解度开始缓慢下降。因此确定最适底物浓度在%附近。 ...加酶量对水解度的影响 在反应温度为?,值为,底物浓度为%,反应操作压力为. 华中农业大学届硕士学位论文 条件下,分别取不同的加酶量为,,,,/,按照花 生蛋白连续酶解工艺流程进行酶解,结果见图。 孚毯琏 图 囵 日 一 一 囵一匝加酶量/ 图?加酶量与水解度的关系. 由图?可知,起始时水解度随着加酶量的增大而迅速增大,但加酶量达 到/时,加酶量继续增加,而水解度变化不大。 ...操作压力对水解度的影响 在底物浓度为%,反应值为,加酶量为/,反应温度为。条 件下,分别取不同的操作压力为.,.,.,.,.,按照花 生蛋白连续酶解工艺流程进行酶解,结果见图。 誊 趟 琏 圈一? . . . . . 操作压力 图操作压力与水解度的关系 .从图中可以发现,水解度随着操作压力的增大而减小,特别是当操作 压力大于.时,水解度迅速减小。可能是由于操作压力的增大,有些分 子量大于截留分子量的多肽通过膜流出,从而失去了进一步被酶解的可连续 酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 能,所以造成水解度下降。通过综合考虑操作压力对透过液流速和水解度的 影 响,确定操作压力为.。 ..响应面分析 根据.的中心组合实验设计原理,共有个实验点,其中 个为析因子,个为零点。零点实验进行次,以估计误差。以水解度为响应 值,试验结果见表。 表响应面分析结果. ? ... . .? .. . . ‘ . . . . . . .. .? . . . . ?. . 化坞坫埔坞坩加殂盟捣孔筋拍 .. ...回归分析及显著性检验 运用.软件对表中个实验点的响应值进行回归分析,得回归方 华中农业大学届硕士学位论文 程为:%.?..一..?. ..? . .木?..木?..木?.术?..木? ..木?..木?..::?..木?.. 从表可以看出,回归方程的一次项和二次项是极其显著的,交互项不显 著,说明回归方程为非线性回归,交互项对方程的影响远小于一次项和二次 项。 同时可知总回归模型达到.极显著水平,说明回归方程与实际情况 吻合的很好。复相关系数的平方.,说明模型能解释变化的.%。 表回归方程的方差分析木木 . . . . 木幸 . . . . . . . . 幸木 . . . . 木,‘ . . . . 木 . . . . . . . . . . . . 木宰 龇 . . . . . . . . . . . .连续酶解花生蛋白及其花生多肽抗氧化活性研究 由表?可知,值。,温度:和加酶量。对于水解度 有极显著的影响水平.,而底物浓度。不显著.。 此外,值和温度的交互作用也有显著作用。由值可知,值越大对花生蛋 白水解度影响就越大,所以各因素对花生蛋白水解度的影响次序:温度值 加酶量底物浓度。 ...水解条件值和温度交互作用对水解度响应面分析 ?... . . . :. ? ? : 图? 值,和温度交互作用对水解度和等势线响应面分析 . 从图可知,开始时随值。,温度:的增加而增加,当 和温度变化到一定程度时,达到最大,所以和温度取适中时获得最 大值。等势线图还表明:,和:的作用为互补作用,即适当降低温度和提高 值或者适当提高温度和降低值都能获得相同的肽得率赵玉红,。 ...花生蛋白酶水解工艺参数的优化及验证 采用的程序分析得到最佳工艺参数为:。.,。., ,.,即,值为.,温度为,底物浓度为%,加酶量为/。 在以上条件下,同时控制操作压力为.,此时理论达到.%。 在最佳工艺条件下,进行了次验证试验,得到花生蛋白水解度的平均 值为.%,而理论值为.%,二者的相对误差为.%%,说明回归模型 拟和性较好。 ..连续酶解和间歇酶解的比较 间歇性酶解条件:酶解花生蛋白,值.,水解温度。,底物 浓度%,酶用量/,水解时间张宇吴和王强,。为了更加华中农业大学届硕士学 位论文 公平的比较两者,对间歇性酶解条件做适当的修改,酶用量调整为/,水 解时间.。因为水解度是随着这两个因素增大的。在此条件下,进行了 次试验,得到水解度的平均值为.%。 可以得出,连续酶解的水解度值比间歇酶解的值提高了.%,对于 水解度的增加有一定效果。同时还发现连续酶解过程中只加了一次酶,却可 以 连续酶解更多的底物。在连续酶解的最佳条件下,原来的底物体积为,后来 又总共添加了.的底物,酶的使用效率大为提高。只要设备条件允许,可以 不停运行,则酶可以多次重复利用。而间歇酶解只是一次加入底物,到达预定 的条件后,就要灭酶,酶不能重复利用。 .结论与讨论 .本试验选用碱性蛋白酶为水解酶,采用酶膜反应器连续酶解花生 蛋白。通过单因素实验得出操作压力应控制在.。再利用.的 中