引物设计，mir 颈环序列
以hsa-miR-145为例设计引物，其成熟体序列为:GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCU
反向引物:每个反向引物的都带有一段固定的序列，可以形成一个茎环，
固定的序列为:5，-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG-3，
在这个序列后加上八个碱基，这八个碱基是hsa-miR-145从后面数八个碱基的反向互补序列，就是GAAUCCCU的反向互补:AGGGATTC，最后得到的反向引物的序列为
5，-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG AGGGATTC -3，
正向引物:每个正向引物也带有一段固定的序列，固定的序列为:ACACTCCAGCTGGG
来源:() - 学习microRNA的引物设计_wangchen922_新浪博客
在这个序列后加上于成熟体除后面六个外剩下的碱基序列，成熟体除掉后面六个碱基后序列为:GUCCAGUUUUCCCAGGA，把U变成T即可，最后的序列为:
5，-ACACTCCAGCTGGGGTCCAGTTTTCCCAGGA -3，
URP:统一反向引物，也是一段固定的序列，TGGTGTCGTGGAGTCG
U6引物F-CTCGCTTCGGCAGCACA ，R-AACGCTTCACGAATTTGCGT
使用方法:
1逆转的引物:所有要做的miRNA反向引物的混合，每个10微升
2PCR的引物:50微升的体系，30微升的水，10微升的正向引物，10微升的URP
12:CTGCCGGA AGCTTGATCGCCTC 13:CATGTCCG CGGGCCATTGAACG 14:CGGACATG GTTTGATCGGCGCATC 15:CATTGCCA ATGTACTGGACCATG 16:CACGCTCG ACTGGGCCGGTGGTGCG 17-5P:ATTCCGGG ACCCTGAGTGTCC 17-3P:TCTGAACC ACGGGTACACGTGGTGG 18:CACATATG TGTGACCAGTCGACA
19:TATCTGAG AGACGACACAGCCT 20:AACACGTG ATCCGCTGTGGCCA 21:TGGCATCC
22:CTTTGCCG CGCCGTGTGAGATCGTCG 23:ACGTCAGT GTTGTAGATGAGCGTAC 24:GGACTGTC TTGGCATCCATGTAGA
U6-S CGCTTCGGCAGCACATATAC
U6-R TTCACGAATTTGCGTGTCAT
以hsa-miR-145为例设计引物，其成熟体序列为:GUCCAGUUUUCCCAGGAAUCCCU 反向引物:每个反向引物的都带有一段固定的序列，可以形成一个茎环， 固定的序列为:5，-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG-3， 在这个序列后加上八个碱基，这八个碱基是h情深深雨蒙蒙48全集sa-miR-145从后面数八个碱基的反向互补序列，就是GAAUCCCU的反向互补:AGGGATTC，最后得到的反向引物的序列为 5，-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG AGGGATTC -3， 正向引物:每个正向引物也带有一段固定的序列，固定的序列为:ACACTCCAGCTGGG 在这个序列后加上于成熟体除后面六个外剩下的碱基序列，成熟体除掉后面六个碱基后序列为:GUCCAGUUUUCCCAGGA，把U变成T即可，最后的序列为: 5，-ACACTCCAGCTGGGGTCCAGTTTTCCCAGGA -3， URP:统一反向引物，也是一段固定的序列，TGGTGTCGTGGAGTCG U6引物F-CTCGCTTCGGCAGCACA ，R-AACGCTTCACGAATTTGCGT 使用方法: 1逆转的引物:所有要做的miRNA反向引物的混合，每个10微升 2PCR的引物:50微升的体系，30微升的水，10微升的正向引物，10微升的URP;
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