DNA抽提-口腔上皮细胞口腔细胞总DNA抽提Protocol
操作细则:
1.a, 擦棒刮口腔内腮侧1min,擦头放入1.5ml Epp管
b, 量取20ml漱口水,剧烈漱口约1min,吐入适当容器,转移入大离心管12000rpm 1min
2.600ul Extraction Buffer, 56度30min
3.8000rpm4min,上清液转移至新1.5Epp管
4.1ml Lysis Buffer, 加80ul吸附剂,混匀,静置45min–1h,每10-15min摇匀一次
5.12000 rpm2min,弃上清
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口腔细胞总DNA抽提Protocol
操作细则:
1.a, 擦棒刮口腔内腮侧1min,擦头放入1.5ml Epp管
b, 量取20ml漱口水,剧烈漱口约1min,吐入适当容器,转移入大离心管12000rpm 1min
2.600ul Extraction Buffer, 56度30min
3.8000rpm4min,上清液转移至新1.5Epp管
4.1ml Lysis Buffer, 加80ul吸附剂,混匀,静置45min–1h,每10-15min摇匀一次
5.12000 rpm2min,弃上清
6.600ul Washing Buffer重悬
7.12000rpm2min,弃上清
8.500ul70% 乙醇重悬两次12000rpm2min
9.500ul丙酮重悬12000rpm2min
10.室温烘干2-5min
11.加50ul Elution Buffer65度溶解15min
12.离心,取上清
Extraction Buffer: 10mM Tris-HCl,0.5M EDTA,10mg/mlDTT,(0.5mg/ml proteinase K), 0.2%SDS(pH7.0~7.5)
Lysis Buffer: 8M GuSCN, 20mM EDTA, 10mM Tris-HCl (pH 6.5), 40g/l Triton X-100
Washing Buffer: 6M GuSCN, 10 mM Tris-HCl (pH 6.5)
70%乙醇Ethanol
丙酮
Elution Buffer: TE(参考分子克隆)
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