猪肝细胞黄嘌呤氧化还原酶代谢喹赛多的结构和功能-毕业论文

猪肝细胞黄嘌呤氧化还原酶代谢喹赛多的结构和功能-毕业论文 毕业论文,设计, 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 目 学 院 学 院 专 业 学生姓名 学 号 年级 级 指导教师 毕业教务处制 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 毕业 猪肝细胞黄嘌呤氧化还原酶代谢喹赛多的结构和功能 研究-毕业论文 一、毕业论文说明 本团队专注于毕业论文写作与辅导服务，擅长案例 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 、编程仿真、图表绘制、理论分析等，论文写作300起，具体价格信息联系 二、毕业论文范文参考如下 毕业论文摘要:喹赛多是喹噁啉类抗菌促生长类饲料添加剂。早先上市的喹嗯啉类药物如卡巴氧和喹乙醇在上世纪中后期曾广泛应用于养殖业的各个环节,但随后的毒理试验证明它们都具有明显的三致作用,严重威胁动物和人类健康。目前的毒理研究已经表明喹赛多的无光敏、致畸、生殖和蓄积毒性,在猪和鸡的安全性非常高,可成为新的喹噁啉类替代药。目前关于喹赛多代谢酶的研究还很少见,而药物的毒理、药理作用都与其原型药物在机体内的代谢及残留息息相关,因此加强对喹赛多体内代谢过程中相关酶的研究就显得刻不容缓了。喹赛多代谢关键酶的研究不仅有助于喹赛多作为一类新兽药的申报,更能指导喹赛多在食品动物中的合理使用,帮助制定合理的休药期,从而避免了有害残留的出现,为人类的食品健康保驾护航。黄嘌呤氧化还原酶(XOR)是含钼类酶家族的一员,在动物体内各组织中分布广泛,主要是参与哺乳动物体内次黄嘌呤代谢成黄嘌呤和黄嘌呤氧化代谢为尿酸的生理过程。XOR主要分布在组织细胞胞浆中,在肝细胞浆中展示了重要的氧化还原活性,是除P450酶之外最重要的药物代谢酶之一。XOR具有很强的还原代谢能力,主要参与了硝基、氮氧化物和硫氧化物等基团的还原。由于喹赛多1位和4位的氮氧化物的还原产物都是喹赛多在动物体内代谢的主要代谢产物,已有的研究证明了喹赛多跟猪胞浆蛋白孵育后会发现代谢,推测XOR极有可能在喹赛多的脱氧还原代谢中扮演重要角色。本研究首先用XOR特异性抑制剂确定XOR是喹赛多的代谢酶,然后克隆猪肝细胞XOR基因,并选择合适的体外表达系统对猪 XOR进行重组表达,研究重组XOR的酶学性质。为了研究XOR催化喹赛多代谢的机理,利用同源建模和分子对接技术确定XOR代谢喹赛多的关键氨基酸残基,利用定点突变技术,异源表达并鉴定突变体的代谢活性,展示关键氨基酸残基对其代谢能力的影响,并分析XOR结构与功能的关系。1.猪XOR代谢喹赛多的验证差速离心法制猪肝细胞胞浆蛋白,与喹赛多进行体外孵育,并用XOR特异性抑制剂作用,HPLC检测代谢产物。体外代谢试验可以明显的看到猪肝细胞胞浆蛋白代谢喹赛多,XOR特异性抑制剂作用后可以看到明显的抑制作用,说明猪肝脏胞浆蛋白中的XOR可以代谢喹赛多。2.猪XOR基因的克隆、表达和活性鉴定用Trizole法提取肝细胞总RNA,反转录酶反转录获得cDNA,再以cDNA为模板,参照其它哺乳动物同源性较高的序列设计引物,分两段扩增XOR基因,然后酶切连接获得完整CDs序列。用pFastBac HTb载体构建重组质粒,转座到杆粒中,然后转染到杆状病毒中,获得含有XOR编码序列的重组病毒。Sf9被杆状病毒感染后表达XOR蛋白。Western blot验证表达结果,蛋白胶灰度确定重组蛋白含量。测定XOR代谢动力学参数(最大初速度Vmax、米氏常数Km和体外清除率CLint)。表达载体pFastBac HTb-XOR酶切结果证明目的基因克隆成功,XOR编码序列测序后上传到NCBI核苷酸库中,序列号是JN896312.1。重组蛋白体外代谢结果表明,重组蛋白是以活性形式存在于Sf9细胞中。重组XOR代谢喹赛多的Km值是代谢黄嘌呤的2.7倍,而Vmax只有后者的1,5,对黄嘌呤的Clint值是喹赛多的近15倍。说明相对于喹赛多,猪XOR对黄嘌呤的结合能力更强,催化效率更高,代谢能力更强。3.猪XOR代谢喹赛多的关键氨基酸的确定利用分子生物学网站,分析蛋白质二级结构,并根据牛XOR晶体结构为模板进行同源建模。将喹赛多作为配体,XOR作为受体进行分子对接,得到喹赛多代谢关键氨基酸残基。二级结构预测结果显示,猪XOR跟牛XOR的二级结构十分接近。结构域预测结果说明,该酶的功能区域保守性非常高,分别由含铁硫中心的结构域(20kDa)、含FAD的结构域(40kDa)和含钼辅助因子的结构域(85kDa)三部分组成。同源建模结果可信程度很高,对模型评价DOPE Score是-157326.5625,Verify Score为616.831。Ramachandran Plot图结果显示,91.5%氨基酸都分布在蓝色最适区域,5.7%氨基酸位于紫色可信区域,2.8%氨基酸位于可疑区域。将喹赛多与XOR模型对接后找到与喹赛多发生相互作用力的G47、N352、$360、R427、D430、D431、S1227和K1230八个氨基酸残基。这八个氨基酸距离喹赛多都不超过4A, 其中R427、D431、S1227和K1230与喹赛多形成了氢键结合,其余四个氨基酸形成了其它非共价键结合。分子对接模拟结果显示,这些氨基酸残基都与喹赛多催化过程息息相关,能显著改变XOR对喹赛多的代谢能力。4.点突变对XOR代谢喹赛多的影响构建突变体表达载体,重组表达XOR突变体,并与喹赛多孵育评估突变对酶代谢喹赛多能力的影响。动力学分析结果显示,XOR突变体代谢黄嘌呤时,D430H和D431A能增加CLint值,S360P、S1227A和K1230A能降低CLint值,说明这些氨基酸残基与黄嘌呤代谢能力关系密切。同时,这些位点的突变也改变了酶对底物亲和性和Vmax值,D431A能显著增加Vmax,S360P、S1227A和K1230A对黄嘌呤亲和性明显降低,说明这些位点与底物结合位点关系密切。XOR突变体代谢喹赛多结果显示,XOR代谢喹赛多的能力不及代谢黄嘌呤1/10,R427E和D431A能增强CLint值,即能增强喹赛多代谢能力,S360P、D430H、S1227A和K1230A代谢喹赛多能力下降。R427E底物亲和性明显增强,S360P、S1227A和K1230A的Km值明显增大,说明底物亲和性减弱明显,这些都说明这些氨基酸残基与喹赛多代谢作用相关。综上所述,本研究在体外重组表达了喹赛多在猪体内的代谢关键酶-黄嘌呤氧化还原酶(XOR),并对该酶进行了同源建模和分子对接模拟研究,确定了8个与喹赛多代谢相关的氨基酸。通过对这些氨基酸进行定点突变研究,一定程度上揭示了XOR代谢喹赛多的结构与功能关系及分子催化机制,为喹赛多在猪体内的代谢提供了理论依据。此外,本研究建立的重组酶体外代谢体系为新药研发提供了一个稳定的代谢系统,也为其它的新药研发提供了一种科学策略。 毕业论文思路: 目录 摘要 Abstract 缩略语表 1 前言 1.1 立题依据 1.2 国内外研究现状与发展趋势 1.2.1 喹赛多国内外研究进展 1.2.2 猪黄嘌呤氧化还原酶的研究现状 1.2.3 猪黄嘌呤氧化还原酶功能和作用 1.3 科学假设 1.4 研究的意义 2 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 与 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 2.1 材料 2.1.1 药品和试剂 2.1.2 仪器和设备 2.1.3 溶液配制 2.2 猪肝胞浆与喹赛多孵育 2.2.1 猪肝胞浆蛋白制备 2.2.2 胞浆代谢体系的建立 2.2.3 HPLC方法学 2.3 XOR基因克隆 2.3.1 猪肝脏总RNA提取 2.3.2 电子克隆 2.3.3 XOR克隆载体构建 2.4 猪XOR表达 2.4.1 表达载体构建 2.4.2 XOR基因的转座 2.4.3 XOR基因转染 2.4.4 重组蛋白SDS-PAGE及Western blot分析 2.5 重组XOR与底物孵育 2.5.1 黄嘌呤、喹赛多HPLC方法学 2.5.2 重组XOR蛋白体外代谢试验 2.6 猪XOR突变位点确定 2.6.1 猪XOR一级结构分析 2.6.2 猪XOR二级结构分析 2.6.3 猪XOR同源建模 2.6.4 猪XOR模型对接喹赛多 2.7 突变体构建及表达 2.7.1 突变体构建 2.7.2 突变体蛋白的获得及鉴定 2.8 突变体与底物孵育 2.9 数据处理 3 结果 3.1 猪肝胞浆蛋白代谢喹赛多 3.2 猪XOR基因克隆及活性鉴定 3.2.1 RNA及cDNA质量检测 3.2.2 克隆质粒构建 3.2.3 表达载体构建及鉴定 3.2.4 重组XOR蛋白鉴定 3.2.5 重组XOR活性测定 3.3 突变体的确定 3.3.1 猪肝XOR一级结构特点 3.3.2 二级结构特点分析 3.3.3 猪XOR模型 3.3.4 喹赛多对接猪XOR模型 3.4 突变体功能分析 3.4.1 突变体构建及表达鉴定 3.4.2 突变体的代谢活性研究 4 讨论 4.1 猪黄嘌呤氧化还原酶基因克隆及表达 4.2 XOR生物信息学分析 4.3 XOR结构功能特点 5 结论 6 黄嘌呤氧化还原酶在药物代谢中的结构与功能研究(文献综述) 6.1 前言 6.2 黄嘌呤氧化还原酶结构 6.2.1 哺乳动物黄嘌呤氧化还原酶基因结构 6.2.2 哺乳动物黄嘌呤氧化还原酶高级结构 6.3 黄嘌呤氧化还原酶基本功能 6.3.1 生理性底物代谢 6.3.2 小分子药物代谢 参考文献 作者简介 附录 毕业论文参考文献: 1武海涛;吕宪国;杨青;姜明;;土壤动物主要生态特征与生态功能研究进展[J];土壤学报;2006年02期2申玮;周新超;;城镇水体景观休闲娱乐的功能研究[J];中国农村水利水电;2008年04期3陈孝煊,吴志新,袁军法;喹赛多对鲢、鳙、草鱼胚胎发育的影响[J];水利渔业;2003年02期4范盛先,袁宗辉,王大菊,孔科,陈品,马敬忠;喹赛多体外抑菌试验[J];华中农业大学学报;2000年01期5黄玲利, 喹赛多对鸡大肠杆菌病的预防效果研究[J];华中袁宗辉,范盛先,王玉莲,王国永; 农业大学学报;2002年01期6王玉莲,袁宗辉,朱惠玲,邱银生,范盛先;喹赛多对断奶仔猪的生长性能和胴体品质的影响[J];华中农业大学学报;2005年01期7;兽药创新产品——喹赛多[J];农村实用技术与信息;2005年05期8陈超然,范盛先,袁宗辉,陈昌福;喹赛多对鱼类常见致病菌的试管内抑菌作用[J];华中农业大学学报;2001年05期9黄玲利,袁宗辉,范盛先,刘登才,陈品,王大菊;喹赛多对家禽常见病原菌的体外抗菌活性研究[J];华南农业大学学报(自然科学版);2003年02期10陈孝煊,袁宗辉,范盛先,袁军法;喹赛多对鲤、银鲫生长的影响[J];水利渔业;2004年03期 中国重要会议论文全文数据库 1高翔;孔令伟;涂艳阳;金志刚;李葆明;金玫蕾;景乃禾;;脑功能新基因的筛选、 鉴定及功能研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年2朱忠芳;;省会旅游中心城市功能研究——以福州市为例[A];中国地理学会2007年学术年会论文摘要集[C];2007年3李桂英;邢苗;胡波;;多头绒泡菌类PSTAIRE CDK蛋白的细胞内定位和功能研究[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年4张勇;李水生;刘云;刘晓春;林浩然;;鱼类Kisspeptin和GnIH基因起源、进化与功能研究[A];“基因、进化与生理功能多样性”海内外学术研讨会暨中国生理学会第七届比较生理学学术会议论文摘要[C];2009年5蒲若蕾;黄威权;姬秋和;;胰腺促性腺激素释放激素(CnRH)受体的定位及功能研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年6刘光清;赵伟;;?型鸭病毒性肝炎病毒内部核糖体进入位点(IRES)元件结构与功能研究[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年7高洪深;杨宏志;;工业企业投入产出分析的功能研究[A];企业发展与系统工程——中国系统工程学会第七届年会论文集[C];1992年8刘书逊;安华章;于益艺;李楠;陈涛涌;林乃松;王闻雅;曹雪涛;;3种新型泛素样分子的克隆、真核表达、结构分析和功能研究[A];中国免 ];2002年9杨德业;周希;黄晓燕;疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C 陈长曦;陈必成;龚永生;;Pax-8基因真核表达载体的构建及其功能研究[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年10王静敏;Ajit Sigh Dhauchak; 蔚洪恩;吴晔;熊晖;David Colman;吴希如;姜玉武;;巨脑性白质脑病伴皮层下囊肿MLC1基因突变分析与突变功能研究[A];第八次全国医学遗传学学术会议(中华医学会2009年医学遗传学年会)论文摘要汇编[C];2009年 1聂松义;我国脾脏功能研究达世界先进水平[N];中国医药报;2001年2刘向;基因研究:从测序转入功能研究[N];中国医药报;2004年3赵绍华;给孩子减肥必须“饿一饿”[N];健康时报;2007年4胡德荣;阿片受体功能研究有了新发现[N];保健时报;2003年5白毅;我国计算生物学研究取得重要进展[N];中国医药报;2007年6中国社会科学院研究生院二??五届硕士毕业生 谢礼晔;微痕分析在磨制石器功能研究中的初步尝试[N];中国文物报;2005年7包海山;鄂尔多斯文化是开拓创新的文化[N];鄂尔多斯日报;2007年8记者 马德明;《衡水湖湿地生态保护与环境功能研究》通过专家评审[N];河北经济日报;2006年9记者 彭华;四个功能组 团构成雅安城市中心[N];雅安日报;2006年10;肾癌差异表达基因鉴定及功能研 究[N];中国医药报;2002年 中国博士学位论文全文数据库 1孙照刚;传染性喉气管炎病毒糖蛋白G基因的克隆、表达、蛋白功能研究以及缺 失该基因病毒的重组[D];中国农业大学;2005年2唐茹琦;精神分裂症相关基因的 连锁不平衡分析和功能研究[D];上海交通大学;2008年3闾军;HPO-205与EDAG 基因的克隆与功能研究[D];浙江大学;2002年4李明玉;硬骨鱼类IGF信号通路两 个重要基因的结构和功能研究[D];中国海洋大学;2010年5王春杨;人前列腺癌相 关基因UROC28功能的初步研究[D];第四军医大学;2004年6栾治东;人hGBP3和 ALEX3基因的克隆及功能研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究 院);2003年7陈金中;人类RBBP10和bima3的克隆和功能研究[D];复旦大学;2004 年8种靖慧;P2X家族受体在白血病中的异常表达及异常功能研究[D];中国协和医 科大学;2010年9崔晓艳;马铃薯Y病毒属编码的膜相关蛋白的功能研究[D];西北 农林科技大学;2010年10吕娟;APE1/Ref-1基因启动子区多态与肺癌和胶质瘤的 遗传易感性分析及功能研究[D];复旦大学;2010年 中国硕士学位论文全文数据库 1陈持纲;猪肝细胞黄嘌呤氧化还原酶代谢喹赛多的结构和功能研究[D];华中农 业大学;2012年2肖彦山;经济法基本原则及其功能研究[D];郑州大学;2001年3 黄勇;Ecoli YggG功能与其相互作用因子研究[D];第四军医大学;2004年4宋清华; 我国高等学校校训类型及其功能研究[D];苏州大学;2006年5苏改联;中文时尚杂 志中语码转换的结构与功能研究[D];重庆大学;2006年6张小刚;H19/IGF2印迹模 型中miR-483和miR-675功能研究[D];山东师范大学;2011年7周华;肺炎链球菌 DHBPs的结构和功能研究[D];重庆医科大学;2011年8王亚丽;汉字部首表意功能 研究[D];兰州大学;2006年9李封;宁波方言语气词研究[D];浙江师范大学;2009 年10杨翠;小麦(Triticum aestivum L.)钙/钙调素依赖性蛋白激酶TaCCaMK 的功能研究[D];西北农林科技大学;2010年