紫外-可见分光光度法测定紫花高乌头中乌头碱的含量

紫外-可见分光光度法测定紫花高乌头中乌头碱的含量 紫外-可见分光光度法测定紫花高乌头中乌 头碱的含量 136内蒙古医学杂志InnerMongo~aMedJ2010年第42卷第z期 紫外一可见分光光度法测定 紫花高乌头中乌头碱的含量 任文栓,马佳.,常福厚 (1.内蒙古自治区医院医务科,内蒙古呼和浩特010017; 2.内蒙古医学院药学院,内蒙古呼和浩特010059) [摘要]目的:测定紫花高乌头中乌头碱的含量,为蒙药紫花高乌头中乌头碱的含量的测定提供方法,制 定质控标准.方法:采用紫外一可见分光光度法,在520nm的波长处测定吸光度,从标准曲线上读出供试 品溶液中酯型生物碱的重量.结果:乌头碱浓度在15.1,75.5t*g/ml范围内呈良好的线性关系.回归方程 为Y=0.0086X+0.13,r:0.9993,本品每克含酯型生物碱不得超过5mg.结论:采用紫外一可见分光光度 法测定紫花高乌头中乌头碱的含量,具有操作简便,结果准确的特点. [关键词】紫花高乌头;乌头碱;紫外一可见分光光度法;含量测定 【中图分类号】R734.2[文献标识码]A[ 论文 政研论文下载论文大学下载论文大学下载关于长拳的论文浙大论文封面下载 编号]10040951(2010)02—6136.04 Ultraviolet——visibleSpectrophotometryDetermineContentof . Aconitinei1"1AconitumExcelsumRrichb RENWen—shuan,MAJaz,CHANGFu—hou (1.DepartmentofMedicine,InnerMongoliaHospital,Huhhot010017China; 2.DepartmentofPharmacology,InnerMongoliaMedicalCollege,Huhhot010059China) [Abstract]Objective:TodeterminethecontentofaconitineinAconitumexcelsumRrichb.M ethods:Ultra— violet—visiblespectrophotometrywastousedtomeasureabsorbanceinthewavelengthof520nmand toeom— putetheweightoftheester—typealkaloids.Results:Concentrationofaconitinewithin15.1,75.5g/mlap— pearsthefavorablelinearrelationship.TheregressionequationwasY=0.0086X+0.13r=0.9 993.this productcontainsester—typealkaloidspergrammaynotbeover5mg.Conclusion:Theultraviolet—visible spectrophotometrywasthesimpleandaccuratemethodtodeterminethecontentofaconitinei nAconitumexce1 sumRrichb. [Keywords]Aconitumexcelsumrrichb;Aconitine;Ultraviolet—visiblespectrophotometry;Determination ofcontent 紫花高乌头为毛茛科植物紫花高乌头Aconi— turnexeelsumRrichb.的全草.蒙药名为宝日,泵 嘎,收载于(中华医学百科全书》(蒙医分卷),《认药 白晶鉴>,<无误蒙药鉴>中.具有止咳,清肺之功效, 主治流感,肺感,肺热,瘟疫等作用l1].其中乌头碱 既是其有效成分,也是其毒性成分,中国药典]采 用紫外一可见分光光度法(《中国药典》2005年版 一 部附录VA)检查乌头碱的含量,以控制蒙药材 紫花高乌头的质量. 1实验 材料 关于××同志的政审材料调查表环保先进个人材料国家普通话测试材料农民专业合作社注销四查四问剖析材料 及仪器设备 1.1仪器 UV一1601紫外分光光度计(SHMADZUCOR. PO.RATION). 1.2实验材料 紫花高乌头采自内蒙古赤峰市克什克腾旗大局 [基金项目]内蒙古医学院蒙药现代化研究重大项目资助(MX2005ZB010) 内蒙古医学杂志InnerMongoliaMedJ2010年第42卷第2期137 子林场,赤峰市克什克腾旗红山子乡,赤峰市宁城 县,经内蒙古医学院药学院生药学教研室庞秀生教 授鉴定为毛茛科植物紫花高乌头Aconitumexcel—sumRrichb的全草.方法学考察中均采用赤峰市克 什克腾旗大局子林场所采集到的样品.乌头碱对照 品(中国药品生物制品检定所提供,批号:110720— 200308);乙醚,氨试液,三氯甲烷,0.05mol/L硫酸 溶液,无水乙醇,碱性盐酸羟胺试液,高氯酸铁试液, 高氯酸试液. 2实验方法 2.1试剂及溶液的配置 试剂的制备.?碱性盐酸羟胺试液:取氢氧化 钠12.5g,加无水甲醇使溶解成100ml.取盐酸羟 胺12.5g,加无水甲醇100ml加热回流使溶解.临 用时将两液等量混合,滤过即得.?高氯酸铁试液: 取70%高氯酸1Oml,缓缓分次加入铁粉0.8g,微 热使之溶解,放冷.加无水乙醇稀释至100ml即 得.用时临时取上液2oml,加70%高氯酸6ml,用 无水乙醇稀释至500ml. 对照品溶液的配制.精密称取乌头碱对照品 7.5mg,置1Om1容量瓶中,用无水乙醇溶解并稀释 至刻度,摇匀,即得(每1ml中含乌头碱0.752mg). 供试品溶液的制备.取本品粗粉1g,精密称 定,置具塞锥形瓶中,加乙醚25ml与氨试液2m1, 密塞,摇匀,放置过夜,滤过,药渣加乙醚25ml,连 续振摇1h,滤过,药渣再用乙醚洗涤3次,每次1O m1,滤过,洗液与滤液合并,低温蒸干.残渣加三氯 甲烷2ml,使溶解,转入分液漏斗中,用三氯甲烷3 m1分次洗涤容器,洗液并入分液漏斗中,用0.05 mol/L硫酸溶液萃取3次,每次5ml,酸液依次用同 一 三氯甲烷10m1振摇洗涤,合并酸液,加氨试液调 pH值至9,再用三氯甲烷萃取3次,每次1Oml,三 氯甲烷液依次用同一水20ml振摇洗涤,合并三氯 甲烷液,低温蒸干,残渣加无水乙醇适量使溶解,转 入5ml量瓶中,用无水乙醇分次洗涤容器,洗涤液 并入量瓶中,再加无水乙醇至刻度,摇匀.精密量取 上述溶液及无水乙醇空白溶液各2.5ml,分别置25 ml量瓶中,各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5mI, 摇匀,在6O?,65?水浴中保温10min,放冷,加高 氯酸铁试液13ml,摇匀,放置5min,精密加入高氯 酸试液8ml,用高氯酸铁试液稀释至刻度,摇匀,放 置15min.以相应试剂为空白.照紫外一可见分光 光度法(《中国药典》2005年版一部附录VA)在 520nm的波长处测定吸光度,从标准曲线上读出供 试品溶液中酯型生物碱的重量,计算,即得. 2.2测定方法的选择 采用分光光度法对酯型生物碱进行含量测定. 取紫花高乌头供试品溶液,在49,550nm波长范 围内测定吸光度,供试品溶液在波长520nm处有 最大吸收,故选择520nm波长为测定波长. 2.3标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.50,1,0,1.5,2.0,2.5 m1分别置25m1量瓶中,均加无水乙醇使成2.5 ml,各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5ml,摇匀,在 6O,65?水浴中保温10min,放冷,加高氯酸铁试 液13mI,摇匀,放置5min,精密加入高氯酸试液8 ml,用高氯酸铁试液稀释至刻度,摇匀.放置15 min,以相应试剂为空白,照紫外一可见分光光度法 (附录VA)在520nm的波长处测定吸光度.以吸光 度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线. 2.4提取次数的考察 为保证被测成分在三氯甲烷萃取过程中能全部 提净,实验研究中对三氯甲烷萃取程度作了考察,并 按正文测定方法进行检查,提取3次,酯型生物碱 含量已基本不变,故将提取此时定为3次. 2.5线性关系的考察 精密称取乌头碱对照品7.52mg,置1Oml容量 瓶中,用无水乙醇溶解并稀释至刻度.精密量取对 照品溶液0.50,1.0,1.5,2.0,2.5m1分别置25ml 量瓶中,均加无水乙醇使成2.5ml,各精密加入碱 性盐酸羟胺试液1.5ml,摇匀,在6o,65?水浴中 保温10min,放冷,加高氯酸铁试液13ml,摇匀,放 置5min,精密加入高氯酸试液8ml,用高氯酸铁试 液稀释至刻度,摇匀,放置15min,以相应试剂为空 白,照紫外一可见分光光度法(附录VA)在520nm 的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横 坐标,绘制标准曲线. 2.6稳定性试验 取同一份供试品溶液,按含量测定法操作,分别 于0,10,20,30,40,50,60min测定,酯型生物碱在1 h内较为稳定. 2.7重复性试验 赤峰市克什克腾旗大局子林场(7月25日),各 约1g,精密称定,分别按含量测定方法项下操作,测 定每份含量,样品中酯型生物碱含量重现性良好. 2.8精密度试验 取同一份供试品溶液,按含量测定法操作,一份 样品5次测得的含量,样品中酯型生物碱含量精密 度实验结果良好. 2.9加样回收试验 ), 取赤峰市克什克腾旗大局子林场(7月25日138内蒙古医学杂志InnerMongoliaMedJ2010年第42卷第2期 各约0.5g,精密称定,分别加入酯型生物碱标准品 溶液(0.2mg/m1)1.5ml,分别按含量测定方法项下 操作,测定每份含量. 3结果 实验结果表明浓度在15.1,75.5ml范围 内呈良好的线性关系.回归方程为Y=0.0086X+ 0.13,r:0.9993,标准曲线见表1. 样品中酯型生物碱含量加样回收结果见表2. 表1标准曲线数值表 表2样品中酯型生物碱含量加样回收实验结果 取本品按含量测定项下的方法处理并测定,三产地1O批样品的测定结果见表3. 表3样品中含量测定结果 内蒙古医学杂志InnerMongoliaMedJ2010年第42卷第2期l39 从表中数据可见,三产地1O批紫花高乌头中酯 ,考虑到各地 型生物碱的含量在4.571mg/g以下 药材质量的差异,暂定本品每克含酯型生物碱,不得 超过5mg. 4讨论 中药成分的提取多采用冷浸渗流法【3J,煎煮 法HJ,有机溶剂加热回流提取法J,但提取的效果 不尽相同.曾采用苯加氨试液浸泡,放置过夜的方 法,对紫花高乌头进行提取,但效果不甚理想.本实 验采用在碱性条件下用乙醚提取,提取液滤过后低 温挥干.本法与上述其它方法比较提取较完全,而 且操作简便.有作者曾对紫花高乌头根中的二萜生 物碱进行了提取与鉴定.7J.本研究同时建立了蒙 药材紫花高乌头的质量控制标准.实验结果显示, 采用紫外一可见分光光度法测定乌头碱的含量,结 果准确,重现性好,为蒙医药的临床应用提供了更为 有效的检测方法. [参考文献] [1]王晋,乔俊缠,任常胜,等.蒙药紫花高乌头微量元素的含量测 定[J].中国民族医药杂志,2001,7(3):34. [2]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典 [M].一部.北京:化学工业出版社,2005:189. [3]宁红梅,吴刚,赵树忠.蒙药地格达伊苏的微量元素 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 [J].中 国民族医药杂志,2004,(1):26—27. [4]张晓文,刁景丽,邬林祥.薄层扫描法测定蒙药沙日嘎一4汤中 盐酸小檗碱的含量[J].中国民族医药杂志.1999,5(2):42. [5]王焕云,高磊,杨树青.薄层扫描法测定蒙药查干汤中异土木香 内酯的含量[J].内蒙古医学院,2001,23(4):240—242. [6]张树祥,贾世山.蒙药紫花高乌头根中二萜生物碱的分离与鉴 定[J].中草药,1999,3o(9):641—643. [7]张树样,贾世山.蒙药紫花高乌头根中新二萜生物碱的分离和 鉴定[J].药学,1999,34(10):762—76. 【收稿日期]2009—11—16 [作者简介】任文栓(1963一),男,内蒙古土左默特旗人.主 管药师. 人乳腺癌Her一2癌基因蛋白分离纯化的研究 高艳伟,高维实,刘惠荣,郭慧军,曹天泽,旃晓辉.,马虎林.,汤明忠. (1.内蒙古自治区医院肿瘤外科,内蒙古呼和浩特010017; 2.内蒙古农业大学,内蒙古呼和浩特010018; 3.内蒙古医学院,内蒙古呼和浩特010059) [摘要]目的:研究乳腺癌细胞中癌基因蛋白Her一2的分离纯化方法.方法:采用裂解液裂解,超声破 碎,高速离心,ConASepharose亲和层析结合ADPagarose亲和层析方法,从热休克处理后的乳腺癌细胞株中 分离纯化出癌基因蛋白Her一2,通过SDS—PAGE电泳及免疫印迹法检测进行蛋白分子质量及性质鉴定. 结果:检测结果证明纯化后获得的蛋白复合物中包含相对分子质量为185KD的蛋白,且能与抗Her一2特 异单抗结合.结论:采用本方法可以获得相对纯度较高的Her一2蛋白. [关键词]乳腺癌细胞株;Her一2;分离纯化 [中图分类号]R734.2[文献标识码】A[论文编号]1004—0951(2010)02—0139—04 原癌基因Her一2/neu(C—erbB一2)是人类表皮生 长因子受体(EGFR)家族的第2个成员,编码相对分子 质量185KD的具有酪氨酸激酶的跨膜糖蛋白 (p185)J.该基因在胎盘,胚胎上皮组织及许多肿瘤细 胞中呈高表达,而在正常组织中为阴性或微量表达. 研究表明乳腺癌病人中20%,30%Her一2癌基因呈 高表达_2J.目前针对Her一2癌基因的乳腺癌靶向治 f基金项目]国家自然科学基金项目(No:30660206) 疗越来越受到人们重视.本次研究我们从乳腺癌 SKBR一3细胞株中分离纯化出Her一2癌基因蛋白,并 进行鉴定分析,为今后以Her,2癌基因为靶点的乳腺 癌靶向治疗研究奠定基础. 1材料 1.1乳腺癌细胞株