保健食品中总皂甙的测定方法
(引自《保健食品检验与评价技术规范》2003年版:二十三、保健食品中总皂甙的测定)
1试剂
1.1 Amberlite-XAD-2大孔树脂,Sigma化学公司、U.S.A.。
1.2 正丁醇分析纯。
1.3 乙醇分析纯。
1.4中性氧化铝层析用,100-200目。
1.5人参皂甙Re 购自中国药品生物制品检定所
1.6香草醛溶液称取5g香草醛,加冰乙酸溶解并定容至100mL
1.7高氯酸分析纯。
1.8冰乙酸分析纯。
1.9人参皂甙Re
标准
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溶液:精确称取人参皂甙Re标准品0.020g,用甲醇溶解并定容至10.0mL,即每毫升含人参皂甙Re
2.0 mg。
2仪器
2.1比色计
2.2层析柱
3.实验步骤
3.1试样处理
3.1.1固体试样:称取1.000 g左右的试样(根据试样含人参量定),置于100 mL容量瓶中,加少量水,超声30 min,再用水定容至100 mL,摇匀,放置,吸取上清液1.0 mL进行柱层析。
3.1.2液体试样:含乙醇的补酒类保健食品,吸取1.0 mL试样放水浴挥干,用水浴溶解残渣,用此液进行柱层析。
非乙醇类的液体试样:吸取1.0 mL试样(假如浓度高、或颜色深,需稀释一定体积后再取1.0mL)进行柱层析。
3.2柱层析:用10 mL注射器作层析管,内装3cm Amberlite-XAD-2大孔树脂,上加1 cm中性氧化铝。先用25 mL 70 %乙醇洗柱,弃去洗脱液,再用25 mL水洗柱,弃去洗脱液,精确加入1.0 mL已处理好的试样溶液(见3.1),25 mL水洗柱,弃去洗脱液,用25 mL70 %乙醇洗脱人参皂甙,收集洗脱液于蒸发皿中,置于60℃水浴挥干。以此作显示用。
3.3显色:在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2 mL 5%香草醛冰乙酸溶液,转动蒸发皿,使残渣都溶解,再加0.8 mL高氯酸,混匀后移入5 mL带塞刻度离心管中,60℃水浴上加热10 min,取出,冰浴冰却后,准确加入冰乙酸5.0mL,摇匀后,以1cm比色池于560 nm波长处与标准管一起进行比色测定。
3.4标准管:吸取人参皂甙Re标准溶液(2.0 mg/ mL)100μl放蒸发皿中,放在水浴挥干(低于60℃),或热风吹干(勿使过热),以下操作从“3.2柱层析…”起,与试样相同。测定吸光度值。
4.计算:
A1 V 100 1
X=――×C ×――×――×――
A2 m 1000 1000
式中:
X:试样中总皂甙量(人参皂甙Re计),g /100 g;
A1:被测液的吸光度值,
A2:标准液的吸光度值,
C:标准管人参皂甙Re的量,μg
V:试样稀释体积,mL
m:试样质量,g
计算结果保留二位有效数字。
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