花椒籽种皮黑色素的提取纯化及性能研究.pdf.doc

花椒籽种皮黑色素的提取纯化及性能研究.pdf.doc 溃压 料技 大学 , , , , , , , , , , , , 芸 香 科 ，花 椒 属 植 物，花 椒 籽是生 , 值为 , ，洗 脱 剂为 体积 分数 , ,的乙 醇 溶 液 ，体积 为 , , 合 物。 , , , ( ， , , , ( , , , , ( , , , , , , ， , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ，, , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 琣 , , , , , , , , , , , , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , , , , ，, , ，, , ，, ，, , 產 , , , ，, , ，, , ，, , ，, , ，, , ，, , , , , , 甌 , , , , , , , , , , , , , , , , , , 珻 , , , , , 瓹 , , , , , , , , ( , ,， , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , , , , , , ， , , , , 琺 , , , , , , , , 实验 方 法 ?????????????????????????????, , , , , 硒 含 量 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 曲 线的绘 制 ?????????????????????, , , 材料、 试剂 与 仪 器 ?????????????????????????( ( , , , 实验 结 果 与 分析 ??????????????????????????( , , , , ， 又 名 香 椒 子 、 野椒 、 青 川 椒 、 崖椒 ， 芸 香 科 袁, , 花 椒 籽油 脂肪 酸 组 成 及 含 量 , , ( , 表 , , 花 椒 耔 种 仁 中氨 基 酸 组 成 和 含 量 , , , 不 溶 于 有机溶 剂 ， 而 且 结 构 复杂 ， 性 能各 异 。 我 国很 早在中医理 论中提 出， 黑色素对 人 体的肾 功 能有很 大的好处 ， 因此有这 种 说法 ， 经常 食 用 黑色食 品 有益于 肾 的健康。 黑色 素对 于 动 物的生 长 以 及 发 育有着重 要 的作用 ， 能提 高 动 物的生 存和 竞争的能力， 是人体 重 要 的活性 物质， 与 人体的健康成 长 和 身 体故 障 等 有着密切 的联系， 国内外 这 方 面 做 了 大量 的研 究， 而 国内甚少 。 不 同 物质源 的黑色素各 有特 异 性 ， 对 人们 的健康有重 要 作用 。 目前 ， 人们 从 天 然茶子 和 樟 科 树在应 叶 用 内提开 拓取 和 黑色素，发 展 方 并面 将其作具 有很 大的前 景， 所以 天 然黑色素资源 开 发 是当前 研 究的一大热 点。 截 至目前 ，已 经研 究 过 的含 黑色素的植 物材料主 要 有: 黑米 、 黑芝麻、 藜豆 、 朱 雀花 籽皮 、 香 蕉皮 和 桂 花 种 碱 提 酸 沉 法 是提 取 植 物黑色素常 用 的方 法 ， 主 要 是基 于 其溶 于 碱 而 在酸 中沉 淀 的性 提 酸 沉 法 分别 提 取 藜豆 种 皮 中的黑色素和 禾雀花 黑色素， 其 中藜豆 种 皮 中的黑色素最 佳 提 取 工艺为 ，采 用 , , , , 疞 , , 溶 液 为 提 取 剂，在料液 比 , , , , 痬 , ，浸提 究山 杏 种 皮 中黑色素的提 取 ，在氮 气 保 护 下 ，, ? 采 用 , , , , 疞 , , ，在料液 比 , , , , 痬 , ， 温 度 , ? 条 件 , , 叫 雍 丝 侵 制 ず谏 , 氐寐 士 纱, ( , ,。 , , 疞 , , , 。 董 华 群 等 , ?, 采 用 超 声 辅 助 碱 , , 疞 , , 跫 , 拢, 痔 嵛锏 寐 饰, , ( , , ( , ,，黑色素 , , 疞 盐 酸 调 节 体积 分数 , ,乙 醇 的, , ， 于 , ? 提 取 , , , 跫 , 碌 寐 蚀 锏 , ( , ァ , 友 业 , , 縘 采 用 体积 分数 , , , , 疞 盐 酸 与 体积 分数 , ,乙 醇 的体积 比 为 , , ， 大提 取 工艺为 ，果 胶 酶和 纤 维 素酶合 用 ，前 者用 量 为 , , , , , 碧 崛 , , , 汗 , 好赣 胂 宋 , 孛 概浔 任该 黑色素的得率超 过 , , 猯 : , , 附 馐 奔 , 用 聚酰胺柱层 析分析板 栗 壳 黑色素， 得到 纯化 后 的黑色素。 , , 现, 俾 , , , , 黑色素的结 构 , 图 , , 花 色苷 类黑色素的结 构 , 为 荞 麦皮 黑色素的结 构 可 能是黄酮 类花 色苷 化 合 物。 宋 艳 阁 利 用 液 质联用 技 术 分析山 东 芍 药 花 色素( , , 咸烟 擒铡 ?赋 稻 栈 ㄉ, 兀 , ( 二丙 二酰葡 萄 糖苷 。 , , 黑色素的理 化 性 质 通 过 黑色素与 金属 的结 合 位 点以 及 亲 和 力的研 究表 明， 该 类色素主 要 存在苯 二酚 和 苯 醌 果 显示 ， , , 和 , , 与 山 杏 种 皮 黑色素螯合 后 均 能促进山 杏 种 皮 黑色素酸 性 位 点的去质 子 化 作用 ，其中, , 的促进作用 较强 ，结 合 更 牢 固 ，且 随 着, 值升高 ，山 杏 种 皮 黑色 素中解 离 出的螫合 位 点增 多 ， 螯合 , , 的能力也增 强 : 说明， , , 和 , , 主 要 与 山 杏 种 植 物黑色素具 有光 热 稳 定 性 和 安 全 无 毒 等 优良 性 质， 这 为 其用 作食 品 添 加剂 的深 层 研 究表 明， 黑豆 皮 黑色素耐氧 化 性 能差 ， , 对 其溶 液 颜色 有影 响， 加入食 盐 、 蔗 糖 黑色素是与 人体的生 长 发 育、 健康还有部 分病 变 有一定 的联 系， 是人体内部 重 要 的 活性 物质。 研 究显示 ， 黑色素有清 除 自 由基 的作用 和 保 健功 能， 部 分黑色素含 有对 人体 有益的微 量 元 素如, 、 , 、 , 等 ，兼 含 有营养 成 分。 黑色素不 但可 以 作为 生 物抗 氧 化 剂、光 保护 剂、螯合 剂、抗 辐 射剂阳 ，和 生物半 导 体材料唧 ，，而 且还可 以 最为 一类免 疫促 进剂, 一】 。 近期 研 究还发 现，黑色素具 有治 疗 帕 金森 症 , , 、抗 癌 , , 以 及 抗 蛇 毒, , 等 作用 。 剂和 抗 氧 化 资源 提 供 了 依据。 花 椒 籽是中国传 统 的“八 大调 味 品 ”之一， 在我 国分布 广 泛 ，品 种 繁多 ，国内外 对 花 椒 籽的研 究大多 都 集 中在其化 学 成 分等 方 面 ，忽视了 花 椒 籽种 皮 中黑色素的独 特 价 值。 已 有研 究资料证实， 黑色素副 作用 小、 安 全 性 高 ， 作为 日 用 添 加剂 和 食 品 添 加剂 ， 被广 泛 用 于 糖果 、 酒类、 饮 料等 食 品 的着色和 化 妆 品 领 域 ，有着广 阔 的应 用 前 景和 发 展 潜 力。 因此， 应 该 加强 对 花 椒 籽种 皮 黑色素的深 入研 究。 , , 材料、 试剂与 仪 器 , 生 产 厂 家 天 津 红 岩 天 津 市滨 海 迪科 化 学 试剂 厂 试剂 有限 公 司 天 津 红 岩 试剂 厂 天 津 市滨 海 迪科 化 学 试剂 有限 公 司 注: 表 中所示 , 代 表 分析纯。 , , 实验 方 法 , 不 同 溶 剂，于 , , 湃 朐 驳咨掌 恐校 , ? 加热 回 , 尤 , , , , 疞 的, , 溶 称取 一定 量 的花 椒 籽，加入料液 比 为 , , , , 痬 , 的浓 度 为 , , 液 ， 分 , ? 分别 提 取 , , 表 , , 花 椒 籽种 皮 黑色素提 取 的正 交 试验 因素和 水 平 , , , , , , , , , , , , , , , , , 实验 结 果 与 分析 袁, , 不 同 提 取 剂的吸光 度 值 , , , , , , , , , , 疞 , , 溶 液 作为 使 用 氯 仿、 乙 醚 、 乙 醇 、 蒸 提 取 剂，其 馏水 、 , ,氨 水 、 , , , , 溶 液 为 提 取 溶 剂。 , , 有最大吸收峰， 与 文献, , , , , , , , , , , , , 对 正 交 试验 结 果 表 , , 进行极差 分析， 影 响花 椒 籽种 皮 黑色素提 取 效果 的因素依次 提 取 时间 的影 响最 小。 本 研 究采 取 了 单因素实验 和 正 交 试验 的方 法 研 究花 椒 籽种 皮 黑色素的提 取 工艺， 研 , , 霉 ひ 障 拢, ” 纷 阎制 ず谏 , 氐牡寐 饰 , ( , ,。 影 响花 椒 籽种 皮 黑色素提 取 效果 的因素依次为 : 提 取 温 度 、 , , 浓 度 、 料液 比 ， 提 取 时 间 。 花 椒 籽粕 由陕 西 韩 城 金太 阳 花 椒 油 脂有限 责任公 司 提 供 。 , 注: 表 中所不 , 代 表 分析纯。 主 要 仪 器 设 备 见表 , , 。 , , 疞 的, , 心 过 滤 后 反 复用 , , 怀 槁 艘 挥 糜 谢, 芗 , 乙 酸 乙 , ， 取 , , 笤 诳 杉, 止夤 舛 燃 葡 路直 鹪 , , , ， 取 , , 尤 胝袅笏, ㄈ, 葜 , , 一定 波 长 下 测 吸光 度 。 , ， 取 , 式中: ; 卜标 准 偏 差 ; 办 一测 定 结 果 绝 对 偏 差 ; , ， 取 , , 和 , , , ，再 分别 加入多 酚 浓 度 为 , ( , 溶 液 , , , ， 定 , ，采 用 , , , 狢 , , , , 比 色法 容 至, 平 行测 定 多 酚 浓 , 、 , , , , ㄈ葜 , , , ，分别 取 , , , 、 , 在一定 波 长 下 测 吸光 度 。 以 蒸 馏水 作参 比 绘 制 标准 曲 线。 分溶 胀 ，将该 大孔 吸附 树 脂上 柱， 用 , 妒 髦 , 寤 , 囊 掖 荚 , 分别 准 确 称取 己预 处 理 的, 执 罂 孜, 绞 髦 , 鱒 的多 酚 提 取 液 ， 置入恒 温 水 浴 振 荡器 上 振荡, , — , , 白 一吸附 前溶 液 中多 酚 浓 度 , , 痬 , ; , ， 分别 加 入, 测 定 滤 液 中多 酚 浓 度 ， 然后 取 过 滤 后 的树 脂各 加入, , 花 椒 籽种 皮 黑色素 粗品 碱 溶 液 ，置恒 温 水 浴 振荡器 上 振荡， 每 隔 半 小时 采 用 , , , 狢 , , , , 比 色法 测 定 其多 酚 含 量 。 , , ( , 大孔 吸附 树 脂的树 脂的静 态 吸附 , , , 、, , , 的花 椒 籽种 皮 , ( , 黑色素粗 酚 浓 度 ，通 过 公 式, ( , 计 算 大孔 吸附 树 脂的吸附 率。 , 为 , ( , 幕 ” 纷 阎制 ず谏 , 卮 制 啡 芤海 , 煤 阄 滤 , ? 竦 雌 魃险 竦 , , , , , , , , , , , , 乃 俾 噬 涎, , 为 树 , ，采 用 , , , 瓹 , , , , 比 色 法 测 定 流 出液 , , 实验 结 果 与 分析 波 长 ，该 实验 结 果 与 文献, , , , 研 究 的实验 结 果 相 似。 的延长 而 增 加， , 良 好，而 且便于 操作。 表 , , , , , 瓹 , , , , 比 色法 精 密度 试验 结 果 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , , 表 , , , , , , , , , 比 色法 加样 回收率试验 结 果 , , , , , , , , , , , , , , , , , ( , 平 均 回收率 惕 测 量 值差 异比 较小， 说明 方 法 可 靠。 , , , , , , , , , 本 文选 用 没食 子 酸 为 标准 品 ，采 用 , , , 狢 , , , , 比 色 法 测 定 其多 酚 含 量 ，由图 , , 可 能是因为 粒 径 小的原因。 综合 考 虑 吸附 率和 洗 脱 率， 选 择 , , , 虯, , 树 脂做 进一 图 , , 结 果 表 明， , , , 罂 孜, 绞 髦 , 階, , 大孔 吸附 树 脂的吸附 均 随 时 间 的延 用 于 本 实验 纯化 。 , , , , ( , 非 极性 , , , , ( , , 冰 , 静 堇 鍪 图 , , , , 树 脂与 , , , 树 腊静 态 动 力学 吸附 曲 线 , , , , , , , , , , 喾优ǘ榷 訢, , 大孔 吸附 树 脂静 态 吸附 的影 响 根据吸附 的平 衡理 论， 浓 度 过 高 ， 发 生 多 层 吸附 ， 导 致 微 孔 堵 塞 ， 内孔 的利 用 率大 大降 低 ， 这 样 使 大孔 吸附 树 脂的吸附 率也会大大降 低 ， 浓 度 太 低 ， 吸附 达 不 到 饱和 ， 平 衡时 所用 的上 样 液 体积 增 加， 残 留在流 出液 中的吸附 物质多 酚 相 应 增 加， 最 终导 致树 脂 , 甮 , , 进行吸附 。 图 , , 煌 , 喾优ǘ认碌 腄 , , 树 脂吸附 率 , , , , , 所以 选 择 合 适 的, 进行吸附 能够达 到 好的吸附 效果 。 , , , , , 图 , , 煌 , 掖 寂 ǘ认碌 腄 , , 树 脂洗 脱 率 , , , , , , , 魉 俣訢, , 大孔 吸附 树 脂动 态 吸附 的影 响 , 、( ， 图 , , 煌 , 魉 傧 翫 , , 树 脂洗 脱 率 , , 赐 岩 禾寤 , 訢, , 大孔 吸附 树 脂动 态 洗 脱 的影 响 , , , 保 , 晕 , 奖ズ 偷 腄 , , 大孔 当以 , ,, , , , 嘉O赐 岩 海 , 魉 僖 惭? , 因此， 洗 脱 液 体积 , 的乙 醇 溶 液 应 选 择 , , 为 洗 脱 剂。 图 , , , 允 荆 , ” 纷 阎制 ず谏 , 卮 制 分卸喾雍 , 课 , , , , ィ , 璂, , 大孔 吸附 树 皮 黑色素的有效方 法 。 图 , , 花 椒 籽种 皮 黑色素粗品 与 纯化 的多 酚 含 量 , , , , , , , , , , , , , 青 海 盐 业 股份 有限 公 司 硫 酸 镁 上 海 之臻 化 工公 司 台 山 市众城 化 工氯 化 钾 厂 , , 甀万 从 化工公 司 广 州万 从 化 工公 司 壑些 台 山 市众城 化 注: 表 中所示塑 , 代 表 分析纯。 工厂 浙江 常 青 化 工 公 司 , , 实验 方 法 , ，分别 在室内自 然光 照 , ? 、 , ? 、 , ? 、 , , 嫦 录 尤 , 准 确 量 取 , , 水 中， 分别 加入纯化 , , 苡, , 后 花 椒 籽 种 皮 黑色素溶 , 混合 ，然后 分别 在, , 、 , 、 液 , , 、 , 、 , , 水 中， 分别 加入纯化 后 花 椒 , , 苡, , 籽种 皮 黑色素溶 液 , , 混合 ，然后 分别 在, , 、 , 、 , 、 , 、 , 定 其吸光 度 。 , 分别 加, 纯化 后 相 同 浓 度 的花 椒 籽种 入, 皮 黑色素溶 液 ， , , 苡, , , , , 瓹 , , , , 比 色法 ，测 定 其吸光 度 。 , , 实验 结 果 与 分析 图 , , 花 椒 籽种 皮 黑色素在自 然光 下 的吸光 度 图 , , 花 椒 籽种 皮 黑色素在不 同 温 度 下 的吸光 度 表 , , 显示 ，空 白 组 为 未 加入氧 化 剂的花 椒 籽种 皮 黑 色素的吸光 度 ，加入氧 化 剂 , , , 蚄 , , , 后 ，黑色素溶 液 吸光 度 值减 少 ，但随 放置时 间 延长 ，吸光 度 值基 本 不 变 。 且 观察溶 液 明显褪 色， 由结 果 推测 是由于 花 椒 籽黑色素结 构 中存在有酚 羟 基 ， 加入 氧 化 剂 时 ， 迅速 被氧 化 ， 形成 相 对 稳 定 的结 构 ， 故 使 吸光 , , , , , 度 值基 本 上 保 持 不 变 。 说明氧 化 剂对 花 椒 黑色素都 有漂 白 作用 ，这 与 其它 来 源 的黑色素性 质相 似。 了 变 化。 , , , , , , , , , , , 和 , , 离子 有增 色作用 ，而 , , 、, , 、, , 、, , 、, , 、, , 、 , , , , , 注: 表 中所示 , 代 表 分析纯。 , , 实验 方 法 , , ( , , , 标准 曲 线的绘 制 , , 袅笏, ㄈ, , , 、 , , , 和 , , , 、 , , , , 螅, , , , , ， 静 置 , , , 螅, , , , , 下 测 溶 液 的吸光 度 。 按 照 公 式, ( , 计 算 螯合 物的螯合 度 ? 。 , ( , , 、 , , , 二苯 碳 滤 干燥， 即可 得花 椒 籽种 皮 黑色素 铬 , , 螫合 物。 , 下 测 量 各 溶 液 的吸 光 度 ，绘 制 标准 和 , ,的, , 溶 液 调 至紫 红 色， 反应 ， 再 滴加, 翁 寤 , 萳 : , 腍 , 和 , , ( 二氨 基 , ， 置黑暗 处 放, , , , 儆 , ,, , 溶 液 调 至紫 色， 加 甲 苯 溶 液 , , , , 詈蟀 延谢, 喾湃 氡壬 , 笾校 , , , 硒 , , 螯合 物的螯合 度 。 , , 实验 结 果 与 分析 按 照 公 式计 算 ， 花 椒 籽种 皮 黑色素铬 , , 螫合 物的螯合 度 为 , ， , ,。 , , , 范 围内呈 现很 好的线性 关 系， 其线性 回 , , , , 甋 , , , , , , , , , 小结 , 注: 表 中所示 , 代 表 分析纯。 , , 实验 方 法 浓 度 为 , , ,的双 氧 水 , , 以 , 做 对 照 ， ?, 清 除 率， 按 照 公 式, — , 计 算 ， 并 计 算 半 数 抑 制 浓 度 , , 值。 , — , 爿 旷一无花 椒 、杼 种 皮黑色素 溶 液 和 双 氧水 的吸光 度 ; , — — 无花 椒 籽种 皮 黑色素溶 液 的 吸光 度 ; , , , , 牧 诒 饺 , 尤 芤海 , 旌 暇 , 龋 , , 和 , , 从 , 分钟， , , , 下 测 其吸光 度 记 为 , ，以 准 确 量 取 不 同 浓 度 的花 椒 籽种 皮 黑色素甲 醇 溶 液 , , 白 测 吸光 度 值记 为 , ， 以 , 做 对 照 ， 按 照 公 式, ( , 计 算 , , 的清 除 率， 并 计 算 半 数 抑 制 浓 度 , , 值。 , , 的清 , , , , 腍 , , 芤海 , 不 同 , 尤 , 除 浓 , , 实验 结 果 与 分析 从 图 , , 可 以 看 出， 花 椒 籽种 皮 黑色素与 , 对 ?, 均 有清 除 作用 ，清 除 能力大致 , , , 范 围内都 成 线性 关 系， 花 椒 籽 种 皮 黑色素清 除 图 , , 花 椒 籽种 皮 黑色素对 ?, 的清 除 率 , , , , , , , , 一, 图 , , 花 椒 籽种 皮 黑色索对 超 氧 负 离 子 自 由基 的清 除 率 图 , , 花 椒 籽种 皮 黑色素对 , , 的清 除 率 , , , , , , , 小结 洗 脱 剂为 体积 分数 为 , ,乙 醇 ，体积 选 择 , , , , , , 、 陕 西 省重 大科 技 创 新 项目, , , , , 二, , , , 的资助 。 , , , , , , , , , , , , , , , 珻 , , , , , , , , , , 甁 , , , , , , , , , , , ，, , , , , , , 珺 , , , , , , , , , , , : , — , 。 , , , , 董 华 群 ，汪 跃 华 ，董 华 强 ，等 ( 微 波 辅 助 提 取 藜豆 种 皮 黑色素, 】 ( 安 徽 农 业 科 学 ，, , ， , , , , , — , , , 梁 敏， 潘 英明， 唐 明明， 等 ( 桂 花 种 子 皮 黑色素提 取 及 影 响其稳 定 性 因素分析, 】 ( , , 垦 Ψ 妫 , 呓 。 , 帕 , , , , ㄖ, 崛 ?憬镀 ず谏 , 氐墓ひ 昭 芯 縖 , ( 江 苏 农 业 科 学 ， , , ( , , , , , , , , 鲁 京 兰 ，申风善， 太 俊 哲 ( 黑玉 米 中黑色素的提 取 , , , 颖叽 笱 , ? аПП, , , , , , : , , 柯 尘 ? 迹 , 蕹啥迹 , 喜, 酰, 蟠 凶押 谏 , 靥崛 」 ひ 昭 芯 縖 , ( 安 徽 农 业 科 学 ，, , ，, , , : , , ( , , ( 业 科 技 ，, , ，, , , : , , , , ( , , 王 鑫 玉 ，孙 守 荣 ，周 艳 华 ，等 ( 黑色素分析指 标的研 究进展 及 其应 用 , 】 ( 中国畜牧 , , , , , , , , , 陆懋 荪 ，尹 佩玉 ，容 蓉 ，等 ( 黑芝麻黑色素的化 学 结 构 研 究【, ( 食 品 科 学 ，, , ， , , , : , — , ( , , 琀 , , , 琋 , , , , , , , , , , : , , , , , , ，, , ，, , , : , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , 【, 】 朱 志仁 ， 王 凯 ， 潘 英明， 等 ( 桂 花 种 子 皮 黑色素的还原性 、 金属 鏊 合 性 及 其金属 含 量 的研 究, , , 称饭 ひ 悼 萍迹 , , , , , , : , , , , ( 北 农 林 科 技 大学 学 报 : 自 然科 学 版， , , ，, , , , , 甋 , , , , , , , , , , , , 緽 , , , , , , , , , ’, , , , 甃 , — , , , , 孟 洁 ，牟 春博， 张慧 ( 黑豆 皮 黑色素的提 取 及 理 化 性 质, 】 ( 热 带作物学 报 ，, , ， 【, , ” 鲇瘢 , 灾遥 , 羁 朴 眩 , 龋 , 叫 又 制 ず谏 , 乩砘 , 灾恃 芯 俊 , , , , , 綣 】 ( 食 品 与 发 酵工业 ， , , , , ( , , 瓻 , , , , , , , , , , , , , , , : , , , , ( , , , , , , , , , , , , , , , , , , , : , , , , ( 【, 】 , , , , , 珼 , , , 珽 , , , , , , 篣 , ，, , , , , , ，, , , , : , — , ( , ( , ( , ( , , 龙 盛 京 ，马文力， 农 冠 荣 ( 黑豆 色素及 多 糖对 全 血化 学 发 光 和 活性 氧 的抑 制 作用 洋 大学 ，, , (