【地方标准】db3701 t 102-2007 玉米种子产地检疫技术规程【国内外标准大全】

【地方标准】db3701 t 102-2007 玉米种子产地检疫技术规程【国内外标准大全】 ICS B31 DB3701 济 南 市 农 业 地 方 规 范 DB3701/T102-2007 玉米种子产地检疫技术规程 2007-08-29 发布 2007-08-29 实施 发布 济南市质量技术监督局 1 DB3701/T102-2007 前 言 本规范由济南伟丽种业有限公司提出。 本规范由济南市农业局负责起草。 本规范主要起草人:袁瑞农、王守宽、赵克思、张振成、张健、刘红娟。 I DB3701/T102-2007 玉米种子产地检疫操作规程 1 适用范围 本规程规定了玉米种子产地检疫操作规程。 本规程适用于繁育玉米 良种的科研、教学、生产单位繁育玉米种子。 2 规范性引用文件 下列标准的条文通过在本规范中的引用而成为本规范的条文。凡是注日期的文件， 其随后所有的修改单(不包括勘误表的内容)或修订版均不适用于本规范，然而，鼓励 根据本规范达成 协议 离婚协议模板下载合伙人协议 下载渠道分销协议免费下载敬业协议下载授课协议下载 的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用 文件，其最新标准适用于本规范。 GB4404.1-1996 粮食作物种子禾谷类 GB15569-1995 农业植物调运检疫操作规程。 3 术语和定义 3.1 产地检疫 指健康种子生产过程中的全部检疫工作,包括选地、选种和田间、室内检验及 签证。 3.2 检疫性有害生物 对受其威胁的地区具有潜在经济重要性、但尚未在该地区发生，或虽已 发生但分布不广并进行官方防治的有害生物。[粮农组织，1990 年;1995 年修改;国际植物保 护公约，1997 年] 4 检疫性有害生物: 4.1 玉米霜霉病菌(Peronosclerospora spp.) 4.2 玉米细菌性枯萎病菌 Pantoea stewartii subsp.stewartii Mergaert et al. 4.3 玉米干腐病菌 Diplodia zeae (Schw.)Lev. 4.4 玉米高氏细菌性萎焉病菌 Clavibactor michiganensis subsp.nebraskensis Davis et al. 5 选地及报检 5.1 选地 生产单位要有计划的建立相对稳定的玉米种子繁育基地。繁育基地应选择在无检疫性有害 1 DB3701/T102-2007 生物分布的地区，并具有一定隔离保护条件的，灌溉水源无检疫性有害生物污染的地块。新建玉米繁种基地的，应事先征求当地植物检疫机构的意见。 5.2 报检 建立种苗生产基地的单位和个人，在建立基地前应先向当地植物检疫机构登记、注册，并 申请检疫，填写《种子生产基地植物检疫申请表》(表 1)。有特殊原因，需临时设立种苗生产 基地的，应在播种前向当地植物检疫机构申请检疫。繁育基地经当地检疫部门实地考察合格后， 种子繁育单位应在播种栽植前向当地植物检疫部门申请产地检疫，填写玉米种子产 地检疫申请表(表 2)。 表 1 种子生产基地植物检疫申请表 植检(植保)站: 兹拟建立下列种 苗生产基地，特报请种子生产基地检疫。 基地地址 基地面积 生产作物 品种 计划年限 负责人 申请单位(人)(签章): 联系人: 联系电话: 年 月 日 表 2 种苗产地检疫申报表 申报单位: 联系人: 时间: 电话: 繁育地点 种植面积 作物名称 品种 种苗来源 预计产种量 (亩) 省、市、县 乡(镇)村 户主名称 6 检疫管理及要求 2 DB3701/T102-2007 6.1 制种地应选用健康种子，调入种子应附有植物检疫证书并报请当地植物检疫部门验证或复检。 6.2 选用抗病品种，播种前还必须对种子进行消毒处理(消毒处理方法详见附录 A)。 6.3 制种地的防病措施 6.3.1 制种田与其他普通玉米种植田之间要具有一定的隔离条件。 6.3.2 制种地不得使用病田秸秆饲喂牲口的粪肥和用病田秸秆沤制的肥料。严禁和邻近田块串 灌或大水漫灌。 6.4 种苗生产单位和个人在种苗生产过程中，若发现疫情，应及时报告当地植物检疫机构，并 在植物检疫部门的监督指导下及时作除害处理。 6.5 制种地收获的种子应凭有效期内的产地检疫合格证收贮，严防与有病种子混杂;所育种子 符合(国标)农作物质量标准 GB4401.1-1996。 7 田间检验 7.1 检验人员 由各级专职检疫员为主，玉米繁育单位技术人员协助进行。 7.2 检查时间 制种田分二次进行检查。第一次在生长盛期(8 月上中旬)，多为病害流行时期，症状明显， 易于识别;第二次在成熟前期。 7.3 检查方法 检验人员对制种地需逐块、逐行进行检查。对疑似发生检疫性有害生物的点片有针对性的 进行调查;对发现可疑性有害生物的地块采取随机取样调查的方法，每块地采取多点(5 点以 上)随机取样调查，每点取(15-20)株，计算发病率及发病程度。检查后将检查结果填入“玉米 种子田间检验记录表(表 3)”。 表 3 玉米种子产地检疫调查记载表 报检单位(人): 种植地点 作物品种名称 作物生育期 种植面积 预计产量 调查 调查 检疫性有害生物及其发生程度 其他病 调查 方法 面积 虫发生 调查日期 人 情况 名称 程度 名称 程度 名称 程度 名称 程度 第一次 第二次 7.4 调查中，如发现检疫性有害生物植株，立即拔除，集中销毁，并通知生产单位进行彻底除 3 DB3701/T102-2007 害处理，所收种子该作他用。 7.5 症状诊断 田间症状识别(详见附录 B)。见可疑症状，采集整株标本带回室内检验鉴定。 7.6 签证 经最后一次田间检查后，未发现检疫性有害生物的玉米种子，由当地植物检疫部门签 发《产 地检疫合格证》(见附录 D)。种子生产部门凭《产地检疫合格证》收购种子。 8 室内检验 8.1 抽样检验 制种地经田间检验合格，种子收获后，必须抽样进行室内检验(取样数量、方法符合 GB15569-1995 农业植物调运检疫操作规程，检验方法详见附录 C)，检验结果填入“玉米种子 室内检验报告单(表 4)”。 表 4 室内检验报告单 送检日期 检验日期 送检单位 标本编号 应检性有害生物 检验数量 检验方法 检验结果 检验人 备注 检验单位: 负责人: 8.2 签证调运 种子生产单位凭有效期内的《产地检疫合格证》及室内检验结果报告单换领调运检疫证书， 外调玉米种。 4 DB3701/T102-2007 附 录 A (规范性附录) 玉米种 子消毒处理方法 A.1 真菌性病害: 玉米霜霉病、玉米干腐病。 药剂浸种:防治玉米干腐病，可用 40%的福尔马林 1kg，加水 200kg，配成 200 倍的稀释液， 浸种 1 小时，然后水洗干净，阴干播种。 药剂拌种:在玉米霜霉病发生地区，用内吸性杀菌剂瑞多霉(Apron 35DS)进行拌种处理。 在玉米干腐病发生地区，带菌种子可用(0.2-0.3)%的赛力散或西力生消毒。 A.2 细菌性病害:玉米细菌性枯萎病、玉米高氏细菌性萎焉病菌。 温水浸种:将玉米种子在 60?的热水中浸 15 分钟，然后用冷水冷却，晾干。 药剂浸种:带菌种子用 0.1%氯化汞 浸泡 20min 消毒处理(种子表面消毒)。 干热消毒:把带菌种子放在干燥的热空气中(60- 70)?进行干热消毒 1h(内、外部消毒)。 5 DB3701/T102-2007 附 录 B (规范性附录) 玉米病害田间症状识别 B.1 玉米霜霉病菌 Peronosclerospora spp. 系统侵染性病害，从苗期到成株期均可发病， 各种霜指霉侵染引起的症状相似。苗期生长缓慢，节间缩短，植株矮化，重病株不能正常抽穗， 或果穗与雄花畸形。叶片上出现淡绿色、淡黄色、苍白色或紫红色的条纹或条斑，宽度不等， 多与叶脉平行，以后变色枯死。湿度大时，叶片背面或两面产生灰白色霉层。 B.2 玉米细菌性枯萎病菌 Pantoea stewartii subsp.stewartii Mergaert et al. 系统侵染 性维管束病害，典型症状是矮缩和枯萎。苗期感病可导致枯萎死亡，生长后期侵染，植株矮缩。 受害病株的导管里充满亮黄色细菌黏液，横切面上可看到渗出的黏液。在甜玉米叶片上形成淡 绿色到黄色、具有不规则的或波状边缘的条斑，与叶脉平行，有的条斑可以延长到整个叶片， 病斑干枯后成褐色，感病的杂交种玉米植株很快枯萎;雄穗过早抽出并变成白色，在植株停止 生长以前枯萎死亡。 B.3 玉米干腐病 Diplodia zeae (Schw.)Lev. 玉米的整个生育期皆可发病，但开花后病情加 重。病株茎基部(4-5)节节间产生褐色或黑褐色斑块，髓部变褐、腐烂、破碎。叶片上产生不规 则长条形褐色病斑。叶鞘病斑深褐色至紫红色，可延伸到茎秆。叶鞘与茎秆间常有白色菌丝。 有的病株急性枯死，叶片迅速凋萎，变灰绿色。后期节部和节间产生大量黑色小粒点(病原菌 的分生孢子器)。果穗受害后，穗轴变松变轻，苞叶干枯变黄白色。苞叶与果穗间有白色菌丝体， 粘连不易剥离。拨开苞叶可见果穗下端或全穗子粒暗褐色，无光泽，子粒间充满灰白色菌丝体。 后期子粒上和穗部组织生有黑色小粒点。 B.4 玉米高氏细菌性萎焉病菌 Clavibactor michiganensis subsp.nebraskensis Davis et al. 玉米萎焉病在叶片上最初为不连续的水渍状斑点，初为暗绿色至黑色，后变褐，与叶脉平行， 并扩展到边成长条纹，呈叶灼状。表面常有细菌溢脓。玉米幼苗和成株期均可发病，苗期引起 萎焉、死亡。后期侵染造成植株矮化，叶片上出现灰白或黄绿色条纹，条纹边缘波浪形或不规 则形，有时有黑色斑点，最后干枯。系统侵染时，维管束变色，根和近地面的茎秆干腐或水渍 状褐腐。 6 DB3701/T102-2007 附 录 C (规范性附录) 玉米种室内检验方法 C.1 取样 对收贮的玉米种子,采用对角线 5 点取样或分层设点取样(具体取样方法、数量参 照农业植物调运检疫规程)。 C.2 玉米霜霉病菌: 洗涤检验:取样品种子 100 粒,浸入 25ml 蒸馏水中(加入 1 滴吐温),振荡 10min,用离心机 (2500r/min)离心 10min,沉淀物用 2ml 蒸馏水悬浮,镜检至少 8 滴悬浮液。 染色法检验:检查种子组织中是否存在菌丝和卵孢子，步骤如下:浸泡和染色—提取—脱水 —分离—透明—检查。(1)取样品种子 400 粒，在室温(28?)下浸入 11.5%氢氧化钠和 0.015% 棉蓝乳酚油溶液中 24h。(2)把浸泡过的种子在自来水流中搅动，用相连的网眼分别为 5 ?、4 ?、3 ?的分样筛分离种子各个部分。胚收集在最底部的分样筛上(注意不要弄坏种子的各个 部分)。用手分开种子各个部分，因胚乳部分溶解到碱液中而收集不到。(3)把胚和种皮放在直 径为 9 ?的染色缸中，分别用精馏酒精脱水 2min。(4)把脱水的胚转入带有胶皮管的漏斗中， 加入大约 20ml 的乳酸甘油混合液(乳酸:甘油:水=1:2:1)，胚乳在表层，而其他碎片则沉 在底部，通过胶皮管把其他碎片放掉。重复洗 5-6 次，直到其他碎片全部洗掉为止，用刷子和 镊子分离种皮。(5)把胚和种皮分别转入装有乳酸+甘油(1:2)的 250ml 的烧杯中，加热煮沸， 然后冷却。(6)用 16 和 40 倍的解剖镜检查乳酸甘油混合液中的胚和种皮，并用显微镜检查卵 孢子和菌丝;卵孢子被染成蓝色，大小为 31-50µm,菌丝通常长而分枝，粗壮、无隔、多核，在 一些种子中菌丝段呈原生质团状。 种植检验:将种子播于灭菌土壤中，观察幼苗的系统症状，直至出苗 5 周以后观察确诊。 C.3 玉米细菌性枯萎病菌的检验方法 细菌溢检验 切取病叶上病健交界处叶片组织约一毫米，放在载玻片上，滴一滴清水，盖 上盖玻片，放在低倍镜稍暗视野下检查，是否有云雾状菌液自病部溢出。 分离培养检验 1.从病株上分离:在新鲜病斑边缘切取部分组织，用常规方法分离培养病原细菌;在营养 琼脂培养基上菌落小、圆形、生长慢、黄色、表面平滑。 2.从土壤、病残组织和昆虫体内分离:从土壤、病残组织和昆虫体内分离病原细菌时，由 于杂菌污染的可能性大，通常采用伊凡诺夫选择性培养基分离。伊凡诺夫选择性培养基(pH7.2): 甘油 30ml，柠檬酸铁铵 10g，牛胆酸钠 3g，氯化钠 15g，蒸馏水 1000ml，硫酸钠 2.5g，硫酸镁 0.1g，琼脂 17g，氯化钙 0.01g，磷酸二氢钾 2.5g。 3.从种子中分离:选取玉米种子样品，用 95%乙醇洗净种子表面，用无菌水冲洗几遍，然 后在无菌容器中破碎，加入适量的 0.01mol/L(pH7.2)的 PBS，在 4?下浸泡过夜。浸泡液经纱 7 DB3701/T102-2007 布过滤和差速离心浓缩，然后用 523 培养基或改良 W 氏培养基做稀释平板分离。523 培养基:蛋白胨 8g,酵母粉 4g,MgSO?HO0.3g,蒸馏水 1000ml，蔗糖 10g，磷酸氢二钾 2g，琼脂粉42 18g,pH7.0,7.1;改良 W 氏培养基:蛋白胨 5g,蒸馏水 1000ml，蔗糖 10g，磷酸氢二钾 0.5g， MgSO?HO0.25g,琼脂粉 18g，抗坏血酸 1g,pH7.2,7.4。42 C.4 玉米干腐病菌的检验方法 直接检验:结合田间症状，用肉眼和手持放大镜仔细检查种子样品，对生有白色菌丝或黑色 小粒点的种子，进一步镜检病原菌。 分离培养检验:在直接检验的基础上，对可疑种子用 7%次氯酸钠溶液表面灭菌 1min，再用 灭菌水洗涤，然后移植于 PDA(加链霉素 250mg/L)或 MA 培养基平板上培养。2 天后，挑取菌 落移植到玉米粉琼脂培养基(玉米粉 10g，琼脂 12g，蒸馏水 1000ml)平板上继续培养，14 天 后检查分生孢子器。 C.5 玉米高氏细菌性萎焉病菌的检验方法 细菌溢检验 同玉米细菌性枯萎病。 分离培养检验 田间发现可疑症状病株时，必须分离病原进行确认。选取玉米种子样品， 用 95%乙醇洗净种子表面，用无菌水冲洗几遍，然后在无菌容器中破碎，加入适量的 0.01mol/L(pH7.2)的 PBS，在 4?下浸泡过夜。浸泡液经纱布过滤和差速离心浓缩，然后用营养 肉汤酵母膏(NBY)培养基做稀释平板分离。NBY 培养基:牛肉汁 8.0g，酵母膏 2.0g，磷酸氢 二钾 2.0g，磷酸二氢钾 0.5g，葡萄糖 2.5g，琼脂 15g，水 1L，灭菌后加 1ml 过滤灭菌的 1mol/L MgSO?7HO 溶液(Vidaver1967)。在此培养基上，玉米高氏细菌性萎焉病菌形成橘黄色的典型 42 菌落，生长较慢，25?6 天直径约 4 ?。 8 DB3701/T102-2007 附 录 D (规范性附录) 种子、苗木 产地检疫合格证 有效期止: 年 月 日 检疫日期:年 月 日( )检() 字第号 作物名称 品种名称 种植面积 田块数目 kg 第种苗数量 种苗来源 (株) 种植单位 负责人 一 联 检疫结果 签发机关(盖章) 检疫员 本 证第一联 交种苗繁 育单位， 凭证换取 植物检疫 证书;第 二联留存 检疫 机关 备查。 本 证不作《 植物检疫 证书》使 用。 9 DB3701/T102-2007 玉米种子产地检疫操作规程编制说明 玉米--作为我国第 3 大种植作物,在农业生产中占有极其重要的地位,而繁育玉米良种,又 是提高玉米产量、实现农民增收的一个重要环节。植物检疫作为农业安全生产中的一项重要保 护手段，在玉米良种繁育过程中起着举足轻重的作用。农作物种子产地检疫，包括种子生产过 程中的全部检疫工作，主要有选地、选种和田间、室内检验及签证等。为了切实使植物检疫在 农业生产过程中起到保驾护航的作用，确保农业生产的安全，杜绝农业植物检疫性有害生物的 传入、传播和蔓延，在没有国家标准的前提下，我们根据多年实施玉米种产地检疫工作的基础 上，本着安全、有效、经济、易行的原则，对玉米种子产地检疫措施进行优化整理，制定了本 检疫规程，使之易于广大农业技术人员接受、更易于在生产中推广应用。 本规程分为三个部分:?明确了规程适用范围、有关术语及检疫性有害生物?详细介绍了 玉米健康种子生产过程中的各项检疫措施。(3)附录部分详细说明了玉米检疫性有害生物的田 间症状识别和室内检验方法。 10