细胞生物学设计性实验：细胞核的分离鉴定.doc
医学细胞生物学设计型实验设计
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班级10级k-7班 评分
实验项目: 细胞核的分离与鉴定
实验原理:1、细胞内各种结构的比重和大小不同～在同一离心场内其沉降速度也不同。所以～用差速离心法可将细胞内各种细胞器及组分分级分离出来。差速离心法也是用来研究亚细胞成分的化学组成～理化特性及其功能的主要手段。
2、分离细胞核最常用的方法是将组织制成匀浆～在特定的条件下进行离心分离～然后分析鉴定。
3、匀浆是指在低温条件下～将组织放入匀浆器～加入等渗匀浆介质进行研磨～破碎细胞～使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液。
实验步骤:1、处死:断头处死小白鼠～手提尾部使其学业尽量流出。
2、取材:迅速开腹取肝～在盛有生理盐水的小烧杯中反复洗涤～称取湿重约为1g的肝组织放在烧杯中。
3、匀浆:加油8ml预冷的0.25mol/L蔗糖0.003mol/L绿化高永夜于烧杯中～尽量剪碎肝组织～将剪碎的刚组织倒入玻璃匀浆器～是匀浆器下端侵入盛有冰块的器皿,如冰盘,。左手握持匀浆器～右手将匀浆捣杆垂直插入管中匀浆～直至看不到明显的组织块。
4、过滤: 用8层纱布,先用少量生理盐水或蔗糖液润湿纱布,
过滤匀浆液于离心管中。
5、离心:在天平上平衡每对离心管～2500r/min离心15min～取上清液于另一离心管中。
6、涂片:取上清液制一张涂片,涂片1,。将原离心管中剩余上清液吹打成沉淀成悬液～另制一张涂片,涂片2,～自然干燥 。
7 、染色:分别在涂片1和2上低价甲苯胺蓝染液 ～染色5到7分钟,即滴染,。
、洗涤:冲去染液～晾干。 8
9、镜检:结合实验结果的描述～镜下观察分析。
注意事项:1.操作规范～防止试剂污染。
2.细胞悬液的涂片制作要轻柔。
3.使用离心机要注意平衡～转速从低到高。
预期结果:低倍镜下找到标本～再换高倍镜～可见肝细胞核已游离出来～被染成蓝紫色～圆形～中央有2到4个甚至更多个深蓝色的核仁。
实验用品:材料:小白鼠肝脏。
试剂:生理盐水、0.25mol/L蔗糖0.003mol/L氯化钙溶液、1%甲苯胺兰染液。
仪器设备:显微镜、普通离心机、天平、离心管、滴管、玻璃漏斗、量筒、25ml烧杯、解剖剪、镊子、冲洗瓶、纱布、伯乐匀浆器、载玻片、盖玻片、染色盘架。
设计组名单:
姓 名 学 号
姜 俊 1020150738
曾 祥 兵 1020150739
冯 国 周 1020150744
黄 丹 阳 1020150750
杜 徉 睿 1020150751
教师: 日期:
浙公网安备 33021202002483