肌肉DNA提取方法
1主要仪器设备
优普超纯水机，PCR仪，PL303型电子天平，EL20台式PH计，立式自动电热压力蒸汽灭菌器，水平电泳槽，电泳仪，紫外凝胶成像系统，电热恒温水浴锅，高速低温离心机，磁力加热搅拌器，微波炉
2 试剂
PBS磷酸盐缓冲溶液、DNA消化液、5mol/L NaCl、CTAB/NaCl、3mol/L NaAC、TE、50×TAE、10×TBE、30%丙烯酰胺贮存液、12%非变性聚丙烯酰胺凝胶、15%非变性聚丙烯酰胺凝胶、10%APS、银染色液、显色液。
溶液配方:
(1)PBS磷酸盐缓冲溶液:氯化钠 80g，氯化钾 2g，磷酸氢二钠 14.4g，硫
酸二氢钾2.4g，高压除菌。贮存于室温或4?。
(2)5moL/L NaCl:氯化钠29.2g，水50ml，加水至100ml。
CTAB/NaCl:氯化钠 4.1g，CTAB 10g，水 80ml，用水定容到100ml，同(3)
时加热搅拌(65?)，高压蒸汽灭菌。
(4)3moL/L NaAC:三水醋酸钠 408.1g，加水至1L，用醋酸调节pH值，高压
灭菌。
TE:10mmol/L Tris-Cl(pH8.0) 1mmol/L EDTA(pH8.0) (5)
(6)50×TAE:Tris碱 242g，醋酸 57.1ml，0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ml，
加水至1L
(7)10×TBE:1.5mol/L氯化钠，100mmol/L Tris-硼酸(pH7.5)
(8)30%丙烯酰胺贮存液:丙烯酰胺 29g，双丙烯酰胺(甲叉) 1g，水 60ml，
加热至37?，用水定容到100ml。
(912%非变性聚丙烯酰胺凝胶:N’-亚甲双丙烯酰胺 40ml，5×TBE 20ml，10%
过硫酸铵0.7ml,水 39.3ml。
(10)20%非变性聚丙烯酰胺凝胶:N’-亚甲双丙烯酰胺 66.6ml，5×TBE 20ml，
10%过硫酸铵0.7ml,水 12.7ml。
(11)10%APS:过硫酸铵 1g，双蒸水 10ml，4?保存。
(12)银染色液:NHHO 2ml，36%NaOH 4.2ml，20%AgNO 3.6ml，HO 190ml 3232
(13)显色液:柠檬酸钠 1g，甲醛100μL，H2O 200ml。
(14)DNA消化液。
3 肌肉DNA的制备方法
(1)取肌肉组织0.07g(取筋膜和结缔组织少的部位)放于已高压灭菌的研钵中，加入1 ml PBS缓冲液进行研磨和洗涤，直到不见组织块，用移液器吸取200μl放入2 ml的离心管中。再加入1 ml PBS缓冲液，3000 rpm,5min弃上清液。
(2)在处理的样品中加入500μl DNA消化液后反复吹打，再加入蛋白酶K至终浓度100μg/mL，混匀，将2ml的EP管放入37?水浴锅中或温箱中过夜消化。
(3)加入100μl 5moL/L NaCl和80μl CTAB/NaCl ，65?水浴10min，轻轻颠倒混匀。
(4)加入等体积的氯仿/异戊醇(V:V 24:1)轻轻颠倒混匀，12000 rpm，10min，
将上清液转入到另一新的2ml的EP管中。
(5)加入等体积的酚/氯仿/异戊醇(V:V 25:24:1)轻轻颠倒混匀12000 rpm，10min，将上清液转入到另一新的2ml的EP管中。
(6)重复步骤5。
(7)加入1/10倍体积的3mol/L NaAC和2.5倍体积的冰无水乙醇，-20?放置30 min，12000 rpm，10min。
(8)70,乙醇漂洗2次，12000 rpm，10min，室温风干至无乙醇味即可。
(9)加入30μl TE或灭菌水溶解DNA， -20?保存或电泳检测。
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