灵敏的单一溴酚蓝测定尿蛋白

灵敏的单一溴酚蓝测定尿蛋白 灵敏的单一溴酚蓝测定尿蛋白 2007生 广东微量元素科学 GUANGD0NGWEIUANGYUANSUKEXUE第l4卷第6期 文章编号:1006—446X(2007)06—0037—03 灵敏的单一溴酚蓝测定尿蛋白 方芳戚玉海张锋贺媛媛赵长容曹建明 (温州医学院环境与公共卫生学院,浙江温州325035) 摘要:在pH3.0的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲液中,用溴酚蓝作显色剂,建立了一种快速,简便, 灵敏,稳定的测定尿蛋白的分光光度法.该法显色络合物的最大吸收波长为620nm,线性范围 0,4.0g/L,批内变异系数为0.52%,批间变异系数为1.27%,日间变异系数为1.51%,回收率 为98.0%,99.3%,与邻苯三酚红比较有良好相关性,回归方程为Y=0.030+0.830, 相关系数 为r=0.9798. 关键词:溴酚蓝;尿蛋白;分光光度法 中图分类号:O657.32文献标识码:A 蛋白质是人体最重要的基本组成之一,与营养,免疫,新陈代谢等密切相关,尿蛋白是肾病 患者常见的重要临床 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 现之一,尿液中蛋白定量 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 对于肾脏病变的诊断,治疗及预后有着重要 的意义.目前已有的尿蛋白定量测定方法有比浊法,染料结合法,免疫法,红外法,电阻法,高 效液相法等.其中染料结合法因为准确性好,精密度高等优点,在临床上应用越来越广泛.最常 用于尿蛋白的测定染料是考马斯亮蓝G一250和邻苯三酚红,其中考马斯亮蓝存在分析仪器难以清 洗的缺点,邻苯三酚红存在易受表面活性剂干扰,分析时间长等缺点.1987年SHOSINSKY?提出 了溴酚蓝法(BPB)测定尿蛋白,此后对BPB法研究逐渐增多.BPB法虽灵敏度高,操作简 便,但现有的BPB法仍存在试剂用量大,显色体系复杂,测定结果重现性差等缺点.本文对 BPB法的测定体系进行改进,研制了组成简单的显色体系,建立了测定尿蛋白的新方法.该法操 作简便,灵敏度高,重现性好,与邻苯三酚红法比较结果满意. l测定原理 尿蛋白与溴酚蓝在pH3.0的柠檬酸缓冲液中结合生成复合物,复合物在620nm处有最大吸 收峰,最大峰的吸光度与尿蛋白质量浓度在一定范围成正比. 2材料和方法 2.1仪器 uv一2201型紫外可见分光光度计(日本岛津),721型可见分光光度计(上海第三分析仪 器厂),pHs一3c型精密pH计(上海雷磁仪器厂),FA一2004型电子天平(上海精科天平). 2.2试剂 蛋白 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 液:2.5g/L(5Og/L蛋白标准液2O倍稀释,标准液由罗氏公司生产). 卯 m 题 快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题 课 助 资 内 生 一 期目医 日项州稿金温 收基 2007生 广东微量元素科学 GUANGDONGWEILIANGYUANSUKEXUE第14卷第6期 显色液0.025g/L:称溴酚蓝(上海试剂三厂)0.02g用50%乙醇(安徽安特生物化学有限 公司)200mL,采用pH3.0的柠檬酸缓冲液1:3稀释. 全部实验均用二次蒸馏水,试剂均为分析纯. 2.3实验方法 测定管(U),标准管(S),空白管(B)分别加入尿标本,蛋白标准液,蒸馏水各5OL, 每管各加入3mL显色液,混匀,空白管调零,以1cm比色杯在620nm测吸光度(A). 2.4计算方法 4 P(尿蛋白)="Au×2.5 As 式中,P(尿蛋白)为尿蛋白的质量浓度,单位为g/L. 3结果与讨论 3.1最佳吸收波长的选择 按照本操作方法,在uV一2201型紫外可见分光光度计上扫描蛋白一显色液混合体系的吸光 曲线,确定复合物的最大吸收波长为620nm,选择620nm为测定波长. 3.2反应时间及稳定性试验 按本法操作蛋白与显色剂立即显色,可稳定至少2h. 3.3表面活性剂的影响 实验考察了25%Brij一35,4%TritonX一100,5%OP,5%Tween80,5%Tween20五种表面 活性剂对测定体系的影响,发现各种表面活性剂使方法的灵敏度有不同程度的下降.其中以 25%Brij一35降低最为显着,非离子型表面活性剂5%Tween20,5%Tween80影响最小,说明 BPB与蛋白质主要靠静电引力结合. 3.4线性试验 取一定量的蛋白标准液,按本法测定,得线性回归方程为A=0.0014+0.1449P的(单位: g/L),线性相关系数r=0.9993,线性范围为0—4.0g/L. 3.5回收试验 取已测定蛋白含量为0.70g/L的尿标本分别加入0.025,0.075,0.100g/L的蛋白标准液进 行回收试验,回收率分别为98.O%,99.7%,98.1%,平均回收率98.6%. 3.6精密度试验 取尿蛋白标本A,用该法连续测定2O次,测得尿蛋白平均值为2.032g/L,S=0.010, 批内 变异系数为0.52%;取尿蛋白标本B,做批间重复性试验,平均值2.138,S=0.027,变异系数 1.3%;另取蛋白标本C做日问重复性试验,平均值2.127,S=0.032,日问变异系数为1.51%. 3.7方法对比试验 用本法(Y)和邻苯三酚红法()分别测定4O例尿标本的蛋白含量,经统计处理,其回归 方程为Y=0.030+0.830,相关系数为r=0.9798,t检验,两者无显着性差异(P>0.05). 3.8讨论 近年来人们对溴酚蓝测定尿蛋白的研究较多,曾利用蛋白误差原理做成试纸条作 为商品出 售.但现有BPB法存在试剂用量大,重现性差,显色体系复杂,缓冲试剂成本较高等缺点.本 法对BPB法的测定体系进行了改进,采用乙醇作为溴酚蓝的溶解试剂,采用柠檬酸作为缓冲体 . 38. 2007生 广东微量元素科学 GUANGDONGIUANGYUANSUKEXUE第14卷第6期 系,将三种试剂简单组合制成单一的显色体系直接用于样nH"0I定,与原BPB法相比大大降低了 分析成本,并且该显色体系组成简单,配制方便,性质稳定;所建立的方法操作简便快速,灵敏 度高,重现性好,有很好的应用前景. 参考文献: [1]SCHOSINSKYKH,VARGASM,ESQUIVELAL,eta1.Simplespectmphotometricdet erminationofurinaryalbumin bydye—bindingwithuseofbromphenolblue[J].ClinChem,1987,3:223—226. [2]PERRONERD,MADIASNE,LEVEYAS.Serumcreatinineasanindexofrenalfunction: newinsightsintoold [J].ClinChem,1992,38:1933—1953. [3]JUNGK,NICKELE.Nonproteincomponentsofurineinterferewithcolorimetryofurinar yalbuminwithbromphenol blue[J].ClinChem,1989,35:336—337. [4]张红医,刘保生,王甫丽.光度法研究溴酚蓝与牛血清白蛋白的结合反应[J].光谱学与光谱分析,2003, 3(2):342—344. [5]谢慧芳,顾国宝,陈洁.介绍一种高灵敏的尿蛋白定性方法[J].检验医 学,2005,20(3):262—263. [6]姬景章,李忠信,才淑芳.溴酚蓝测定尿白蛋白方法的试验研究[J].陕西检验医 学,1999,14(2):21 — 23 ASimpleSensitiveBromophenolBlueReagent toDetermineUricProtein FANGFang,QIYuhai,ZHANGFeng,HEYuanyuan,ZHAOChangrong,CAOJianming (SchoolofEnvironmentalScience&PublicHealth,WenzhouMedicalCollege, ZhejiangWenzhou325035,China) Abstract:Asimple,sensitiveandstablemethodtodeterminationofproteininurineby spectr0ph0t0metrywithbromophenolblue(BPB)wasestablished.InthepH3.0citricacidbuffer system.themaximumabsorptionofthecomplexcompoundwasat620nm.Thelinearitywas0,4.0g/L Thewithinrun.betweenrunandbetweendayCVwasrespectively0.52%,1.27%and1.51%.The reCOVcriesrangedfrom98.0%to99.7%.Thecorrelationbetweenresultsbythismethod(Y)and pyrogallolred()wasY=0.030+0.830,r=0.9798. Keywords:Bromophenolblue;uricprotein;spectrophotometry ? 39?