液固吸附色谱法★[doc]★
三、液固吸附色谱法 LSC
, 分离原理:按被分离组分的分子(溶质分子)与流动相分子(溶剂分子)争夺吸附剂表面活性中心的吸附能力的差别而分离。
, 硅胶为吸附色谱法最常用的固定相。
四、液液分配色谱法 LLC
(一)正相分配色谱法:流动相极性,固定相极性。
主要用于分离溶于有机溶剂的极性及中等极性的分子型物质。
反相分配色谱法:流动相极性,固定相极性。主要用于分离非极性至中等极性物质。
(二)LLC的固定相 最常用的固定相是化学健合相。
(1)非极性健合相:十八烷基硅烷健合硅胶(ODS，C)、辛基硅烷健合硅胶(C)，在反相HPLC188中最为常用。
(2)极性健合相:常用氨基和氰基硅烷键合相，即可用于正相色谱法，也可用于反相色谱法。多用于正相HPLC。
??五、色谱系统适用性试验
目的:检查色谱系统在实验条件影响下是否符合要求
在各品种项下规定的色谱条件下，除固定相种类、流动相组成、
检测
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器类型不得改变外，其余如色谱柱内径、色谱柱长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组成的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变。以适应具体的色谱系统并达到色谱系统适用性试验的要求。
一、系统适用性试验
色谱系统适用性试验通常包括:理论踏板数、分离度、重复性和拖尾因子等四个指标。
2(1)色谱柱的理论踏板数(n) n,5.54 (t/W) t， W统一单位 R h/2Rh/2
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如测得n低于规定，应改变柱长或载体性能、重填色谱柱等以求达到。 (2)分离度 (R) R,2(t,t)/(W，W) 定量分析时R , 1.5 R2R112
记录纸速:转换分子、分母单位相同的参数。
考题 A型题:
测得两色谱峰的保留时间t,6.5min，t,8.3min，峰宽W,1.0min，W,1.4min，则两峰分离度RR1R212
为
A、0.22
B、1.2
C、2.5
D、0.75
,E、1.5
(3)重复性:
?对照品溶液连续进样5次，其峰面积测量值的 RSD ?2.0%
?配制相当于80%、100%和120%的对照品溶液，加规定量的内标溶液，配成三种不同浓度的溶液，
分别至少进样2次，计算平均校正因子，其RSD ?2.0% (4)拖尾因子(T): T = W/2d T应在0.95 , 1.05之间 0.05h1
六、应用
(一)鉴别 供试液主峰的保留时间与对照液一致 (二)杂质检查 《中国药典》用HPLC杂质检查方法有5种
1)内标法加校正因子
校正因子( f ) =(A/C) / (A/C) 含量 (C) = f ? A/ (A/C) s sRRxx S S
2)外标法 含量 (C) = C ? (A/ A) xRx R
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3)加校正因子的主成分自身对照法:对照溶液为供试品溶液的稀释溶液
4)不加校正因子的主成分自身对照法 无杂质对照品
5)面积归一化法
(三)含量测定 内标法加校正因子法、外标法
?4. 气相色谱法 gas chromatography， GC 一、基本原理
采用气体流动相;不适于难挥发和热稳定性差的物质的分析;各组分按K大小顺序依次被载气带
出色谱柱产生分离
二、气相色谱仪
(一)载气源 FID多用氮气或氦气为载气，氢气为燃气，空气为助燃气。TCD多用氦气或氢气为
载气;ECD多用氮气或氩气为载气。
(二)进样方式 可分为溶液直接进样、顶空进样
(三)色谱柱 填充柱或毛细管柱
(四)柱温箱 控温精度在?1?
(五)检测器:
1.火焰离子化检测器(FID)
氢气为燃气，空气为助燃气。检测器温度应高于柱温，并不低于150?,,防水气凝结，(否则
倒流)，通常为 250 ? - 350 ?
2. 氮磷检测器NPD 适于含氮、磷元素的药物
3. 火焰光度检测器FPD 适于含氮、硫元素的药物
4. 电子捕获检测器ECD 主要用于含卤素药物
5. 质谱检测器MS 能给出相应的结构信息
6. 热导检测器 TCD 检测组分的浓度变化
浓度型:TCD、电子捕获检测器ECD
(六)数据处理系统
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三、常用固定液与载体
1. 常用的固定液:常用的鲨鱼烷是标准非极性固定液
硅氧烷类 :SE-30、SE-54、OV-17、OV-25等
醇类:聚乙二醇(PEG)是最常用的固定液之一
2. 载体(担体) 作用:承载固定液
为化学惰性的多孔性微粒，常用硅藻土型载体:红色载体和白色载体。 3. 毛细管色谱柱:开管型毛细管柱和填充型毛细管柱
??四、色谱系统适用性试验
在各品种项下规定色谱条件下，除检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱材料不得改变外，
其余如色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏
度等，均可适当改变。
2 (1)色谱柱的理论踏板数(n) n,5.54(t/ W) Rh/2
(2) 分离度 (R) R,2(t,t)/(W，W) R , 1.5 R2R112
(3)重复性: RSD ?2.0%
(4)拖尾因子(T): 0.95 , 1.05
六、应用
(一)鉴别 供试液主峰的保留时间与对照品溶液一致
(二)杂质检查: 内标法加校正因子、外标法、面积归一化法和标准溶液加入法 (三)在含量测定中的应用: 内标法、外标法和标准溶液加入法
?5. 电泳法 (electrophoresis)
在电场的作用下，带电颗粒向其所带电荷相反的电极方向移动， 根据各组分淌度的不同而得到分离
的方法。
(一)基本原理
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v,,E
双电层与电渗:电泳所用的支持物(如滤纸)在溶液中带负电，而使接近其表面的缓冲液带正电，且形
成双电层。在电场的作用下，带正电的缓冲液整体向负极移动，形成电渗。
影响电泳分离的条件:(1)缓冲液的pH值和离子强度 (2)电场强度 (3)样品浓度
??(二)各类电泳法
(1) 纸电泳法
(2) 醋酸纤维素薄膜电泳法
(3) 琼脂糖凝胶电泳法
(4) 聚丙烯酰胺凝胶电泳法
(5) SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质分子量
(三)应用 鉴别、分子量测定、纯度测定
、毛细管电泳法(capillary electrophoresis，CE)二
毛细管电泳的分离模式:
1.毛细管区带电泳(CZE)
2.毛细管凝胶电泳(CGE)
3.毛细管等速电泳(CITP)
4.毛细管等电聚焦电泳(CIEF)
5.胶束电动毛细管色谱 (MEKC或MECC)
6.毛细管电色谱(CEC)
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