标准的免疫荧光染色步骤标准的免疫荧光染色步骤
这是针对细胞爬片的免疫荧光染色标准步骤:
1)实验前一天，将细胞接入铺有22×22mm(或24×24mm)盖玻片的六孔板中。 2)第二天，待细胞汇合度达到70,左右开始进行染色步骤。
3)用新鲜配制的2,(或4,)多聚甲醛固定细胞10分钟。
4)PBS洗三遍，每次5分钟。
5)用0.2-0.5, triton X-100(PBS配制)对细胞透化处理10分钟。 6)PBS洗三遍，每次5分钟。
7)2,BSA或者10,二抗同源血清(注意一定要是正常血清)封闭30分钟，PBS洗两遍。 ...
标准的免疫荧光染色步骤
这是针对细胞爬片的免疫荧光染色标准步骤:
1)实验前一天，将细胞接入铺有22×22mm(或24×24mm)盖玻片的六孔板中。 2)第二天，待细胞汇合度达到70,左右开始进行染色步骤。
3)用新鲜配制的2,(或4,)多聚甲醛固定细胞10分钟。
4)PBS洗三遍，每次5分钟。
5)用0.2-0.5, triton X-100(PBS配制)对细胞透化处理10分钟。 6)PBS洗三遍，每次5分钟。
7)2,BSA或者10,二抗同源血清(注意一定要是正常血清)封闭30分钟，PBS洗两遍。
8)加入1抗，室温孵育1 小时。
9)PBS洗三遍，每次5分钟。
10)加入二抗，室温孵育30-45 分钟。
11)PBS洗四遍，每次5分钟。
12)加入0.5 ug/ml DAPI(PBS配制)染色10分钟(这里也可用其它的染核染料如hoechst 33258)。
13)用PBS洗三遍，去除多余的DAPI。
14)加入20 ul封片剂封片。
15)封片好的细胞样品可于4度冰箱中存放2周以上。
注意步骤5-7在某些蛋白的染色步骤中可能不是必须的，一抗如果有多种(但注意要是不同种属的)可以同时孵育，二抗同时使用时最好是同一种属来源(如驴抗兔，驴抗羊，驴抗鼠)，以避免二抗间的交叉反应。
如果是组织切片样品，可能还涉及到样品的染色前处理(比如石蜡切片的脱蜡)，请参阅其它的说明，但荧光染色步骤是一样的。
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