维生素C含量的测定
【目的和要求】
1.学习定量测定维生素C的原理和方法。
2. 进一步掌握滴定法的基本操作技术。
3. 了解松针、水果及蔬菜中维生素C的含量情况。
【实验原理】
维生素C是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称抗坏血酸。它对物质代谢的调节具有重要的作用。
维生素C是具有L系糖构型的不饱和多羟化合物，属于水溶性维生素。她分布很广，植物的绿色部分及许多水果(如橘子、苹果、草莓、山楂)、蔬菜(黄瓜、洋白菜西红柿等)中的含量更为丰富。
维生素C具有很强的还原性。它可分为还原型和脱氢型(氧化型)。根据它具有的还原性质可测定其含量。
还原型抗坏血酸能还原染料2，6-二氯酚靛酚(Dichlorophenolindo phenol，简写 DCPIP)，本身则氧化成脱氢型。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。
因此，当用2，6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，在抗坏血酸尚未被全部氧化前，则滴下的染料立即被还原成为无色。一旦溶液中的抗坏血酸已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶液从无色转变成微红色时即
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示溶液中的抗坏血酸刚刚被全部氧化，此时即为滴定终点。从滴定时2，6-二氯酚靛酚
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溶液的消耗量，可以计算出被检物质中抗坏血酸的含量。
该法简便易行，但有下列缺点:1。在生物组织内和组织提取液中，抗坏血酸能以脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的形式存在。它们同样具有维生素的生理功能，但不能将2，6-二氯酚靛酚还原脱色。(总抗坏血酸的量常用2，4-二硝基苯肼法和荧光分光光度法测定)2.生物组织提取物和生物体液中常含有其它还原性物质，其中有些在同样的条件下也可使2，6-二氯酚靛酚还原脱色。3.在生物组织中，常有色素类物质存在，给滴定终点的观察造成困难。 【实验试剂和器材】
(一)试剂
1. 标准抗坏血酸溶液
准确称取10mg 纯抗坏血酸(应为洁白色，发黄则不能用)溶于1%草酸溶液中，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏。最好临用前配制。
2. 0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液
准确称取250mg2,6-二氯酚靛酚溶于150ml含有52mg NaHCO 的热水中，冷却后加水稀3
释至250ml，滤去不溶物,贮于棕色瓶中冷藏(4?)约可保存一周。每次临用时，以标准抗坏
血酸标定。
2%草酸溶液，1%草酸溶液。
(二)器材
架盘天平， 锥形瓶(100ml)，容量瓶，移液管，漏斗，微量滴定管(5ml)等 【实验方法】
(一)提取
水洗干净松针或整株新鲜蔬菜(或整个新鲜水果)，用纱布或吸水纸吸干表面水分。然后用天平准确称取松针(或蔬菜水果)约0.5克，放在研钵中，加2% 盐酸5-10毫升，研磨成浆状。滤纸过滤，将滤液滤入50毫升容量瓶中。滤饼可用少量2% 盐酸洗2-3次。最后用2%盐酸溶液稀释到刻度并混匀。
(二)标准液的滴定
准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml(含0.1mg抗坏血酸)置100ml锥形瓶中，加 9ml 1%草酸，用微量滴定管以0.1% 2，6-二氯酚靛酚钠溶液滴定至淡红色，并保持15秒不褪色,即达终点。由所用染料的体积计算出1ml染料相当于多少毫克抗坏血酸(取10ml 1%草酸作空白对照,按以上方法滴定)。
(三)样品的滴定
准确吸取滤液两份，每份10毫升分别放入两个锥形瓶(100ml)内，滴定方法同前。另取两份10ml 1%草酸作空白对照滴定。
(四)计算
式中:VA:滴定样品提取液所用染料的平均毫升数
VB:滴定空白对照所用染料的平均毫升数
C:样品提取液总的毫升数
D:滴定时所取样品提取液的毫升数
W:待测样品的重量(g)
T:为1ml染料能氧化抗坏血酸的毫克数
【注意事项】
1. 某些水果、蔬菜(如橘子、西红柿)浆状物泡沫太多，可加数滴丁醇或辛醇。 2. 整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2分钟。因为在本滴定条件下，一些非维生素C的还原性物质也可与2，6-二氯酚靛酚发生反应，影响结果。
3. 滴定所用2，6-二氯酚靛酚的量应在1-4毫升之间，超出或低于此范围，应增减样品液用量或改变提取液稀释度。
4. 2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而1%草酸无此作用
浙公网安备 33021202002483