木质素含量测定
3.1.2.2木质素含量测定
用紫外分光光度法测定木质素含量，10天幼苗木质素提取方法，参照Syros 等方法[153,154]并略作修改。如下:
1(0.5g鲜样用95%的乙醇研磨成匀浆，4500rpm离心10 min后收集沉淀。 2(用95%乙醇冲洗沉淀3次，再用乙醇:正已烷=1:1(V/V)冲洗3次， 收集沉淀并干燥。
3(干燥物用0.5 ml 25%溴乙酰(冰乙酸配置)溶解，70?水浴加塞保温30 min， 然后加0.9 ml 2 mol/L NaOH终止反应，加5 ml冰乙酸和0.1 ml 7.5 mol/L盐酸 羟胺,混匀后;
4(4500rpm离心5 min，吸取上清液0.1 ml，加3.0 ml冰乙酸稀释
-15(测定A280nm，以A280nm?mg protein
表
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示木质素的含量。 成熟植株与幼苗含量不同，提取及处理方法不同:
1(剪取拟南芥的主茎，用液氮速冻处理后冷冻干燥(过夜)，将样品研磨成 粉(<20目)。
2(称取10~15 mg样品放入20 ml带刻度试管，加入10 ml去离子水，在65 ?烘箱加热1 h，每隔10 min振荡一次。
3(每个样品用GF/A玻璃纤维滤纸过滤，残渣依次用水、乙醇、丙酮、乙醚 各漂洗3次，每次1~2分钟。
4.将滤纸置于20 ml闪烁瓶(不加盖)内，在70?烘箱中加热过夜。 5.在每个闪烁瓶中加入2.5 ml 25%溴乙酰-乙酸溶液，置于50?烘箱加热2 h (加盖)，不时摇动。
6(预备50 ml容量瓶，加入10 ml 2 mol/L NaOH溶液及12 ml冰乙酸。 7(将样品置于冰箱冷却后转移入容量瓶，用冰乙酸漂洗滤纸后定容至50 ml。 静置1 h(最好过夜)。
8(测量280 nm处吸光率。
木质素的含量按公式3.1计算:
Abs Lignin%= (Abs× liters×100% )/(W sample×A standard)
式中，Lignin%为木质素的含量，Abs为样品溶液在280nm处吸光率，liters 为样品溶液定容时的体积(L)，Wsample为样品的绝干重量(g)，Astandard为拟南芥木质素
标准
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吸光率，Astandard=17.2
浙公网安备 33021202002483