HIV实验室生物安全手册

HIV实验室生物安全手册 天山区疾病预防控制中心 生物安全管理体系文件 目录 工贸企业有限空间作业目录特种设备作业人员作业种类与目录特种设备作业人员目录1类医疗器械目录高值医用耗材参考目录 序号 名称 备注 1 HIV实验室人员准入制度 2 人员培训考核制度 3 人员健康监护制度 4 生物安全检查制度 5 实验室人员生物安全行为 规范 编程规范下载gsp规范下载钢格栅规范下载警徽规范下载建设厅规范下载 6 HIV初筛实验室废弃物处置和消毒措施 7 HIV初筛实验室环境消毒隔离制度 8 艾滋病职业暴露处理程序 9 实验室样本、血清安全保管和档案 管理制度 档案管理制度下载食品安全管理制度下载三类维修管理制度下载财务管理制度免费下载安全设施管理制度下载 10 实验室废弃物管理制度 11 实验室消毒隔离制度 12 高压消毒安全操作 13 HIV初筛实验室试剂管理制度 14 艾滋病初筛检测实验操作规程 2 一、 HIV实验室人员准入制度 1.目的 规范生物安全二级实验室的使用和管理，保证操作人员，实验对象和环境安全，确保检测结果准确可靠。 2.适用范围 适用于生物安全二级实验室安全运转及在此环境下的所有检测工作。 3.职责 进入生物安全二级实验室从事检测工作的所有人员严格按照本规定执行。 4.具体要求: 4.1概述 4.1.1生物安全二级实验室用于对检验者和环境有中度潜在危险样品的各项实验，必须符合下列规定: 4.1.1.1具备操作资质的人员可在生物安全二级实验室内工作，其他任何人未经许可禁止进入实验室。 4.1.1.2在实验室内的一切活动，必须遵照生物安全手册的规定进行。 4.1.1.3实验室内产生的污水，必须经过消毒后方可进入公共污水系统。 4.1.1.4实验室的所有废弃品，必须通过高压灭菌后才能处理。必须携出实验室的中间实验材料、更换维修的仪器设备、也只有在确保无病原微生物污染的条件下，才能携出实验室。 4.1.1.5实验室内准备二级全排式生物安全柜，所有可能造成污染的能够置于生物安全柜内的实验操作，置其内进行，以保证实验室内空间的安全。 4.1.2实验室运行的安全性要求 本手册规定的各项要求，首先是为了保证实验室的安全运行，包括防止实验室工作人员的感染、防止实验室操作的病原微生物对环境的污染、防止检测样品的污染，保证实验结果的准确可靠。 4.1.3实验室工作的质量要求 本手册规定的各项要求，同时也是为了保证实验室的工作质量，即:实验产生的各项结果和数据，必须准确可靠:实验室出具的检验报告，必须明确完整。 4.2实验室操作规程 4.2.1启动实验室 3 开始工作前半小时。开启实验室主电源，使实验室及生物安全柜投入运行。 开启顺序:?开启屋顶风机?开启全排风?开启空调?开启安全柜?打开房间紫外线灯。 4.2.2个人防护 工作人员按照下列要求进行个人防护，才能进入实验室区域: (1)在更衣室中换穿工作服和工作鞋。 (2)在清洁区内，根据实验要求做好防护。 (3)实验中需使用腐蚀性试剂时，在胶乳手套外加带一次性塑料手套;需要进行可能造成污染材料飞溅的操作时，需加戴防护眼镜。 4.2.3进入实验室 4.2.3.1工作人员进入实验室时，每进入一道门，应将此门关好，再开启下一道门。 4.2.3.2进入实验室后，关闭房间紫外线灯。 4.2.3.3检查实验室运转是否正常。 4.2.3.4做好开始实验的各项准备。 4.2.4启用标本、试剂 一切准备工作就绪后，才将标本和试剂从冰箱中取出，直接放入生物安全柜中。用完立即归位，使其在冰箱外停留的时间尽可能短。 4.2.5操作 4.2.5.1严格按照试剂使用说明进行操作。洗涤时避免液体材料飞溅。吸取、稀释液体时，将吸管插入试管底部，用吸球缓慢吸取，避免产生汽泡或汽溶胶。 4.2.5.2离心时，应使用双盖封闭式离心机和全封闭试管，每管离心液总量低于最高容量1个刻度单位:平衡时不得有液体渗陋到管套中，离心机使用后立即用消毒液擦洗消毒。 4.2.6观察结果 不打开容器的观察允许在生物安全柜外进行，否则，必须在生物安全柜内观察结果。 4.2.7准予携出实验室的材料 确保不含感染性的实验材料，才可以从实验室携出。容器表面应用75%乙醇消毒。 4.2.8实验室清洁 每一实验步骤完成后，均应清理台面。所有用过的试剂均应归还原位;使过的吸管等长形器材放入储存污物的盒内;实验室禁止使用锋利品;纸巾软物品放入污物袋;在台面上喷洒75%乙醇，保持20分钟，然后以纸巾擦干。实验室的其他表面，也应经常用75%乙醇擦拭。 4 4.2.9污染物品处理 放置污染物品的容器装满时，应更换新的容器。实验结束后，对用过的污染物品进行高压消毒。 4.2.10更换工作服。 工作完毕的更衣顺序是，先用消毒液浸泡手套5分钟，然后依次除去口罩、防护服、鞋套，放入高压消毒袋内，再次浸泡手套后除去手套，用75%酒精棉球擦面部裸露部位。 4.2.11实验室消毒 每次工作完毕，生物安全柜内用75%酒精或0.1%次氯酸钠溶液擦拭台面、地面，开启紫外线灯照射1小时后，逐一关闭实验室送风和通风设备{关闭顺序与开启顺序相反}。 4.3实验记录与实验报告 4.3.1实验记录 实验记录内容应简明扼要，包括实验日期，实验目的和实验的基本条件等提示记忆的内容，并较详细地记载观察到的实际现象及数据结果。要求字迹应清晰，数字成行成列，以避免录入错误。 4.3.2实验记录录入计算机 实验记录必须在实验结束后24小时内录入计算机。记录准确的实验报告和录入时间。再按照由实验室带出的书写记录，准确地记载实验结果和数据。录入后，书写记录保存1周，以备查验。实验记录录入后，一般不得修改。因数据记录错误，录入错误，或实际观察到的实验结果改变，必须更改记录时，不要删除已经录入的描述和数据，而应录入新的描写和数据，并注明更改原因。 4.3.4实验室记录备份 每月一次，将上月计算机的实验记录做出备份，备份的实验记录不得修改。实验室负责人应定期检查实验记录，核对备份与原始的实验记录，对记录中的缺陷提出修改意见。 4.3.5实验记录的保存年限 HIV实验记录最少保存十年，如无特殊原因，实验记录一般永久保存。 4.3.6出具实验报告 在需要出具正式实验报告的场合，报告由实验者填写署名，交实验室负责人记录核对后签字，再由单位签发人签字并加盖公章发出。 4.4标本保管规则 4.4.1标本进入实验室 5 4.4.1.1实验室采集的标本，本实验室统一登记编号，能反映出标本的来源、种类、性质、目的等相关信息。 4.4.1.2有关单位送检的标本由实验室统一登记编号，注明送检单位、送检时间、种类、性质、实验目的等相关信息。做好交接登记。 4.4.2标本的保管 根据标本的性质、目的进行保存。 4.4.3标本的销毁 确定不用的标本，采用高压灭菌后焚烧的方式销毁。 4.5实验室装备保养 4.5.1实验室定期保养 实验室的定期保养按照提供实验室设备厂商的规定进行，主要是对机械和电器部分进行维护。 4.5.2实验室仪器设备的保养和维护 实验室内的仪器设备的保养由实验室工作人员进行。维护有专业人员进行。生物安全柜的滤器必须按说明书规定的时间定期由专业人员更换，其它仪器设备也应根据实际需要清洁保养。 4.5.3实验室仪器设备的维修更换 仪器设备需要更新，需要离开实验室进行维修，或损坏需要更换，以及必须临时进入实验室使用，使用完毕后必须撤出实验室的贵重仪器，在撤出实验室之前必须以恰当的方式严格消毒，方可处理或重新投入使用。 4.6意外情况处理 4.6.1实验室意外事件的处理原则 4.6.1.1造成或可能造成实验室污染，但未造成人身伤害的实验室报告，由实验室负责人处理。例如实验过程中。由于标本、试剂益处溅落造成操作台或地面的污染等，应立即喷洒消毒液并覆盖浸透消毒液的纸巾，待消毒液彻底浸泡30分钟后，对污染的物品进行清理。清理后的物品高压灭菌。并填写生物安全2级实验室意外情况登记与处理记录表，实验室负责人应指导这些处理活动，并检查处理效果。 4.6.1.2实验室事故可能造成气溶胶污染，如压力容器或管道破裂、离心机事故等，应立即关闭实验室，张贴禁止入内的标识。用消毒液喷雾和紫外线照射污染的区域，24小时再进行终末消毒，实验室负责人除立即采取对应措施外，应向上级部门报告，并填写意外情况登记与处理记录表。 6 4.6.1.3实验室工作人员在实验室内受到意外伤害，如割伤、烧伤、烫伤等，在实验室内昏倒或发生身体严重不适，也有实验室负责人处理。令受到伤害的人员立即停止工作，用消毒液清洗未破损的平凡表面，伤口以碘伏消毒，眼睛用无菌生理盐水冲洗。由在同一实验室内人员或派人迅速着装进入实验室，清除造成伤害的原因，清理实验材料，帮助受伤人员紧急处理并撤离实验室。受到伤害的人员应进行治疗并休息，在身体状况未恢复之前，不得重新进入实验室工作。实验室在经过整理，消除了造成伤害的故障之后，方可重新使用。 4.6.1.4伤害事故可能导致被强毒微生物感染，例如针头刺破、锐器割伤、黏膜暴露等途径接触到感染性液体，或在操作过程中发生培养物、污染材料溅落身体表面，意外接种等情况，首先进行局部处理，用肥皂和水清洗污染的皮肤，挤压伤口尽可能挤出损伤处的血液，用肥皂和清水冲洗，用消毒液浸泡或涂抹消毒，并包扎伤口。暴露的黏膜应尽快用生理盐水或清水冲洗干净。实验室负责人应向上级部门报告，对受伤害者进行隔离观察，同时根据情况预防性用药，并写出职业暴露后预防感染的评价和处理 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 。 7 二、 人员培训考核制度 1.目的 规范实验室相关人员的培训考核 2.适用范围 适用于生物安全涉及的所有工作人员 3、人员培训考核制度 3.1.实验室工作人员的培训 3.1.1、实验室应进行全员安全培训并强化“普遍性防护原则”安全意识，所有的血液、未固定的组织和组织液样品，均应视为有潜在的传染性，都应以安全的方式进行操作。所有管理和检测人员都应接受省级以上艾滋病检测实验室主持的安全培训，包括上岗前培训和复训，取得HIV检测上岗证并接受管理人员的监督。 3.1.2、必须对新上岗人员进行安全教育和培训，使他们清楚实验室工作的潜在危险，通过考核等方式确认他们具备安全操作的能力后方可单独工作。 3.1.3、对新调入人员、外来合作、进修和学习的人员必须进行生物安全培训，经实验室主任批准后，方可进入实验室。 3.1.4实验室人员每年要接受自治区级、市级有关生物安全培训。 8 三、 人员健康监护制度 1.目的 规范实验室相关人员的健康监护 2.适用范围 适用于生物安全涉及的所有工作人员 3、人员健康监护制度 3.1、艾滋病实验室工作人员上岗前必须进行HIV抗体和乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒等肝炎病毒标志物检测，应接种乙肝疫苗。应每年对工作人员采血检测HIV抗体，血清应长期保留。 3.2实验室工作人员的适合工作状态 实验室工作人员必须在身体状况良好的情况下，才能进入实验室工作。出现下列情况，不应进入实验室:身体出现开放性损伤;患发热性疾病:感冒、上呼吸道感染;其他导致抵抗力下降的状况:妊娠、在实验室内连续工作4小时以上或其他原因造成的疲劳状态。 3.3、遇有手部皮肤有开放性伤口及其他不适于工作的情况，应暂停工作。 9 四、 生物安全检查制度 1.目的 规范实验室生物安全，保证设备正常运行。 2.适用范围 适用于生物安全涉及的仪器设备(比如生物安全柜等) 3、生物安全检查制度 3.1 实验室负责人有责任确保安全检查的执行，每年对工作场所至少检查一次。 3.2 实验室主管领导对生物安全工作不定期地进行监督抽查。 3.3 保证应急装备、警报体系和撤离程序功能及状态正常。 3.4 用于危险物质泄露控制的程序和物品状态。 3.5对全血以及血清标本存放进行适当的防护和控制。 3.6 污染和废物处理程序严格按照作业指导书进行。 3.7 实验室设施、设备和人员的状态。 3.8 每年定期接受自治区、市级病原微生物实验室生物安全管理工作的督查。 3.9 定期接受对病原微生物实验室生物安全管理自查工作。 10 生物安全自查记录 一、生物安全实验室的设施和设备 清洁区、半污染区、污染区分区是否明确 是 ? 否 ? 是否使用负压通风过滤技术 是 ? 否 ? 是否有使用生物安全柜的记录本 是 ? 否 ? 是否有高压灭菌器和紫外线消毒记录 是 ? 否 ? 二、生物安全实验室的检测验证 负压值是否10Pa 是 ? 否 ? 温度、湿度、噪声和照明是否合格 是 ? 否 ? 三、生物安全实验室个人防护装备 是否有足够的防护用品(帽子、口罩、隔离 是 ? 否 ? 衣、护目镜、手套、鞋套) 是否有防护操作程序 是 ? 否 ? 四、生物安全实验室操作技术规范 是否有实验室安全管理制度 是 ? 否 ? 工作人员是否做到安全防护 是 ? 否 ? 实验人员是否安全操作 是 ? 否 ? 仪器设备的使用是否规范 是 ? 否 ? 样本操作是否规范 是 ? 否 ? 是否使用个人防护用品 是 ? 否 ? 五、病原微生物菌(毒)种和样本的管理 血液样本的采集是否规范 是 ? 否 ? 血液样本的保存与转送是否符合要求 是 ? 否 ? 检查人员: 年 月 日 11 五、 实验室人员生物安全行为规范 1.目的 规范实验室人员的生物安全行为规范 2.适用范围 适用于生物安全涉及的所有工作人员 3、个人防护 3.1皮肤的伤口和擦伤都要以防水敷料覆盖。 3.2进实验室前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手。 3.3进入实验室要穿隔离衣，带手套。如果接触物传染危险性大，则应戴双层手套和防护眼镜。 3.4离开实验室前必须脱去隔离衣并洗手。 3.5严禁在艾滋病检测实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。 4、带入和带出实验室的物品 4.1对所有带入实验室的物品都要进行检查。含有测试样品的包裹应在安全柜或其他适当的装置内打开。 4.2将HIV测试样品转送其他实验室时，应防止对人员和环境的污染。护送样品的人应明确接受地点和接受人，实验室负责人或其指定的人员应及时确认样品以送达指定的实验室，被转入安全位置并得到妥善处理。 4.3污染或可能造成污染的材料在带出实验室前应进行消毒。 包装和标记，并提交相应的资料。 5、减少利器的使用 5.1尽量避免在实验室使用针头、刀片等利器。如果必须使用，在处理或清洗时应采取措施防止刺伤或划伤，并应对用过的物品进行消毒处理。 5.2最好不使用玻璃制品。 5.3尽量使用安全针具采血，如碟形真空针，自毁性针具等，以降低直接接触血液和刺伤的危险性。应将用过的针头直接放入坚固的容器内，消毒后废弃。 12 六、HIV初筛实验室废弃物处置和消毒措施 1、废弃物处置 废弃物处置应符合《实验室生物安全通用要求》(GB 19489-2004)和《消毒技术规范(2002年版)》。 从艾滋病实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。 2、HIV常用的物理消毒 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 压力蒸汽消毒，121?，保持15,20min; 干燥空气烘箱消毒(干烤消毒)，140?，保持2,3h。 3、HIV常用的化学消毒方法 HIV最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂(次氯酸钠，含有效氯2000,5000mg/L)、75%乙醇和2%戊二醛，保持10,30 min。 4、废弃物缸:5000mg/L 次氯酸钠。 5、生物安全柜工作台面和仪器表面:75%乙醇。 6、溢出物:5000mg/L次氯酸钠。 7、污染的台面和器具:2000mg/L 次氯酸钠,也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛浸泡消毒。 8、实验台消毒 8.1、实验台消毒措施必须符合艾滋病实验室的通用生物安全要求。由专人按特定程序和方法进行清洁和消毒。 8.2、台面的清洁消毒，保持清洁、湿式打扫。每天开始工作前用湿布抹擦1次，地面用湿拖把擦1次，禁用干抹干扫。抹布和拖把等清洁用具实验室专用，不得混用，用后洗净晾干，下班前用含氯消毒剂(次氯酸钠，含有效氯2000mg/L)、0.2,0.5%过氧乙酸或75%乙醇抹擦1次。也可用便捷式高强度紫外线消毒器近距离照射消毒。 8.3、操作未知传染风险样品一样进行消毒与灭菌，小心存放、拿取和使用所有可能有传染性的血液、质量控制和参考物质，若被上述物品明显污染，如具传染性的标本或培养物外溢，溅泼或器皿打破，洒落于台面，应立即用消毒液消毒，用5000mg/L有效氯消毒剂、过氧乙酸或乙醇洒于污染的台面，并使消毒液浸过污染表面，保持30,60 min后再擦拖把用后浸于上述消毒液内1h以上。 8.44、各类在实验室实验台上操作后的废弃物品均应视作物染物分类处理，所有废弃物应视为HIV污染物品，按照《传染病防治法》处理。 9、消毒液的配制及使用 9.1、HIV实验室最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂(次氯酸钠，含有效氯2000-5000mg/L)、75%乙醇和2%戊二醛，保持10,30 min。 9.2、含氯消毒剂的配制:次氯酸钠原液使用前进行1:20,1:50稀释(2000-5000mg/L)或联昌84使用前进行1:10,1:25(2000-5000mg/L)稀释 13 后，用于实验室内的消毒。 9.3、乙醇，俗称“酒精”，能够杀灭多种细菌，对HIV病毒有一定的杀灭作用，70,75%的效果最好。因此，使用前新鲜配置足量70,75%的乙醇，用于生物安全柜、工作台面和仪器表面的消毒，可以达到最佳的消毒效果。 9.4、过氧乙酸也是目前使用比较广泛的一种高效消毒剂，新鲜配置1,3%的过氧乙酸熏蒸，用于地面、墙壁、实验器材及实验室内资料、文件、书本等物品的消毒。0.04%的过氧乙酸用于实验室工作人员手浸泡1,20分钟，再用肥皂洗手。 9.5、2%戊二醛用于可浸泡物品的消毒，医疗器械等。 9.6、HIV实验室常用化学消毒剂的配置，本着多用多配，少用少配，现用现配的原则，保证消毒剂使用时的浓度，保证消毒效果。 14 七、HIV初筛实验室环境消毒隔离制度 1、实验室应分为清洁区和操作区，清洁区要注意保护不受污染。操作有气溶胶可能的标本应配置生物安全柜及其它防护设置，如紫外线灯，排气扇等操作区的工作台及地面每日用消毒液擦拭一次，有污染时随时消毒，每周大扫除一次。 2、采血室每日操作前用清水擦拭操作台一次，采血结束用消毒液擦拭操作台、桌子和地面一次，紫外线每日照射消毒一次。 3、各种检验标本的收集，送检必须用相应指定的容器留取，不得外溢污染。 4、静脉及末稍采血，应严格执行消毒隔离措施，静脉抽血做到一人一针一筒一巾一带一消毒，所用止血带及纸垫每日消毒，末稍采血一人一片一管，杜绝交叉污染。 5、一次性医用器具包括采血针，注射器、尿杯、血红蛋白微量吸血吸管，应严格做好领发登记，注射器先浸泡消毒后由供应室一对一调换，统一处理，其余一次性器具浸泡消毒后装入污物袋送焚烧炉焚烧。 6、检验人员在进行静脉抽血时应严格遵守无菌操作技术，操作前必须洗手必须戴好帽子与口罩，操作台和手被污染时应用肥皂和流水认真洗手，必要时用消毒液浸泡双手，酒精、碘酒瓶每周更换消毒两次。 7、溢出试管外的血液，应立即用碘酒棉签擦拭干净，注意防止玻璃碎片刺伤手，并注意试管有无破裂。 8、当针头和碎玻璃刺伤手时,用流水冲洗,挤出血水,应立即用碘酒消毒局部。 9、实验室操作时应戴上手套。吸取标本，离心振荡等应严格按操作规程，防止自身和实验室受污染。 10、已检查标本与容器分别浸泡于次氯酸钠(2000mg/L)中两小时后，标本倾弃，一次性容器送焚烧，重复使用的经清洗消毒和灭菌后再使用，均要有记录。有毒化学试剂和放射性试剂使用后要经无害化处理，防止污染环境。 11、非科室工作人员不准进入实验室，外来人员参观需经科主任同意方可进入。 15 暴露物是否是传染性物质，如血液、含血体液、其它传染性物质或被其 污染的器械 是 否 其它潜在传染性物质 不需预防性治疗 血液或含血液体 暴 露 的 类 型 粘膜或可能有损伤的皮肤 只沾染完整的皮刺、割伤皮 肤 肤 暴露量 不需PEP 危险度 量小暴露量大暴露低危 如:高危 如: 时间 时间短 表皮 伤口较深、 擦伤、针刺仪器上可 等 见血液等 1 级暴露 2 级暴露 3 级暴露 2 级暴露 八、艾滋病职业暴露处理程序 职业暴露的处理方法艾滋病职业暴露是指医护人员从事医疗、护理等工作中意外被HIV感染者或艾滋病病人的血液、体液污染了皮肤或者粘膜，或者被含有HIV的血液、体液污染了的针头及其他锐器刺破皮肤，有可能被HIV感染的情况。 1、急救处理 (1)刺激出血:职业暴露的紧急处理，只要情况允许，应实行急救。如皮肤有伤口，应当反复轻轻挤压，尽可能挤出损伤处的血液。 (2)肥皂和清水冲洗伤口或沾污的皮肤。眼睛、口、鼻溅入HIV阳性标本，立即用大量自来水或生理盐水冲洗，应避免摩擦眼睛，连续冲洗至少10分钟。 (3)受伤部位的消毒与包扎:伤口应用消毒液(如75%酒精、2000mg/L 次氯酸钠、0.2%,0.5%过氧乙酸、0.5%碘伏等)浸泡或涂抹消毒，并包扎伤口。 16 (4)由于暴露后有无采取急救措施对职业暴露后HIV感染有一定影响，故应尽量为受伤者寻找医疗机构，以求正确护理伤口和暴露后急救处理。 (5)可介绍已发生职业暴露的人员到艾滋病防治机构进一步咨询和处理。 2、暴露级别的评估，分为1、2、3级。 暴露源的HIV情况 HIV阳性 HIV阴性 暴露源不明 无需PEP 暴露源的HIV滴度暴露源的HIV滴度 低(无症状、CD高(有症状、CD44 计数高) 计数低) HIV暴露源级别1HIV暴露源级别2HIV暴露源级别 (轻度) (重度) 不明 3. 确定HIV暴露源头严重程度，分为轻度、重度和不明。 4.扎伤、刺伤的伤口经处理后，立即与新疆维吾尔自治区卫生防疫站艾滋病预防与控制中心确认实验室联系，在24小时内(越早越好)赶到艾控中心，在专家的指导下，根据暴露情况进行预防性治疗。同时作好下列事项:(1)采集初筛阳性者及被扎医务人员的血液各3ml，尽快送到艾控中心确认实验室进行检测和确认。(2)写明事故发生的详细报告:包括发生时间、地点、经过、暴露方式、损伤的具体部位、程度、接触物的种类(血液或其他液体)、伤口的处理方法 及经过。该报告一式两份，单位盖章后，一份送艾控中心确认实验室，一份由原单位保留。(3)与自治区疾控中心有关专家联系根据情况共同进行风险的评估，确定用药的必要性、确定预防药物和用药程序，并将处理情况向主管行政部门报告。(4)监测暴露源:如果暴露源没有阳性或阴性的血清学化验结果应立即检测，最好做快速试验，因其结果可在几十分钟内得到。如果暴露源有急性HIV综合征的症状，应同时检测病毒载量。(5)监测职业暴露者:由自治区疾控中心HIV确认中心抽血检测职业暴露者的HIV-1/2抗体(包括做快速试验)，该血清留样备用。如果职业暴露者以前已有HIV抗体的化验结果，则应加以记录。暴露后1年内要定期监测HIV抗体，即分别在暴露后4周、8周、12周、6个月监测。结果填写在报来的“艾滋病职业暴露人员个案登记表”内。 17 6. 保密和报告 保密:无论职业暴露、重大事故或小型事故，对涉及的职业暴露者，均应注意做好保密工作。每一个得到信息的机构或个人均应做好保密工作。 18 九、实验室样本、血清安全保管和档案管理制度 1.目的 规范实验室标本和生物样本的保管和档案管理 2.适用范围 实验室标本和生物样本的处理和档案管理 3、实验室标本和生物样本的保管 3.1按规定可以保存的阴性标本血清，由指定的专人负责登记、保存和管理。必须在生物安全柜内进行，并做好有关记录。需要销毁的标本按照实验室废弃物管理制度销毁。 3.2本室检出的HIV初筛阳性标本应及时上送，因工作需要暂时保存的标本要双人双锁管理 3.3未经上级批准，任何单位及个人不得以工作之便，进行国际间各类菌(毒)种交流，做好菌(毒)种安全防范工作。 4、档案管理制度 4.1、非实验室人员不得随意查看实验室记录 4.2、实验室人员负责妥善保存各种样品登记本、报告单及实验室原始记录，不得擅自修改和销毁 4.3、专人负责保管感染者档案 4.4、未经领导批准不得向无关人员或单位提供任何实验室及感染者信息 4.5、HIV抗体初筛实验室检测的阳性结果不是最终结果，须进一步确认，确认前不得出具阳性报告及告知受检者本人或有关单位 19 十、 实验室废弃物管理制度 1.目的 规范废弃物处理 2.适用范围 尖锐器具和其他废弃物的处理。 3.具体方法: 3.1尖锐器具的处理 3.1.1尖锐器具，如针、注射器等，除特殊情况外，禁止在实验室使用，尽可能用塑料器材代替玻璃器材。 3.1.2注射和吸取感染性材料时，尽可能使用一次性注射器。用过的针头禁止折段、剪段、折段、重新盖帽或从注射器上取下，禁止用手直接操作。用过的针头、注射器直接放入防刺破的盛废弃锐器的容器中。非一次性锐器必须放置在坚壁容器中，进行高压消毒处理。 3.1.3尽可能使用带针头套的的注射器、无针头的系统和其他安全装置。 3.1.4打碎的玻璃器具，禁止用手直接清理，必须使用其他工具，如扫把、簸箕、夹子或镊子等。盛污染针、锐器及碎玻璃的容器在丢弃前必须彻底消毒。 3.2废弃物的处理 3.2.1实验后的废弃物如不及时处置则会污染环境，从而对人造成危害，因此有关人员必须严格按照规定执行。 3.2.2实验样本在处理和进行实验室检测时产生的废弃物，如一次性针头、离心管、平皿等应放入适当的容器和严格防漏的高压袋内，待实验结束后立即就地高压消毒。 3.2.3实验过程中产生的污染性液体物质、废弃的液体标本等放在盛有消毒液的严格防渗漏的专用容器中，并及时加盖。 3.2.4进行实验所必须使用的容器，如针头、一次性注射器、玻璃器具、手术刀片等，放入专用的坚壁容器内，加盖密封。 3.2.5以上所有盛装废弃物的容器，在每次实验结束后，就地高压消毒。 3.2.6高压锅应有专人负责，严格按使用说明操作，确保在121 条件下，高压30分钟，以达到消毒要求。 3.2.7所有实验产生的废弃物，必须经严格高压消毒后方能运出实验区，并送至指定地点集中焚烧处理。 20 十一、实验室消毒隔离制度 1.目的 规范微生物实验室和生物安全二级实验室的消毒隔离工作。 2.适用范围 微生物实验室和生物安全二级实验室。 3.职责 所有工作人员都必须遵从本规程。 4.具体步骤 4.1实验室基本要求 4.1.1实验室相对独立，实验室核心区包括实验间及缓冲间，明确划分清洁区、半污染区和污染区，并有明显标识。 4.1.2各区域交叉处应设置有效氯2000的含氯消毒剂溶液浸湿的脚垫。 4.1.3实验室内所有物品应专用，须带出时必须严格消毒。 4.1.4实验人员进入实验室应穿戴好个人防护用品，如隔离衣、防护眼睛、口罩、一次性手套等。实验过程中注意自身防护，并防止操纵过程中的交叉污染。 4.1.5培养基、组织、体液等必须放在防漏密闭的容器中储运。 4.1.6血清学试验、样品的处理和分装应在BSL-2安全柜内进行。 4.1.7样品离心使用密封的离心杯，以防溅出。 4.1.8实验过程中使用的器材、实验废弃物均应按废弃物处理程序进行消毒处理。 4.1.9当传染性标本溢出或溅出后，应有专业人员立即消毒和清理。 4.1.10实验完毕，先消毒物体表面，再按规定程序脱下个人防护用品放入包装袋内就地高压消毒，并进行空气消毒。 4.1.11离开实验室前，必须按有关规定消毒双手。 4.2消毒方法 4.2.1仪器等表面消毒:工作结束后，用含有效氯1000的消毒液或75%乙醇溶液擦拭消毒，作用20分钟以上。 4.2.2实验器材的分类消毒:将使用后的锐器方入防刺破、防渗漏的密闭专用锐器处置盒内，121?高压消毒30分钟。其他器材方入有效氯为2000mg/L的含氯消毒液内浸泡1小时以上。处理时应避免皮肤损伤。 21 4.2.3工作台等物体表面消毒:工作完毕，用含有效氯2000mg/L的消毒液或75,乙醇溶液擦拭消毒，作用20分钟以上。 4.2.4个人防护用品消毒:实验结束，将隔离衣、口罩、帽子、手套、鞋套等121?高压消毒30分钟。防护镜浸泡在75,乙醇或有效氯为1000mg/L的含氯消毒剂中，作用30-60分钟。 4.2.5手的消毒:用典伏或75,的乙醇擦拭，作用1-3分钟。 4.2.6空气消毒:每次实验前后用紫外灯照射消毒，每次不少于1小时，每立方米空间安装紫外灯瓦数?1.5W，距紫外灯1米处照射强度?70W/?。 4.2.7这张消毒:应用80ml/m3福尔马林，密闭熏蒸消毒6小时后方可带出。 4.2.8地面消毒:工作结束，应用含有有效2000mg/L的消毒液喷洒拖地。 4.2.9废弃物的处理:实验的废弃物应放入适当的容器内，就地121?高压消毒30分钟，消毒后的废弃物集中收集、焚烧处理。 22 十二.实验室高压消毒安全操作 5.1使用前应了解并掌握高压锅的原理及操作规则，以及不正确使用而导致的灾难性后果。 5.2按照操作规程使用高压锅 5.2.1接通电源，合上高压灭菌器左侧总电源开关。 5.2.2注入加热用水，注水至加热器罩的水位水准器配件尖端浸入水中为止。 5.2.3设定灭菌温度，先按“编集”键，然后按上下键调节到灭菌所需温度，然后按“实行”键，把所设温度存进程序。 5.2.4设定灭菌时间，先按“编集”键，然后按上下键调节到灭菌所需时间，然后按“实行”键，把所设时间存进程序。 5.2.5按“实行”键执行灭菌程序，此时“灭菌”灯闪烁。 5.2.6当灭菌程序执行完成，灭菌程序自动停止运行。 5.2.7在确认压力表的显示压力降到0刻度时，打开高压灭菌器顶盖，取出灭菌样品。 5.3高压锅操作人员在使用高压锅时不得离开岗位;在日常使用过程中，必须严格按照操作规程执行，并按照规定进行设备的维护。每1年保养一次，每月检测一次消毒效果。 5.4高压锅的物品不得放的过满，否则影响灭菌效果。放好被消毒灭菌的物品后，高压锅的盖子或门必须拧紧。 5.5定期检查高压锅，以确保其正常工作，防止意外事故发生，保证消毒灭局效果。 5.6高压灭菌安全操作步骤 5.6.1在灭菌前将双层的高压灭菌带包好，废物在灭菌袋中的体积不能超过袋子体积的3/4，灭菌袋用橡皮带捆好，但不能扎得太死，否则蒸汽不能进入所料袋内影响灭菌效果。 5.6.2实验产生的所有废物应该及时就地灭菌处理。如果灭菌器正在使用或优于其它原因不能马上使用，则废物必须放在灭菌袋内捆好并放在实验室内，在存放期间确保袋子无损坏。 5.6.3当高压锅消毒灭菌盗时间后，取出物品放在废物收集处。 5.6.4当开始灭菌时必须确信灭菌国内水量合适，高压温度和时间设置正确。灭菌应保持在121?30分钟，时间和温度不得超过设定值，否则灭菌袋会融化，清理困难。 23 十三、HIV初筛实验室试剂管理制度 (一)、采购与审批 实验室负责人根据需要定期拟定采购计划，交由中心主任审批，批核后由单位办公室统一招标采购 (二)、验收与登记 仓管负责人根据供应商提供的试剂及清单对数量、品种、品牌、包装等进行验收，并将入库数据登记。 (三)、贮存 冷藏试剂统一存放在HIV实验室专用的冰箱内，冷箱保管及温度控制由仓管负责人负责。HIV试剂一般应2,8?避光保存，在有效期内使用。 (四)、出库管理 各室提出试剂申领，仓管人填写出库单据，认领人签名后出库。 (五)、其它 1、试剂的保存应严格按照要求存放，以保证有效期内能有效地使用，杜绝浪费现象。 2、仓管人应对试剂库存定期检查，不使用过期变质的试剂。 3、易燃，易爆试剂应分开存放远离火源和电源。 4、剧毒试剂必须由科主任和负责科室保卫的同志负责保存，放保险箱内，使用时应有两人在场，并做好登记。 24 十四、艾滋病初筛检测实验操作规程 1.目的 保证艾滋病病毒抗体ELISA实验的准确性。 2.适用范围 艾滋病病毒抗体ELISA实验。 3.具体要求 3.1样品采集 样品采集安试剂盒要求采集。采血时注意安全，用一次性注射器谨慎操作，防止发生刺伤和造成外界污染。血样如即时用可存于普通冰箱，如要长期保存，分离血清置于-20?及以下。同时做好记录。 3.2样品运送 样品转送，除特殊需要外，必须是血清或血浆，置于带有盖帽的试管内，或将塑料试管用酒精灯封死，防止样品流出。试管上标明姓名、时间、编号，将试管放入专门带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理，在所放试管周围上下垫有软性物质，以免碰碎，容器外标有HIV检测专用字样和生物危害标志。路途较远或气候炎热时，容器应置于4?以下运送。这样同时附送检单。 3.3样品登记和处理 3.3.1收到样品后，及时填写标本登记记录表，送样人、收样人签字，如已进行过初检，登记初检结果和实验方法及所用试剂情况。 3.3.2对从其他实验室送来的样品，检查并注明送检单与标本记录的符合、样品管破损、溢漏等情况。如有溢漏应立即将尚存的血样移出，并对管壁和盛器消毒。检查并记录样品的质量有无严重溶血、细菌污染、血脂过多以及黄疸等情况。 3.3.3对实验室自采的样品，最好将血液先放置1-2个小时，再用3000 离心15分钟，吸出上清液备用，如在几天内检测可放在2-8?冰箱中，如要贮存，置于-20?冰箱。 3.4实验准备 3.4.1将试剂从冰箱中取出，按试剂盒要求时间恢复室温。 3.4.2检查并记录冰箱、温箱温度。 3.4.3按照试剂盒要求准备实验原始记录表，标明空白、阴性对照、阳性对照、外部质控血清以及检测样本的位置:登记日期和实验起止时间，记录环境条件及试剂盒厂家、批号、效期:整个实验过程中每一步操作都要在原始记录表上详细登记。 25 3.4.4按照试剂盒的要求配置洗液及其他所需要的试剂。 3.5加样和稀释 根据样品数量将合适数量的酶标板条固定在板架上，为了不损坏洗扳机，每道上的酶标板条必须保持完整{不足部分可用废弃的微孔添充}，检查加样器加样刻度是否与试剂盒要求的加样量相符，按照原始记录表表明的位置加入各种质控品和检测样品，注意:空白只加标本稀释液。加样量和稀释度严格按照试剂盒说明书规定的操作，一般先加样品稀释液后再加入样品。加样要准确，小心不要使吸头碰着酶标板空上是包被抗原。为保证加样的准确，最好使用多孔道加样器，使用时注意防止吸头间的交叉污染。 3.6温育 贴好封板膜，按照试剂盒要求的温度和时间进行温育，最好选择湿育方法。 3.7洗板 开启洗板机前，先检查洗板机废液瓶是否已排空，开启后先用蒸馏水冲洗管道，再换上洗液瓶。按照试剂盒的要求，选择、修改洗扳方式、洗涤次数和浸泡时间，根据所用酶标板的条数确定洗板道数，根据酶标板的位置调节洗头的位置，然后开始洗板，洗板结束后用蒸馏水冲洗管道。 3.8加酶结合物对于二步法ELISA实验需加酶结合物，按试剂盒要求完成。 3.9加底物洗好板后应立即加底物，需加自配的底物应现配现用。 3.10终止反应 在规定的时间内用试剂盒中的或根据要求自行配置的终止液终止反应。 3.11酶标仪读物 按照试剂盒的要求选择滤光片，确定空白孔位置，选择合适达的打印报告格式，读数并打印结果。 3.12所用仪器在使用后及时填写使用记录。 3.13结果判断计算 3.13.1根据试剂盒说明书要求的阴阳对照OD值范围判断实验的准确性，阴阳性对照OD值在范围之内，试验方可成立，超出范围，试验失败，整个实验重做。 3.13.2在指控图上标出外部指控血清的S/CO值，判断实验结果是否被接受。 3.13.3以上两个条件俊被接受后，根据试剂盒要求计算cutoff值。小于cutoff值的标本为阴性，大于或等于cutoff值得标本为阳性，在cutoff?10%的标本为灰色带反应。阳性及灰色反应区标本，用原有的试剂盒另一种试剂重复试验。 3.14 结果登记和报告 将试验结果登记在级路标和标本试剂表上，将OD值打印结果贴在原始记录表上，检查原始记录表是否填写完整，操作者，复核者签字。阴性结果出具HIV抗体筛查报考，阴性结果填写HIV抗体筛查阳性送检单。 26 3.15标本留存转送 阴性标本收集血清冷冻保存一年。并填写阴性血清保存记录表，阳性标本收集血清封口包好，冷藏运送送确认实验室。 4. 支持性文件 全国艾滋病监测工作规范 艾滋病实验室安全操作及防护措施 27