小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原PIA的克隆与表达

小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原PIA的克隆与 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达 小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原PIA的克隆 与表达 )一I 第22卷第lO期 2000年l0月A(l'AACADEMlAEM蜘儿(lNAE MI1ITARISJFIAE @h)I22.?JlO Oct.2XDO949 文章编号:10(30—5404(2OOO)113-0949—05 小鼠肥大细胞瘤P815特异抗原P1A的克隆与表达 论着 22 3o-st — . 三兰,唐艳.邹丽云.万瑛,赵建平【第王军医大学基础医学部全免疫学研究所.蕈庆400038) 提要:目的克隆小鼠肥大细胞瘤t'815细胞株的P1A基冈以制备肿埔DNA疫苗办法用R1-FY;R 方法制备PIA基因,以哺乳细胞高效表达质粒1.1?为载体.构建重组DN4疫苗重组件用克隆位点上游 和下游的T7和T3启动子序列为删序引物.片】动删序仪测序鉴定克隆的止确性再将鉴定过的重组质牲 用磷酸钙法转化293细胞,用RT-PCR法整定转化细胞中PIA基因的表达结粜正确掏建rPlA/t,CIr--m 重组质粒.并且在转化此质粒的293细胞中捡删出丁PIA的表达.结论成功地掏建 了重组PI^,T一'肿 瘤疫苗.可以进行下一步的肿瘤动物模型的疫茼接种及疗效观察 关键词:P1A: 中图法分类号 pCl-neo;RT-PCR:克隆;肥大细胞瘤 R3921I:R394.2:R730262 『)f4 文献标识码:A 萄 CloningandexpressionofspecificantigenP1Aofmousemastocytomacellline P815 NIBing,WUYu-zhang,TANGYan,ZHOULi—vun.WANYing.ZHAOJian— pinglInstituteoflmmutm[ogyP1A.ThirdMilitmy Me~cMUniversity,Chongqit~g400038.China) Abst3"act:ObjectiveTocloneP1AgenefrommousemastocytomacellstrainP815fnrthepmduc— donof1]JJ1]OrDNAvaccine.MethodsPIAgenewaspreparedt}IRT-PCRandthenligatedwiththe vectorpCI— FteowhichhavinghighefficientexpressioninmammalstoconstructarecombinantDNAvac— clne.TherecombinantWaSsequencedbyautomaticsequencerwithpmmotersT7inupstremnandT3in downstreamassecp~encingprimers.Aftertheidentifiedmeombi,mntplasmidsweretransfo,rnedintocell 293w油Ca](PO,)2,theexpressionsofP1AinthecellsweredeterminedwithRT— F'CRResultsThe recombinantP1A/pCI一 [1eoplasmidW"dl~constructedsuecesdullyandtheexpressionofP1Agenecouldbe detectedin山 etrmlsformed293cells.ConclusionOurexperimentslndicatethattherecombinantP1A/ pci-ileOtumorDNAvaccinecanbeconstructedsuccessfullywhichcouldbeusedfnrthestudi esoftumor animalmodel Keywords:P1A;p~l-neo;RT-PCR:clone 近年来,随着肿瘤抗原鉴定方法学的进展,越来越 多的肿瘤抗原在分子水平得以鉴定,其中,CT抗原 (Cancer-testisantigens)由于在多种肿瘤组织中分布,更 有希望发展出适用范围较广的肿瘤疫苗,故而倍受关 注.小鼠肥大细胞瘤P815是应用较为广泛的一种肿 瘤模型,该肿瘤模型已鉴定出至少5种不同的肿瘤 基金项目:国家自然科学基金资助项目(39700132) 作者简介:倪兵(1968一).男.湖北省黄梅县人,博士研究牛.讲 师.主要从事肿瘤DNA疫苗方面的研究电话:(023) 68752236 收稿日期:2(3(D-08~4:修回日期:2000-09.2I 抗原(P815A,B,C,D,E),其中P1A肿瘤抗原基因编码 的CTL表位目前已鉴定出,这种表位是一个九肽,即 P815AB(30,43),含两个CTL表位(H一2L'').另外.最 近几年DNA疫苗的发展也取得了很大的发展,其中不 乏肿瘤DNA疫苗,这些疫苗在一些动物模型中取得r 令人鼓舞的结果因此,本研究拟以哺乳细胞高表 达质粒pC1.neo为载体,用RT—PCR从小鼠肥大细胞瘤 P815细胞株中制备P1A基因.再构建PIA—pcI重组质 粒,以制备含CTL表位的全长小鼠肥大细胞瘤P815 DNA疫苗.期望利用DNA疫苗所表达的质粒主要通 过MHC.1类途径呈递以及P815抗原含有CTL表位的 950第大学第22卷 特性,使专职APCs细胞内抗原提途径将重组DNA 疫苗编码的CTL表位提呈给CTI.~,在小鼠肥』(细胞瘤 P8】5模型中取得良好的肿瘤免疫治疗作用;也期望它 能在共享该抗原的其它肿瘤组织发挥治疗作. 1材料与方法 1.1细胞及细胞培养 PSI5细胞:为DB,~2小鼠米源的肥大细胞瘤系,购于上海 细咆所,采用RPMII640加10%热灭活小牛血清完全培养基.十 37?,5%c孵育箱内常规培养 l2试剂 Tfipure,HiPurePIasmidI~tationKit购rRoche公百J; 4MY,核酸内切酶,连接酶,RNA抑制荆及polyoligo(d1)15及质 粒pCI,购于Pomega公司;Taq酶及其缓冲液购于PF公司. TP购于J海生物工程有限公司,所有引物均为该公司台成 1.3P8I5细胞总A的提取 按购自Roche的Tripure试剂盒的说明书进行操作过程 简述如下:轻轻从培养瓶中倒出培养基,室温F将本试剂直接 打?八培养瓶中吸管吸打数次,裂解液转^一檗而烯离心管 加入氯仿,剧烈振荡15s放置室温2—15mln后,离心使相分 离将水相转人一离心管中.加入异丙醇,颠倒数次彻底混 匀窜温放置5—10rain以利于沉淀形成离心,弃上清加 A了5%乙醇,涡旋洗涤己醇中的RNA沉淀离.弃卜清卒 FRNA沉淀,重悬RA沉淀于I)EPC处理过的无RNA酶水中, ?厦打溶解RNA沉淀.然后于55,6o?中温育lO,t5min紫外 分光光鹱计1测定A,^及其比值,并进行RNA的定岢然 后置一'0?保存备用 l4RT—PCR t4t总I"A与I)0I【1fr)t5退火在EP管中加入3f R,A和3tdp0lv()15(05ff)加水l5f70?10thin: 然后20艘置10m 142逆转录反应PCR々用管中加人退火产物15I,5 AM\'buflbl8jI,dNqP(10tm~ml/t)3.R\Aita]fibitoJttd(40U1. AM3Idl30U),tldH2O10fI42.c放置th 1.43PCRFCR引物根据载体pC1---?和A摹囡f列J_}j DNAS~-序列分析软件进行设计上游lJl物为:5'一c(;(,^ FC4CCCqTIGTGCG~Tf;IL3GATAAG3';下衙引物为:5'一GC- TCTAGAACqqY.3TCC~CATF[CTIT-3'上述黑体带下划线 部分序列分别为EcvRI和XbaI的酶切位点此阿位点Lja一 一上的相应多克隆位点相吻合..在PCR专用管中加人Mb (251tmol/L)310×buffor(无M)5dNIT's(10tmlm[/lj 1,七游弓I物1,下游弓I物1,Taq酶(5U/I,I)0.25, 模板 个人简介word模板免费下载关于员工迟到处罚通告模板康奈尔office模板下载康奈尔 笔记本 模板 下载软件方案模板免费下载 cDNA3山,无棱酸酶ddH2O3675山95变性5mbt:94. 1rtdn;50?.2n:72?.Imin,共35个循环,最后一个循环. 72t延伸IOn.然后置于4终止反应并储存 取部分产物与Marker(加^,Hind?『)于I%琼脂糖凝胶I 电泳.判断PCR产物的大小 1.5pcR产物在pCl上的定向克隆 15t酚,氯仿抽提PCR产物奴50一p(IR产物于EP管 中.酚/氯仿抽提至界面看不到乳白色蛋白质沉淀.冉用氯仿抽 提两次上清加l0tA3mo]/IN~Ae(pH52)和2倍冰冷无水己 醇,冰上沉淀th离心,弃卜清,再用70%已醇洗涤沉淀沉 淀用阿溶解.4保存备用一 1.52载体pcI—n0的扩增及抽提纯化用DMSO法制备高 教感受志大肠杆菌DH5,:t,转化后铺Amp平板,37培养过夜 第2天取一个单克隆小规模培养,用HighPurePlasmM[solaton 鼬t提取质粒用EcoRI和晒n1分别进行酶臼J鉴定.再将监定 过的质粒保存备用 l5.3PCR产物和载体pcI—llef)的Ee,oRI和XbaI双酶切及酶 切产物的电泳同收在t%低熔点琼脂糖上电泳分离PCR 产物,手术刀片切割下相应条带并置于EP管中.65化胶 5rain,冷却至室温.再分别用酚,酚/氯仿氯仿各抽提1次. 再用NH,Ac和冰冷乙醇沉淀DNA片段7(I%己醇洗涤,沉淀 彻底空干,最后用11~溶解,4?保存备用紫外分光把度计上 定量两种双酶切产物量 154连接及连接产物的转化扩增按13(PIApclI的摩 尔比混合,并于】6?反应12h,,置7O?,10min终止反应. 取2产物在1%琼脂糖凝胶上进行电泳鉴定将连接产物转 化感受态DH3aAmp平板筛选取阳性单克降进行扩增,并抽 提出重组PiA—pCI一13el?质粒 15.5重组质粒的鉴定l1)酶切电泳鉴定:重组质粒分别用 EcoRI和/~"oRI/gbaI单积酶切,然看在1%琼脂糖凝胶上电泳 鉴定(2)插八片段及其两侧序列的测序鉴定:烈向删序,上游测 序引物为17启动于(5'.T蜘?,A?u叽GA3'),下游 测序引物为T3启动子(5'一c(?ca一3').抽提 的重组质粒寄送摹康公司进行自动测序 1.6重组质粒转染293细胞 本实验采用磷酸钙法转染293细胞.在6mtt平板中接种 细胞,细胞数量应以第2天产生4o%一6o%汇合为准.=第2天 制备DNA混合物:在1?操作台J向DNA溶液巾加灭菌水至 125,再加125u】05moll[CaCI2在Tc操作台上竖放根 】4m_聚苯乙烯管.加人250,2×HBS,加ADNMCaClz混台 液,混匀,放置20rnin加混台物于平板中,轻轻摇动混匀,置 培养箱中培养.24h后,吸出培养基,用1×PBS洗涤.再加3mI 含C4t8(80o,m1)选择抗生素的新鲜培养基继续培养后 每隔3d换1次含此抗生素的培养基第】3天出现细胞克隆, 然后500t/win离心10min,收集细胞1xPBS洗涤两次,收集 细胞备用 1.7转染重组质粒的293细胞中的P1A基因稳定表 达鉴定 本实验采用RT-PCR法来确定P1A的ndtNA水平稳定表 达.按照试剂使用说明,用Tripure试剂盒抽提已转化的293 细胞总RNA为了纯化RNA.在Tripure试剂所提取的总RNA 溶液中加人尤RNA酶的DNasel,终浓度为2麒/m1.37?保温 砷min以消化DNA分子:然后.再进行逆转录反应和PCR扩 增所用引物为:AB375(5AA哪3'1及 AB376(5'一TCTI'Cq~.;GGCTITGCAAC3V,C-3');对照~-aetinI物为 Bt,k'7(5'一((rIWA?ACCGAlr_3')和BI髓【5'At,CCUI 10纠伽兵等小阻肥人细胞j茸嘲I5特蚌抗PIA的克隆与表达951 (;CF(i(XTI'C4AC一3')pcR反条件为:蛆?5…ni预变性. 94Imin.652rttin,72?3川in,35个嘏,,最后个衙 72?延伸10rnin扩增完毕.取部分产物进行【2%檗阿烯酰 胺凝胶电泳.然后用05fmIEB染色3(1min确认f=】【】,A 条带为进一步证实PCR增一:物婚丁PlA幂冈.心软琼脂 回收PI'R产物,送基康公测序 2结果 2.1质粒pC1.Heo的转化,抽提,扩增,酶切及低熔.点 琼脂糖凝胶回收结果 将质粒用I,肼?I,胁ldBclmHI,I/磕,1分别 进行单,双酶切后,1%琼脂糖电泳的结果均与理论值相符. 单酶切后均为一条带,双酶切后均为曲条带且3h的酶切J3,~lhJ 足够.未见任何杂带,证明质粒本身丁佧常.内切酶完全可以 切开质粒日R?肼.I双酶切物算低熔点琼脂糖凝胶电泳 收后.琼脂特【乜泳可见明显目标条带紫外分光光度计洲定结 果为:,瑚为I78:浓度为O.945,ml, 22P8l5细胞PlA基因的RPCR结果 Tripure试剂盒抽提的总RNA紫外分光洲定蛳为0【研 . 4280为0015.^川"洲为21.RNA纯度高浓度为0375,ug/ mLRT-PCR产物绎1%琼脂糖凝胺电泳后.可见清楚的75I 的P1A条带和对照的I?-~'tin条惜.P1A条带的大小j理论值完 全样.见图1 23 23130}In 94161) 6557h【? 436Ihn 2322bD 2027bD 564bp 图1PcR产物的1%琼脂糖凝胶的电溶结果 Hg1Result0fPCRpJlIlctin1%ageldec打叩Il0懈 I:~actin;2:PCRpn~]etofPIA:3:Marker(M)NMHind『n1 2.3定向克隆结果 231蕈组质粒筛选鉴定及萝组质粒酶叼鉴定坫果由于 质粒厦PIAPCR产物消化很彻底,且克隆所使用的内叼酶为两 个不同的酶.所最后在Mnp乎板上可分布均匀,形态大小 均n々ljH单克隆细菌:对照平顿}未虼仃何茼落『K挑 取性单克隆菌落,扩增后用]tighPure质粒提取试剂盒提取质 粒.用E,'oRI和oRI/姗nI,双酶切,所挑选的5个菌落的 质粒酶坷后琼脂糖凝腔电泳显示质粒已完切开,呈一条(go. 酶切)或阿条带(烈酶印jLL载体的位置,pl的I酶切 物位置'致;插人片段条带与PIAPCR产物的他置一致另外 利用卒载体作相应的对照从结果可以肴,管是酶切的和 未酶切的重组质粘的分子量均高于载体连接物的电泳结果 也显小有大j线性空载体的条带一这些结果表明克隆已基本 成功,见2…3 图2重组质粒EcoRItJ6~I双酶切在1%琼脂糖凝 胶上的电泳结果 Fig2Restrictionmapp~ofreoDmbiImtpIasnfiddi— gestedbyEcoRI/XbaIandseparatedon1% agarose 1:Marker(XDNA/Hind?):2:Li,~em-pC1(kk.oR1): 3:PCRproductofPIA:4,8:15r~luctofreo3mbinantplas— middigestedI)v)l/肼?l 23456789【011I2I3 图3重组质粒对照酶切图谱 Fig3CmltrOlrestrictionmapofrecombinantplasm~ 1.9:Mmker(N肼II1);2.3:pC1;4.5:re*ombirtant; 6:lAnem-pCI(如)1):7.8:]Snpm-t'e,cmnfi3itmntpl~mid (11:10:P1APCRprcxtuct;L1.12:Digestedproduct otrecam[finanltvRl,XbaJ):13:Pr~htcloflig'alion 952 232质粒洲结质提取l奇送公rU 世"删l.采用克降位点f:晰的T7;动f序列段卜游的 功f『州作为测序jl物进fr驳序.删结与沦伉充 弛 14转染后的293细胞P】A表达结暴 磷限钙法转染后,293蛐胞牛K阻?ll述方,进{r l{I'I{CRji,.1=J{产物?】!曙策阿烯酰胺凝胶l电小然川 05~tglmlrB水溶液染色?l粜图4;I'CHl'物仍奇送小蛰 r d进l动删l,删序结朱jt;enebank(NMorr635)I1I材】1..州 制1啊台 498J1n一+ 33lI】D— 242h一 图4PCR产物12%聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 Fig4ResultofPCRpr~luctana1)7~dby12% polyacrylamidegelelectrophoresis {:MarkeJ;2:PCRI)Mi;3:?Itht 3讨论 1957年,Dumn等首先用化学致癌剂甲基胆总在 I)BA/2系小鼠体内诱发产生P815系,其后该瘤系成 为肿瘤免疫学领域常用的模型之_?131980年以来, Bn主持的比利时Ludwig癌症研究所基于该肿瘤模 型做了较为出色和系统的肿瘤免疫学研究一他们先后 实P8l5瘤系至少存在5种可被应CI'L克隆识别 的肿宿抗原(P815A,B,C,D,E).并鉴定出这些肿瘤抗 的编码基因P1A是目前已知小鼠肿瘤抗原中仅有 的一个与人类肿瘤抗原MAGE基因家族表达相似的刖 瘤抗原基因该抗原是一个由异常激活的PlA基 编码的九肽(35—43),其序列为LPYII;WLVF(H.2L'.), 其中也含P'815A和P815B个CTL表位,町同时被抗 1)};15A和抗P815B的CTI克隆识别但在某些肿瘤突 变株,P1A基因发生点突变.使九肽中第42位缬氨酸 变为丙氨酸,则该表位仅可被抗PS15B的CTL克降识 别现已证明,PlA基可在肥大细胞瘤P8l5,浆细 胞瘤J558,纤维肉瘤Met]~A等多种小鼠肿瘤中表达,而 在常组织中仅出现于辛丸,胎盘;存两荇q,lJl^ 摹嗣仅出现于丸MHC分子表达的精原细胞和滋养层 细胞,因而会被相应CFL所识别由于PlA基因表 达分布与人类肿瘤抗原MAGI;;,GAGE,BAGE等基因家 族相似,故而近年来对P815AB抗原的研究较为广泛, 井成为一种设汁和研究各种肿瘤疫苗 方案 气瓶 现场处置方案 .pdf气瓶 现场处置方案 .doc见习基地管理方案.doc关于群访事件的化解方案建筑工地扬尘治理专项方案下载 的理想模 型另外,强有效的免疫策略对一些疾病如感染性 疾病和肿瘤等足迫切需要的.而传统传播途径和分子 免疫途径到目前为止并没有取得太大的成功.最近关 于不同T细胞亚群的作用的研究使得解决这问题有 r一个电加合理的途径.现在已知,对多种感r}簇 病特别是病毒感染如HIV(Humaninmmnodeficiencvvir, US)的感染以及肿省的防治需要产生强有力的细胞介 导的免疫反应(Cell—mediatedirmnunitv,CMI).CMI反 应一般由CD8细胞毒性T淋巴细胞(Cytoto~cTlvm. phoeyte,CTL)和Thl表型的CIM辅助T细胞(The. el"._rh)所介导.两者各自表现出各种不同的功能效应. 能产生强大的CMI的疫苗现在被认为控制许多疾 病包括HW的感染和肿瘤方面有着美好的前景 在这方商.DNA疫苗相对于以前的免疫策略有着 强人的优势:(1)易操作性和稳定性;(2)在体内持 续表达,持续刺激免疫系统;(3)除了产生强有力T细 胞免疫之外.体液免疫功能也较强,并且是抗原特异的 中和抗体;(4)可方便地制备出多价DNA疫苗;【5) DNA疫苗在机体内所表达的蛋白将以天然蛋白形式 出现;(6)当在质粒中整合人CKs(Q~okines)或共刺激 分子基因,或与编码这一成分的质粒共注射时,将能加 强随后机体对编码抗原的反应.或可调节正在起作用 的免疫反应;(7)DNA疫苗风险小.既不会感染,目前 也尚未发现其与宿主基因组的整合.DNA疫苗接种 后,将直接转染体细胞和专职APCs,并町通过交叉激 活途径激活CTLs DNA疫苗本身也是一个非常强的Thl型佐剂 这对于需要强有力细胞免疫的疾病来说是非常必要 的.冈此,本研究构建了P1I=lcI—neo重组DNA疫苗, 并证实了其在哺乳细胞293中可以较好地表达,从而 为下一步的相应肿瘤动物模型的体内接种及随后的疗 效观察打下基础.如果这种质粒疫苗免疫动物后能取 得较好的肿瘤生长抑制效果.则是对肿瘤防治的一大 贡献 参考文献 [1]VannndeBJ,v&rtderBmggenPTee1]definedtumor031. ?.J]Curt-Opinlmmunol,1997,9(5):684—693 【2lLetheB,VaH1denndeB,vanIA."Mouselnn~)J— 第22卷第Jt)瑚 2OOO年10J1^(71,AACADEMTAFMFDICIAE 学 MIL胛ARISJRHAE Vol22.NllIt) mt.20o0953 lPc.fionantigensPS15AandI='815B:【wllelfitopescarri~byasin一 出peptidelJJEm"Jlmmuno1t992.22(9):2283—2288 3M~akehPHVaccines,coming订ageatier2?YeaJJMs Mi~"Rev.20OO.2.4(I):9—20 4:郜丽云.吴玉章.贾正才.等小鼠肥大细胞瘤P8I5模型的 建立与初步应用一J]免疫学杂志.200(I16(5):3393AI 5'LeihlerWW,YitH,Restilb,PDNAal1『]|_^_}d 【ines:principles.pro~essam!plv,speets[1j.Vaccines.M],I8 ooo-5404(2o0o)10~0953—0希虢 l9—101:765—777. 【6JtrunathanSKlinmanDMSederRADNAweeines:J[nnlu— nok:~D'.aatmnandoraim~adon[J]AlL『lIJRP]mtrltltlo]. "JD0,I8:927974 [7]Gu/~lafllanS.WuCY.bSsidagBT一DNAvaccines:a keYimtucing[ortg-termcellularimmunityJ.CttrrOpinhn— iklun4Jl20OO,12c41:442—447 1例糖尿病并大疱表皮坏死性药疹的护理 Nursingofadiabeticpatientwithepidermatic 茎三兰,三盟(第三军【岳大学附属西南医院内分泌币斗.重庆4ooo38) 大疱表皮坏死性药疹是药物性皮炎中最严重的种形式 在患有糖尿病的情况下并发大疱表皮坏死性药疹.使病情』Ju 重.增加r护理工作的难度.根据患者的病情,我们制定详细 的护理计划.收到了良好的效果.现将护理体会 报告 软件系统测试报告下载sgs报告如何下载关于路面塌陷情况报告535n,sgs报告怎么下载竣工报告下载 宜u下. 1病例介绍 患者,女.54岁.农民,糖尿病史4年人院前5d因腰痛在 地摊上头草药煎服I剂后,大约2h后出现仝身皮肤瘙痒,逐渐 出现皮肤红斑.并全身蔓延,以腰部,四肢为主,院外对症治疗 无好转转人我院.人院查体.体温363?.脉搏84次/rain.呼 吸J9次/rain意识清楚,精神较差腰背部,臀部,四肢皮1挟可 见大片融台成片的虹斑,其间有大量水泡散在分布,部分破溃. 表面有较多浆液,局部皮肤温度升高,颜面上胸部皮肤正常 实验室 17025实验室iso17025实验室认可实验室检查项目微生物实验室标识重点实验室计划 检查:白细胞109xI,L_中性88%,血钾3.21mrm~UL. 血糖I343retool/L:经抗菌消炎,创面处理,精心护理.16d后 患者痊愈出院 2护理 2.1皮肤护理 皮疹相互融台,破渍是细菌良好的培养基.激素的应用.又 使患者免疫状况极为低下.再加患者本身患有糖尿病,破 渍部位不易愈台.若护理不当极易导致败血症因而加强皮肤 护理,保护皮肤不受损伤或感染是护理成败的关键. 作者筒舟:蔡红卫(1967一).女.浙江省海宁市^.主管护师.发丧讫 文5篇电话:(023)68754o~)了:}()6:} 收稿日期:2O呻.07:恬回日期:2cc(i.(!cl 僦皑劲 necroticepi (编辑汪勤俭) 经验与短篇@ bullosa . 7,So,. 2I.1避免各种不良刺激保持床单干燥柔软,平整,l尢 皱褶,随时清除剥脱的皮痂,皮屑和药痴由于该患者腰背部, 臀部及四肢较重.对此嘱患者取俯卧位.尽量避免或减少创面 受压:勤剪指甲,防止皮肤抓伤 2.I2创面处理严格无菌技术操作,每日用无菌生理盐 水清洗创面.清除痂皮,然后用紫草油,I%龙胆紫溶液厦欧可 欣乳膏均匀地涂于破溃处,刨面处理后采用暴露和远红外线照 射方法交替.减少渗出.促进皮肤干燥结痂 2.I3建立有效的静脉通道.保证激素及抗菌药物的实施: 护理人员应具备娴熟的穿刺技术.在布满疱疹的肢体j选择好 静脉.为减少反复静脉穿刺造成的皮肤损伤,我们采取留置静 脉穿刺钭的办法,一次穿刺保留2,3d穿刺针眼处用小块消 毒纱布覆盖.每日更换纱布并消毒针眼周围皮肤拔输液针头 或换药前,先用生理盐水棉球浸湿胶布后揭去.免去胶布时 损伤皮肤一 2.I4认真观察刚脱皮后的创面有无水肿,渗出,糜烂.尤其 要观察皮肤的破损处有无感染先兆发生 22实行保护性膈离 糖尿病患者机体多种防御功能缺陷.对人侵徽生物的反应 的各阶段都被抑制.从而使患者极易感染.::为防止陵患者发 生各种感染.找们安排患者住单人病房,保持病房清洁.每13用 紫外线灯进行空气消毒.严格控制探视人员.避免交叉感染. 23严密监测血糖 在使用激素的情I兄下.患者血糖较高.餐后及睡前升高 明显,波动在l8—25retool/L之间高血糖使血渗透压升高.抑 制白细胞的吞噬功能,使机体对感染的抵抗力降低.感染义埸 {下转960页) 螺 一尿