实验二 母种培养基制作一、实验目的 掌握斜面试管培养基的配制、消毒与灭菌等制作过程，为菌种转管、组织分离制作母种打下基础。二、常用培养基配方1．马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升，pH自然。2.PDA综合培养基去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾3.0克，硫酸镁1.5克，维生素B10.05克，水1000毫升，pH自然。三、实验材料和用具天平、电炉，18×180毫米试管，止水夹。纱布，棉塞，牛皮纸，皮筋，手套、菜板、刀、恒温箱，三角漏斗、支架（每组一套）。手提式高压灭菌锅。马铃薯、葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁、琼脂等。四、实验步骤与方法1．PDA培养基的配制2．装管、捆把3．灭菌锅内加适量水→灭菌物品放内锅→ 加热→压力表0.05Pa时放气→压力表1.15Pa(121-126℃)时计时30分钟。4.摆斜面。灭菌后将试管取出斜放在一根1厘米左右厚的木板条上，使试管内斜面的长度为试管长度的3／5。放置凝固后备用。五、作业思考题1．制作PDA培养基过程中，为什么要用牛皮纸将整捆的棉塞部分封盖灭菌?2．灭菌时，加热水沸后，在锅内压力升至0.5Pa时，为什么要打开放气阀?3．写出试管培养基制作的工艺
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。4．消毒与灭菌是同一概念吗?为什么?实验三 原种培养基制作原种即二级种，就是将试管中的母种，接入菌种瓶内，等菌丝长满后形成的菌种。一、实验目的通过实验初步掌握原种培养基的配料、装瓶(袋)、灭菌、消毒、接种、培养等生产工艺流程。并了解原种培养基的不同配方及不同的制作方法。二、实验材料和用具天平，立式或卧式高压灭菌锅，菌种瓶或菌种袋(菌种瓶口径3厘米，容积750毫升)，塑料套环，塑料绳，擦布，锥形捣木。称，大盆麦粒，麦麸，棉籽壳，不锈钢锅，石膏，碳酸钙，白糖，牛皮纸，皮筋，三、培养基配方1．木屑米糠培养基(适用于香菇、木耳、猴头菇、杨树菇等木腐生类食用菌)：木屑(锯木屑)78千克，米糠或麦麸20千克，石膏1千克，蔗糖(俗称白糖)1千克。料水比为1：1．4～1．6，使含水量达到60%，即用手握抓材料时指缝现水而不滴水。2．麦粒培养基(适用于平菇、草菇、猴头、金针菇等)：麦粒200千克，蔗糖2千克，碳酸钙2千克，水500升。3．棉籽壳培养基(适于多种食用菌)：棉籽壳78%，麦麸10%，玉米粉10%，过磷酸钙1%，白糖l%，水料比约1:1.1-1.2。四、实验步骤与方法1．培养基的配制1)木屑米糠培养基的配制：拌料：根据计划生产原种的数量，计算出各种原料的用量，分别称取后，将不溶性辅料和主料掺拌均匀，将可溶性辅料加入水中溶解，逐渐泼入拌好的主料中，掺拌均匀，继续加水拌料。拌料时，边加水，边测含水量，以便控制水分，不至过多或不足。含水量的测定：拌好料后，用手抓一把培养料在手中紧握，手指缝中有水渗出但不下滴为适宜。料水比约为1:1.2-1.4装瓶（袋）：将培养料装入750毫升的菌种瓶(或500毫升罐头瓶)中，边装边捣实(但不宜过紧，太紧则透气性差，菌丝生长不良)，以手按结实有弹性为宜，一直装到菌种瓶的瓶肩处。打孔：培养料装好后，用锥形木棒从瓶中央向下打一个洞，洞深离瓶底部2～3厘米，这样一是可以增加瓶内氧气；二是有助于菌丝沿着洞穴向下蔓延；三是便于固定菌种块，不致游动而影响成活，有利于瓶下部菌丝生长良好。擦瓶：打洞后，用湿毛巾或湿布多次将瓶口和瓶外粘附的培养料擦净，擦干，以免接种后污染包扎：塞上棉塞，用牛皮纸将瓶口及棉塞包住，用绳扎紧。也可在瓶口上先放一层牛皮纸，再盖一层聚丙烯塑料薄膜，扎紧瓶口。2)棉籽壳培养基的配制：棉籽壳原种培养基的配制方法同木屑培养基的相似，只是装瓶时培养料的压实要比木屑的紧，因棉籽壳颗粒较大，且能留有较多的空隙。3)麦粒培养基的配制：浸料：将小麦粒用水浸4-8小时，煮沸20—30分钟，煮沸的过程中就加入蔗糖。最后使麦粒熟而不开花。滤去水分(滤液可制母种培养基或栽培时拌料用)，摊在通风处晾30—40分钟，使麦粒表皮不湿为宜。装瓶：加入碳酸钙，拌匀后装瓶。装瓶时要注意边装瓶边将瓶轻轻地扣动，使瓶内培养料松紧度上下一致，装至粒面至瓶肩部。瓶口包扎同前。2．灭菌包扎好的料瓶（袋）放入高压灭菌锅内进行灭菌。在1．5千克／平方厘米压力下，灭菌2小时即可。如用土蒸锅常压灭菌，须将水烧开后继续蒸10小时，缓慢降温后取出使用。六、作业思考题1．原种培养基装满瓶后，为什么要用湿毛巾或湿布多次擦洗瓶外和瓶颈?2．原种培养基装好后，为什么要在当天及时进行灭菌?3．原种培养基装瓶后，用锥形捣木在其中内插一个圆洞的目的是什么?4．原种培养基装满瓶后，其瓶的上部培养料是松一些好，还是紧一些好?为什么?5．培养料装得过松过紧都将产生什么样的结果?
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