小鼠脾细胞悬液制备(1)小鼠脾细胞悬液制备一、小鼠眼球取血(眼静脉取血）二、小鼠脾细胞悬液的制备： 1．小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡3分钟，取出小鼠置于无菌纸上，左腹侧朝上；2．在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏；3．在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻,暴露脾脏,用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织,取出脾脏.放入盛有5mlHanks液的培养皿中；4．A:梳刮法：脾脏可用镊子轻轻梳刮，避免将脾脏弄成碎片，将细胞悬液吸入离心管中，自然沉降5分钟，将悬液移至另一离心管中，弃去较大的组织块，离心沉淀细胞...
小鼠脾细胞悬液制备一、小鼠眼球取血(眼静脉取血）二、小鼠脾细胞悬液的制备： 1．小鼠颈椎脱臼处死，75%乙醇浸泡3分钟，取出小鼠置于无菌纸上，左腹侧朝上；2．在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，暴露腹壁，可见红色长条状脾脏；3．在脾脏下侧提起腹膜，剪开后上翻,暴露脾脏,用镊子提起脾脏，眼科剪分离脾脏下面的结缔组织,取出脾脏.放入盛有5mlHanks液的培养皿中；4．A:梳刮法：脾脏可用镊子轻轻梳刮，避免将脾脏弄成碎片，将细胞悬液吸入离心管中，自然沉降5分钟，将悬液移至另一离心管中，弃去较大的组织块，离心沉淀细胞；B：钢网研磨法：将脾脏放置不锈钢网（100或200目）上，用注射器针芯轻轻研压脾脏,获细胞悬液;C：酶消化法：将脾脏用镊子夹碎,加入400u/ml胶原酶(III型）5ml/只脾脏，37度消化20分钟,用尼龙网过滤，得到单细胞悬液。 5、脾脏研磨:轻轻研压（顺同一方向）,用吸管吸取脾细胞悬液，放入试管中.6、镜下细胞计数：40倍镜头,观察脾细胞。7、试取胸腺注：一般6—8周龄小鼠，根据品系不同,可得5—20×107细胞/只。2．手术器械灭菌：术前高压灭菌外,也可将手术器械泡在95％酒精的小容器中，使用前取出器械，在酒精灯上烧灼去除酒精，即可保证无菌，此法较为简便。
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