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紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量

紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量一、实验目的1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法；2.熟练紫外-可见分光光度计的操作。二、实验原理维生素C（VC）是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构，分D和L两种立体构型，但只有L型有生理功效。维生素C具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互变,两者均具有生物活性(结构式见图1),其C2和C3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出H,故维生素C虽然不含自由羧基，仍具有有机酸的性质。维生素C呈无色无臭的片状结晶体,易溶于水,不溶于脂。在酸...

紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量一、实验目的1.学习利用紫外吸收光谱测定物质含量的原理和方法；2.熟练紫外-可见分光光度计的操作。二、实验原理维生素C（VC）是一种酸性己糖衍生物，具有烯醇式己糖内酯立体结构，分D和L两种立体构型，但只有L型有生理功效。维生素C具有较强的还原性,在一定条件下氧化型和还原型可以互变,两者均具有生物活性(结构式见图1),其C2和C3位上两个相邻的烯醇式羟基极易解离而释放出H,故维生素C虽然不含自由羧基，仍具有有机酸的性质。维生素C呈无色无臭的片状结晶体,易溶于水,不溶于脂。在酸性环境中稳定,遇空气中氧、热、光、碱性物质,特别是有氧化酶及痕量铜、铁等金属离子存在时可促进其破坏速度。具有π电子的共轭双键化合物、芳香烃化合物等，在紫外光谱区都有强烈吸收，其摩尔吸收系数k可达104-106数量级。利用紫外吸收光谱进行定量分析，要借助朗伯-比尔定律。根据维生素C在稀硫酸溶液（维生素C水溶液在pH5～6之间稳定）中，在245nm波长处有最大吸收的特性，建立了紫外分光光度法测定维生素C片含量的方法。三、实验仪器及试剂实验仪器：容量瓶（100ml、1000ml）、移液管（0.5ml、5ml）、烧杯、紫外分光光度计实验用品：98%浓硫酸（分析纯，1.84g/ml）、维生素C对照品系以原料药经105℃干燥至恒重（含量为99.7%）、维生素C片（2片）、去离子水四、实验步骤1.0.005mol·L-1硫酸溶液的配制用0.5ml移液管移取0.27ml98%浓硫酸放入事先已盛有蒸馏水的烧杯中，搅拌，冷却至室温后移入1000ml容量瓶，稀释至刻度，待用。2.0.5g·L-1 对照品溶液的配制精密称取105℃干燥至恒重的维生素C对照品50mg置100ml量瓶中，加0.005mol·L-1硫酸溶液制成0.5g·L-1对照品溶液。3.维生素C对照品标准溶液的配制用5ml移液管精密量取0.5g·L-1对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分别置100ml量瓶中，用0.005mol·L-1硫酸溶液稀释至刻度，摇匀，待用。4.测定波长及标准曲线以0.005mol·L-1硫酸溶液为空白，测定维生素C在稀硫酸溶液中最大吸收波长，并在此波长处测定维生素C对照品标准溶液的吸光度，以浓度对吸光度作线性回归。5.样品含量测定取维生素C片2片，精密称定，研细，精密称取适量（0.06g，约相当于维生素C50mg）置100ml容量瓶中，加0.005mol·L-1硫酸溶液适量，超声5min使溶解，再加0.005mol·L-1硫酸溶液至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液2.0ml置100ml量瓶中，加0.005mol·L-1硫酸溶液至刻度，摇匀，在最大吸收波长处测定吸光度。6.空白试验模拟维生素C片处方比例，精密称取辅料适量置100ml量瓶中，与步骤5样品含量测定同法操作，在最大吸收波长处测定吸收度为0。7.回收率试验先测得2ml样品溶液的吸光度A1（C1），再取0.0125g/L的VC标液200μl，于2ml已测得吸光度A1的样品溶液中，再测得吸光度A2（C2）。五、实验数据记录及处理1.维生素的吸收波长在紫外可见分光光度计上扫描测定VC标准样品的吸收光谱，结果显示VC在244nm波长处的吸光度值最大。2.维生素C对照品标准曲线标准VC浓度（g/L）0.00250.00500.00750.01000.0125Abs0.12640.26630.40790.54620.6905y=56.3240x-0.0150 R=1.00003.样品中维生素C含量测定样品中VC含量(%)=mVCCVC×50×0.1×100%样品mVC/g0.06000.06000.0580Abs0.54820.54260.5257样品VC浓度（g/L）0.01000.00990.0096样品中VC含量（%）83.3382.5082.76平均值（%）82.86RSD（%）0.51474.回收率试验先测得2ml样品溶液的吸光度A1（C1），再取0.0125g/L的VC标液200μl，于2ml已测得吸光度A1的样品溶液中，再测得吸光度A2（C2）。回收率(%)=加入量(C)总测定值(C2)−本法测定值(C1)×100%123A10.54820.54260.5257C10.01000.00990.0096加入V（0.0125g/L）/mL0.20000.20000.2000A20.60930.60160.5912C20.01110.01090.0108回收率（%）95.4292.21102.32平均回收率（%）96.65RSD（%）5.17六、实验结果及讨论1.维生素C还原性很强，在空气中易被氧化，在酸性介质中氧化作用减慢，水溶液在pH=5～6之间稳定，故本实验选用0.005mol·L-1硫酸溶液（pH=5.2）为溶剂，维生素C稳定性好。2.标准曲线R=1.0000，且测定的未知样品的吸光度均落在标准曲线有效的范围内，实验结果表明，维生素C在0.0025-0.0125g/L范围内与吸光度呈良好的线性关系。3.由于对加标回收率的原理及概念模糊，导致实验在这一环节消耗较多的时间。本实验测得维生素C的平均回收率为96.65%，相对标准偏差为5.17%。4.利用紫外分光光度法测定维生素C片维生素C的含量，该法操作简便，快速，准确，所用试剂价格低廉、易得，适合维生素C片剂含量测定的快速分析。

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