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目：山刺玫茎中二氢槲皮素抗氧化作用研究山刺玫茎中二氢槲皮素抗氧化作用研究学生：指导教师：学院：专业(班级)：1.绪论山刺玫，学名刺玫蔷薇（RosaDavurica)，别名：刺玫果、兴安刺玫，俗名野玫瑰，又称大叶蔷薇，属蔷薇科，蔷薇属。山刺玫适应性强，容易培植，利用价值高，有很好的经济价值。广泛分布于我国东北、华北、内蒙等地，由于东北蕴藏量丰富，近几年颇受关注。山刺玫茎叶中存在大量二氢槲皮素。二氢槲皮素属生物类黄酮，具有很强的生物活性。研究山刺玫茎中二氢槲皮素的抗氧化活性具有重要意义。近年来，人们对于各种人工合成抗氧化剂的安全性问题进行了广泛研究。人们对人工合成抗氧化剂普遍存在不安心理。目前一些化学合成抗氧化剂已限制或暂停使用，所以具有安全性高、抗氧化能力强、无副作用、防腐保鲜等特点的天然食品抗氧化剂日益受到重视。山刺玫作为一种野生的经济作物，对其的开发仅局限于山刺玫的花、果及种子的利用，而山刺玫的茎往往因得不到有效利用而将其废弃。鉴于山刺玫茎中含有丰富二氢槲皮素及二氢槲皮素的优良生物活性，本文即研究山刺玫茎中二氢槲皮的抗氧化效果，以增加山刺玫茎中二氢槲皮素的应用范围，提高山刺玫的利用率。原料与试剂：二氢槲皮素粗提物二氢槲皮素精提物抗坏血酸乙醇甲醇水杨酸硫酸亚铁三氯乙酸冰醋酸DPPH2―硫代巴比妥酸卵磷脂双氧水（30%过氧化氢）总抗氧化能力（T-AOC）试剂盒仪器与设备：电子天平FA2004电子天平SHB-3循环水多用真空泵RE-52A旋转蒸发仪TDL-5台式离心机722型可见分光光度计电热恒温股份干燥箱SWB-2000水浴恒温摇床DK-98-I型电子恒温水浴锅二氢槲皮素的制备山刺玫茎→干燥→粉碎（过80目筛）→乙醇浸提→抽滤→加盐酸水解得二氢槲皮素的乙醇粗提物，显色后测吸光度，由二氢槲皮素
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计算提取的二氢槲皮素浓度。将提取后的二氢槲皮素粗提物使用真空旋转蒸发仪浓缩，将浓缩后的提取物使用D4020大孔树脂，70%乙醇溶液洗脱得二氢槲皮素精提物。采用的抗氧化评价方法试验方法反应体系中依次加入FeSO4溶液3mL，H2O2溶液3mL，摇匀，加入水杨酸溶液3.5mL，摇匀，于37℃水浴中恒温15min，取出后在510nm处测其吸光值A0。然后加入一定浓度被测液0.5mL，摇匀，37℃水浴继续加热15min，取出再测其在510nm出吸光度Ax。平行三次。试验结果以清除率
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示：·OH清除率（%）=式中：A0——空白对照吸光度；Ax——加入被测液后吸光度。试验方法标准曲线的绘制准确称取1，1-二苯代苦味酰基（1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl）DPPH标准品5mg，用甲醇定溶至100mL。得浓度为0.5mg/mL的母液，再用甲醇稀释成0.002、0.004、0.006、0.008、0.010、0.020、0.030、0.040mg/mL的溶液，用722型分光光度计于517nm处分别测定吸光度，制作标准曲线。样品抗氧化活性测定将配制好的DPPH·甲醇溶液于517nm处测吸光度，参照标准曲线得DPPH·甲醇溶液的标准浓度。取一系列不同浓度待测样品的甲醇溶液0.2mL，加入7.8mL浓度为0.025mg/mLDPPH·甲醇溶液，立即混匀，于暗处放置30min，取出在517nm处测吸光度。平行三次。试验方法取3.6mL卵磷脂溶液，加入0.4mL待测液，之后加入0.4mLFeSO4溶液催化氧化反应，混合后置于恒温水浴摇床上，37℃避光保温1h，然后加入1mL三氯乙酸溶液，再加入1mLTBA，摇匀后沸水浴15min，迅速冷却，以5000r/min转速离心10min，取上清液在535nm处测吸光度Ax。空白管以蒸馏水代替待测样，操作方法同样品管，测得空白管的吸光度A0。平行三次。试验结果以抑制率表示抑制率（%）=式中：A0——空白对照吸光度；Ax——加入被测液后吸光度。试验方法操作表对照管测定管试剂一（mL）1.01.0待测样本（mL）0.1试剂二（mL）2.02.0试剂三应用液（mL）0.50.5充分混匀，37℃水浴30min试剂四（mL）0.10.1待测样本（mL）0.1充分混匀，放置10min，蒸馏水调零，520nm处测各管吸光度清除羟自由基试验结果清除DPPH自由基试验结果对脂质过氧化抑制作用试验结果总抗氧化能力测定试验结果
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