白细胞计数和分类
目的：掌握血涂片制备的操作要领、瑞氏染色方法、正常外周血五种白细胞形态特点、
原理：各种白细胞必须经过染色，才易于区分其类别。常用者为瑞氏（Wright’s）染色法和姬姆萨(Giemsa)染色法。测定外周血液中各种白细胞的相对比值，以观察其数量、形态和质量变化，通过显微镜观察染色血涂片，计算血液中各类白细胞的百分率，称为白细胞分类计数。利用白细胞总数和各类白细胞的百分率，即可计算每mm3血液中各类白细胞的绝对值。
实验器材： 香柏油、盖玻片、推片、采血针或注射器、小滴管、消毒棉球、瑞氏染液、pH6.4~6.8磷酸盐缓冲液、蒸馏水、计数板及专用盖片、针 1ml刻度移液管、1ml EP管、光学显微镜。20ul刻度移液管、推片
实验步骤
白细胞分类
1．血片制作：
取一滴血，滴于洁净无油脂的玻片一端。左手持玻片，右手再取边缘光滑的另一玻片作为推片。将推片边缘置于血滴前方，然后向后拉，当与血滴接触后，血即均匀附在二玻片之间。此后以二玻片约呈30—45度的角度平稳地向前推至玻片另一端。推时角度要一致，用力应均匀，即推出均匀的血膜（血膜不可过厚、过薄）。将制好的血涂片晾干，不可加热。
注：（1）良好涂片
标准
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：
１) 呈头、体、尾舌形
２) 血膜厚薄适宜
３) 两边留有空隙
（2）涂片好坏与下列因素有关：
1）血滴大小
2）推片与玻片之间角度
3）推片速度
2、血涂片的染色步骤：
（1）用蜡笔在血膜两端各划一道线，以免染料外溢，置涂片于染色架上。
（2）滴加瑞氏染液，共计七八滴数，以盖满血膜为度，静置1分钟。
（3）再滴加等量的磷酸缓冲盐溶液，轻轻摇动，并轻吹液体使染色液与缓冲液混合均匀，静置15分钟。
（4）用清水冲洗。切勿先倾去染液再冲洗，否则沉淀物附于血膜上不宜出去。冲洗后斜置血涂片于空气中干燥。或先用滤纸吸取水分迅速干燥，即可镜检。
3、白细胞分类计数：先用低倍镜检查涂片及染色是否均匀。然后加一滴香柏油于血膜厚薄均匀处（一般在体尾交界处），在油镜下由此处开始按其形态特征进行分类计数，计数移动时避免重复。根据所见到的100个白细胞，记录各种白细胞所占的百分数。
4、各类白细胞的形态特征
嗜中性白粒细胞：圆形，胞浆淡红色，胞浆内有多量紫红色细小颗粒（染色不佳时则看不清楚）。核为蓝紫色。
嗜酸性白细胞：大小、形态与中性白细胞大体相似，唯胞浆内含有粗大的鲜红色颗粒。核多数为两叶。
嗜碱性白细胞：大小、形态与中性白细胞大体相似，但胞浆内含有粗大的深蓝色，常遮盖在核上。核分叶不明显
淋巴细胞：分大小两种，小淋巴细胞圆形，核染成深紫色，圆形或肾形，胞浆很少，常呈一小片月牙状，染成蓝色。大淋巴细胞，核圆形或肾形，胞浆相对较多，染成天蓝色，在胞浆与核之间有淡染带。有时内含少数紫红色大颗粒。
单核细胞： 核染成紫色，其染色质疏松，核形不规则。胞浆较多，染成浅灰蓝色
白细胞计数
加稀释液 用吸管吸取白细胞稀释液0.38ml于小试管中。
吸取血液 用微量吸管吸取新鲜全血或末梢血20ul，擦去管尖外部余血。将吸管插入小试管中白细胞稀释液的底部，轻轻放出血液，并吸取上层白细胞稀释液清洗吸管2-3次
混匀 将试管中血液与稀释液混匀，待细胞悬液完全变为棕褐色
冲池 再次将小试管中的细胞悬液混匀。用滴棒蘸取细胞悬液1滴，充入改良Neubauer计数板的计数池中，室温静置2-3min，待白细胞完全下沉。
计数 在低倍镜下计数四角4个大方格内的白细胞总数
计算 白细胞总数 =4大格白细胞数（N） /4×10 ×20 ×10^6
= N÷ 20 ×10^9/L
注：计数板上下各一个计数池计数区域分为9个大方格，四角的大方格各划分为16个中方格，中央大方格划分为25个中方格。四角的大方格为白细胞计数区，大方格四边压线细胞计左不数右，计上不数下
实验结果
白细胞总数 白细胞=(35+42+39+37) /20*10^9=7.65*10^9/L
中性粒细胞65个,占65% 单核细胞5个,占5%
淋巴细胞:27个,占27% 嗜酸性粒细胞3个,占2%
嗜碱性粒细胞1个,占1%
注意事项
1、.采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。
2、白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10％。
3、按一定顺序移动视野。
4、染色时切勿使染液干涸，否则发生不易去掉的沉淀。
5、水冲洗时间不宜过长，否则会脱色。
6、血涂片不可过厚
思考
题
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1．白细胞核不着色可能是因为操作中那种误差引起的？
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