24免疫诊断第一节Ag或Ab的检测AgAb反应的原理㈠反应的特异性（Specificity）Ag与Ab的结合为非共价的可逆结合一种抗原一般只能与由它刺激所产生的抗体结合，这是抗原抗体结合反应的专一性，即特异性。抗原抗体结合力的大小，常用亲和力（affinity）或亲合力（avidity）来表示。亲和力（affinity）——指抗体分子上一个抗原结合部位与相应的抗原决定基之间的结合强度。亲合力（avidity）——指一个抗体分子与整个抗原之间的结合强度，与抗原决定基的数目相关。一抗——用已知抗原免疫动物所得的抗血清（antiserum）或单抗二抗——用Ig免疫异种动物所得的抗抗体㈡反应的可见性是指抗原抗体特异性结合时，生成结合物的量与反应物的浓度的关系，只有当两者浓度比例适当时，才出现可见反应。Ag或Ab的检测
方法
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凝集反应，agglutination直接凝集：玻片法，如血型鉴定、细菌鉴定试管法，如肥大凝集试验间接凝集：Coombs试验（二）沉淀反应（precipitation）血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等可溶性抗原与相应抗体结合后出现沉淀物的反应。1、单向免疫扩散（singleimmunodiffusion）2、双向免疫扩散（doubleimmunodiffusion）3、免疫电泳（immunoelectrophoresis）4、免疫比浊（immunonephelometry）（三）补体参加的反应补体结合试验溶血空斑试验（四）用标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应1、免疫荧光法（immunofluorescence）（1）直接荧光法（2）间接荧光法2、酶免疫测定（enzymeimmunoassay，EIA）酶联免疫吸附试验（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）（1）双抗体夹心法（2）间接法（3）BAS（biotinavidinsystem）-ELISA固相载体包被抗体+待检抗原+生物素（biotin）标记的抗体+亲和素（avidin）及酶标记的生物素+底物显色（4）酶联免疫斑点法（enzyme-linkedimmunespot，ELISPOT）抗细胞因子的抗体包被固相载体+待检细胞，温育后洗去细胞+酶标抗体+底物显色（5）免疫组化技术（immunohistochemistrytechnique）包括酶免疫组化、免疫金银组化、免疫电镜技术等4、放射免疫测定法（radioimmunoassay，RIA）5、化学发光免疫分析6、免疫印迹法（Westernblotting）分三步：（1）SDS-PAGE（2）电转移（3）固相酶免疫测定第二节免疫细胞的测定一、淋巴细胞的分离与类型鉴定分离：1、用淋巴细胞分层液密度梯度离心法制备外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcell，PBMC），包括淋巴细胞和单核细胞。2、用粘附贴壁法、磁铁吸引法等将淋巴细胞和单核细胞分离3、用E花环沉降法、尼龙毛柱分离法等可将T、B淋巴细胞分离类型鉴定：——检测表面标志1、免疫荧光法——间接免疫荧光法2、磁珠分离法3、流式细胞术（flowcytometry）流式细胞仪（flowcytometer，FCM）GreenFluorescenceIntensityNumberofCellsUnstainedcellsFITC-labeledcellsOneParameterHistogram二、淋巴细胞功能测定（一）T细胞功能测定1、T细胞增殖试验——PHA、ConA作刺激物（1）形态学方法（2）3H-TdR掺入法（3）MTT法2、细胞毒试验（1）51Cr释放法（2）凋亡细胞检查法（如电泳法、流式细胞术等）3、细胞因子检测（1）ELISA——双抗体夹心法、ELISPOT法（2）生物学活性测定法（3）聚合酶链反应（PCR）4、皮肤试验1）特异性抗原皮肤试验如OT试验——将定量旧结核菌素（OT）注射到受试者前臂皮内，24~48h局部红肿硬结，硬结直径大于0.5cm者为阳性。2）PHA皮肤试验将定量PHA注射到受试者前臂皮内，6~16h局部红斑硬结，24~48h达到高峰，硬结直径大于15mm者为阳性。（二）B细胞功能测定1、B细胞增殖试验小鼠——用LSP刺激人——含SPA的金黄色葡萄球菌菌体及固相抗IgM抗体刺激2、抗体形成细胞测定—常用溶血空斑试验（hemolyticplaqueassay）抗体形成细胞+SRBC+补体——肉眼可见的空斑
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