大豆制品中尿素酶活性的两种快速检测法饲料公司酚红法原理酚红指示剂在pH6.4~8.2时由黄变红，大豆制品中所含的尿素酶，在室温下可将尿素水解产生氨。释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红的时间长短来判断尿素酶活性的大小。仪器和试剂2.1粉碎装置粉碎时应不产生强烈发热（如研钵、球磨机）；2.2天平感量0.01g；2.3试管直径18mm，150mm；2.4尿素；2.5酚红试剂1g/L乙醇溶液。测定步骤将试样研细，称取0.02g试样，称准至0.01g，转入试管中。加入0.02g结晶尿素及2滴酚红指示剂，加20~30mL蒸馏水，摇动10s。观察溶液颜色，并记下呈粉红色的时间。尿素酶活性的测定结果
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示1min内呈粉红色为：活性很强；1~5min内呈粉红色为：活性强；5~15min内呈粉红色为：有点活性；15~30min内呈粉红色为：没有活性。注：通常，10min以上不显粉红色或红色的大豆制品，其尿素酶活性即认为合格。时间（min）豆粕尿素酶活性0-10.9以上1-20.9-0.72-30.7-0.53-3.50.5-0.43.5-40.4-0.34-4.50.3-0.254.5-50.25-0.25-60.2-0.156-70.15-0.17-90.1-0.0512无色0饲料公司pH-增值法本法是美国、日本和前苏联等国常用方法。尿素水解释放的氨是碱性的，可使溶液pH值升高。试样反应30min后，与空白溶液的pH之差数，可间接用来表示氨量的多少。仪器设备1.1恒温水浴须能保持温度于30℃±0.5℃；1.2酸度计（pH计）具有玻璃电极、甘汞电极、可测试5mL的溶液。此为一种精密仪器，须装有温度补正器，其敏感度应为±0.02pH单位或更佳。仪器操作及pH值测定均应依照制造商的说明，该pH计应在测定前以
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缓冲液加以校正。1.2试管20mm×150mm并配有橡皮塞。试剂2.1取0.05mol/L磷酸盐缓冲液溶解3.403g磷酸二氢钾（KH2PO4）于约100mL新蒸馏水中，溶解4.335g磷酸氢二钾（K2HPO4）于约100mL的蒸馏水中，然后将此两种溶液合并配成1000mL。其pH值应为7.0，否则应在使用前用强酸碱调整为7.0。依上述方法制备的缓冲液，其有效期在90d内。2.2已加缓冲液的尿素溶液溶解15g尿素于500mL磷酸缓冲液中，加5mL甲苯作为防腐剂以防止细菌生成，依前述方法调整尿素溶液的pH值为7.0。2.3样品的制备尽可能研磨样品为细粉，至少有60%通过试验筛孔径为0.4mm，但勿使温度升高。测定步骤3.1正确称取0.2g（准确至0.002g）样品于试管中，加入10mL已加缓冲液的尿素溶液，加塞混合，然后置于30℃水浴中。在混合操作时试管切勿倒置。3.2空白试验需正确称取0.2g（准确至0.002g）样品于试管中，并加入10mL磷酸盐缓冲液，加塞混合，放置30℃水浴中而制成。上项试验的制备与空白试验的制备须相隔5min，然后每隔5min搅拌试管内容物1次。3.3静置30min后，相隔5min将试验及空白试验的试管自水浴中取出，将上层的液体移入5mL烧杯中，在自水浴中取出刚达5min时，分别测定此种上层液体的pH值。计算试验试管的pH值与空白试管的pH值两者之差异，即为尿素酶活性的指数。本项操作必须小心，以防止各玻璃仪器或电极被沾污，若pH计不能立即表示稳定的pH值时，应加以检查。有时由于大豆可溶成分的附着，会使电解质经过甘汞电极的多孔纤维的流动速度而降低。
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