货号:MS2937规格:100管/48样土壤过氧化氢酶(Solid-CatalaseS-CAT)试剂盒说明
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微量法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义:S-CAT是土壤微生物代谢的重要酶类,在HO清除系统中具有重要作用。22测定原理:HO在240nm下有特征吸收峰,通过测定与土壤反应后溶液在此波长下吸光度的变化,即22可反应S-CAT活性的高低。自备实验用品及仪器:紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板(UV板)和蒸馏水试剂组成和配制:试剂一:液体300mLx1瓶,4©保存;临用前加入29.7mL蒸馏水充分溶解后待用;用不完的试剂4C保存;试剂二:粉剂X1瓶,4©保存;临用前加入1mL蒸馏水充分溶解待用,用不完的试剂4C保存(如出现结晶析出,60©-90©水浴溶解后使用);试剂三:液体3mLx1瓶,4©保存。样品处理:新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。测定步骤:1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至240nm,蒸馏水调零。2、加样
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试剂名称测定管无基质管无土管风干土样(g)0.030.03试剂一(ML)260260蒸馏水("L)26025©振荡培养20min试剂二(mL)101010混匀8000g,25©离心5min,取180uL上清试剂三(mL)202020混匀,240nm处记录各管吸光值A。注意:每个测定管要设一个无基质管,无土管只要做一管。S-CAT活性计算:a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下单位的定义:每天每g风干土样催化1MmolHO降解定义为一个酶活力单位。22计算公式:S-CAT(”mol/d/g)=[(A无土管-A测定管+A无基质管)xV反总子(8xd)x106]+W+T=16.5x(A无土管-A测定管+A无基质管)V反总:反应体系总体积,3x10-4L;£:过氧化氢摩尔消光系数,4.36x104L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;T:反应时间,20min=1/72d;W:样本质量,0.03g。b.用96孔板测定的计算公式如下单位的定义:每天每g风干土样催化1MmolHO降解定义为一个酶活力单位。22计算公式:S-CAT(”mol/d/g)=[(A无土管-A测定管+A无基质管)xV反总子(8xd)x106】*W*T=33x(A无土管—A测定管+A无基质管)V反总:反应体系总体积,3x10-4L;8:过氧化氢摩尔消光系数,4.36x104L/mol/cm;d:96孔板光径,0.5cm;T:反应时间,20min=1/72d;W:样品质量,0.03g。