抗体筛选检查祁新华2012.09.28《临床输血技术规范》明确规定部分病人应做“抗体筛选”检测，第四章第17条：“凡遇以下情况必须按《全国临床检验操作规程》有关规定做抗体筛选试验：1、交叉配血不合的；2、对有输血史、妊娠史或短期内需接受多次输血者。为什么要开展输血前的“抗体筛选”检查1、目前已知红细胞有26个抗原系统（确认21个，如ABO、Rh、MN、LW、MNS、JK等），500多种抗原（确认200多种）。红细胞抗原的多样性决定了抗体的多样性，检测抗A、抗B、抗D（ABO血型、Rh血型）可确保绝大多数病人的输血安全，但仍不能避免因血型不合（ABO、Rh血型以外）而引发的溶血。2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临床医师重视。（理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失、不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L(0.5-1g/dl),保持15-30天。如果输3-4URBC，病人Hb上升不到10g/L，或几天后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要考虑是否有慢性溶血反应存在。）3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情的延误。抗体筛选检查一、什么叫“抗体筛选”检查1、不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B以外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如抗D、抗N、抗M、jk-抗体。2、“抗体筛选”的含义：用具备有临床意义的血型抗原的O型红细胞，检测病人血清（含多种抗体）；如果出现聚集现象，则提示病人有不规则抗体存在，可判为“抗体筛选”阳性。抗体筛选技术要求尽可能多的检测出有临床意义的抗体。尽可能少的检测出无临床意义的抗体。尽可能快的完成抗体检测
方法
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选择：每种方法都有自己的特点，适应于不同范围及情况盐水法：可以用于检测干扰ABO定型的盐水反应活性抗体，如：MN、P血型抗体。但此方法会检查出无临床意义的抗体，如冷凝集素抗－I及抗－IH等，而且会漏检IgG性质的抗体。低离子聚凝胺法（LIP-IAT）：所需试验时间少（3～5分钟）、方法灵敏度高，准确性高，但无法排除无临床意义抗体的干扰。间接抗人球方法：是很灵敏且有效的检测抗体的方法，同时此方法可以有效的避免无临床意义抗体的干扰。缺点：耗时间长，步骤多。试剂抗体筛选用红细胞悬液（1#、2#、3#）试剂红细胞必须含有下列抗原：D,C,E,c,e,M,N,S,s,P1,Lea,Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka,和JkbLIM液、Polybrene及重悬液抗球蛋白血清受检者血清受检者5%红细胞悬液注意事项标本编号清楚！！试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生理盐水或Liss液洗涤后则应该在24小时内使用，否则会因污染、抗原丢失导致试验错误。加血清和红细胞悬液的量必须准确不能多加，少加,以免引起前带和后带效应转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短，以免引起假阳性或假阴性。Polybrene法原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶液中有多个阳离子集团，能中和红细胞
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面的负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞的非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的。当红细胞与血清在低离子介质中孵育，IgG抗体与红细胞上相应抗原结合后，在聚凝胺的作用下发生凝集，凝聚和凝集外表上不能区分，加入枸橼酸钠重悬液后，枸橼酸根的负电荷中和了聚凝胺上的正电荷，使红细胞凝聚现象消失，而真正的凝集不消失。(见图).实验步骤取4支小试管，按表标记及加入相应试剂。1#2#3#自身受检者血清2滴2滴2滴2滴筛选用红细胞悬液1#1滴筛选用红细胞悬液2#1滴筛选用红细胞悬液3#1滴受检者5%红细胞悬液1滴LIM液（12滴）0.6ml0.6ml0.6ml0.6ml混匀后室温静置1分钟。然后各加入Polybrene试剂1滴，混匀后3400rpm离心15秒，轻扣观察有无凝集。向试管中各加入重悬液1滴，轻摇观察凝集是否散开。注意事项标本尽可能不用肝素抗凝血，如果用需要多加1滴聚凝胺。肝素是大分子的阴离子物质,可以中和凝聚胺的阳离子，导致假阴性。在接收标本时，要询问抽血时是否正在输液或者刚输过液，如果有这种情况则要咨询临床医师液体中是否含有止血敏，KCL，VitC，这些药品会干扰聚凝胺的作用导致假阴性，引起事故。加血清量不能多加，否则会提高致敏过程中的离子强度，降低致敏效果。加聚凝胺，只需加1滴，多加可能导致重悬液无法充分解散非特异性凝集，出现假凝集，导致假阳性。看结果：阴性结果---红细胞迅速散开，并在1分钟内完全散开。可在镜下观察。阳性结果---红细胞不完全散开，弱凝集可能在30分钟内明显减弱或消失，因此以立即看的结果为准。转速不能太快或太慢、时间不能过长或过短，以免引起假阳性或假阴性。抗球蛋白试验原理：抗体分子和补体成分都是球蛋白，用这些球蛋白免疫动物使之产生抗体即抗人球蛋白，抗球蛋白试剂可以和致敏在红细胞上的人球蛋白（抗体分子和补体分子）反应，通过架桥作用使致敏红细胞出现凝集。见图抗球蛋白试验抗球蛋白实验步骤1#2#3#自身受检者血清2滴2滴2滴2滴筛选用红细胞悬液1#1滴筛选用红细胞悬液2#1滴筛选用红细胞悬液3#1滴受检者5%红细胞悬液1滴混匀后置37℃水浴30分钟后，用生理盐水洗涤3次（怎么洗）最后1次用吸水纸吸尽盐水，然后加1滴抗球蛋白血清，混匀后以3400rpm离心15秒钟，轻摇，观察结果。结果意义筛选红细胞1、2、3自身红细胞血清中存在的抗体+—同种抗体++自身抗体，或自身抗体和同种抗体同时存在—+自身抗体注意事项必须进行间接抗人球蛋白试验。必须同时作自身抗体的检查，即患者血清与自身红细胞的反应，以识别同种抗体、自身抗体或两者是否都存在。观察水浴箱的温度、血清对细胞的比例准确、反应时间、转速、。观察结果时轻摇试管，以免将弱凝集摇散造成假阴性，引起事故。若抗体筛选时，无论哪一种方法出现阳性反应时，都必须进一步进行抗体特异性的鉴定.(以判断抗体的临床意义并给予配合型血液输注，以预防溶血性输血反应的发生及预测新生儿溶血病等疾病)建议：作抗体筛选试验的时候最好先做抗人球法抗体特异性鉴定（了解）使用谱细胞确定抗体的特异性，谱细胞一般由8-16种含有不同抗原的O型红细胞配套组成，根据谱细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体。实验方法和抗体筛选实验相同二实验原理 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。见下表谢谢
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