实验三细菌的简单染色和革兰氏染色一细菌的简单染色（一）目的要求（二）基本原理（三）实验
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（四）无菌操作过程（五）简单染色操作步骤（一）目的要求学习制染色片技术，学习简单染色的原理。2学习并掌握无菌操作的技术。3掌握简单染色
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、。4巩固显微镜油镜的使用方法。（二）基本原理 细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下
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现为无色透明，不易观察，所以必须进行染色处理，使细胞着色，便于观察。 简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌形态、大小、及排列方式。 染色前一般要将细胞固定，其目的是杀死菌体并使之粘附于玻片上，还可以增强菌体的着色能力。固定有加热法和化学法两种，无论采用何种方法均应维持细胞原有形态。（三）实验材料大肠杆菌（24h培养）斜面菌种枯草杆菌（12h培养）斜面菌种（四）无菌操作过程无菌操作：不让除我们接种的微生物以外其它微生物侵入，同时也不污染环境的技术。（五）简单染色操作步骤1 涂片：载玻片、无菌水、斜面菌种、无菌操作、均匀的薄层2 干燥：3 固定：加热固定4 染色：结晶紫染1min，或石炭酸复红染1min。5 水洗：6干燥：7 镜检：低倍镜观察以确定目标和范围，再换用油镜观察绘图。二细菌的革兰氏染色（一）目的要求（二）基本原理（三）实验材料（四）操作步骤（一）目的要求1学习革兰氏染色原理，理解着色机理。2掌握革兰氏染色的方法，并能正确染色。3学习并掌握无菌操作技术4巩固显微镜油镜的使用方法（二）基本原理革兰氏染色是用于细菌鉴别的一种重要染色方法。它是根据革兰氏阳性细菌、阴性细菌细胞壁结构、组成的不同而使用一系列的染色处理使之差别显色。其染色方法是先将细菌分别用结晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脱色，再经复染剂复染。最终被染成红色的是革兰氏阴性细菌；被染成紫色的是革兰氏阳性细菌。1234？革兰氏染色原理：第一步：结晶紫使菌体着上紫色第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。G+菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。G-菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，蕃红复染后呈红色。（三）实验材料大肠杆菌（24h培养）斜面菌种枯草杆菌（12h培养）斜面菌种（四）操作步骤1 涂片：方法同单染色，然后干燥、固定。2 初染：滴加结晶紫染色1min，后用水冲洗。3 媒染：滴加碘液染色1-2min，后用水冲洗，甩尽残余水4 脱色：用95%乙醇冲洗30秒（需要严格控制时间和浓度），然后立即用水冲洗。5 复染：用石炭酸复红覆盖涂片进行复染，石炭酸复红染1min。水洗，晾干。6 镜检：先用低倍镜观察，后用油镜观察。1234三实验报告1写出简单染色、革兰氏染色的实验目的。2写出简单染色、革兰氏染色的基本原理。3根据实验结果绘出简单染色和革兰氏染色的结果图。菌名：放大倍数：细菌简单染色结果图细菌革兰氏染色结果图要求：标出菌名、颜色、阳性或阴性菌放大倍数：四思考
题
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1如果对一未知菌进行革兰氏染色，如何能确证染色结果正确可靠？2为什么说95%酒精脱色是革兰氏染色的关键步骤？
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