第三章动物细胞
工程
路基工程安全技术交底工程项目施工成本控制工程量增项单年度零星工程技术标正投影法基本原理
制药第三章动物细胞制药第一节概述第二节动物细胞的形态和生理特点第三节生产用动物细胞的要求和获得第四节动物细胞的培养条件和培养基第五节动物细胞培养的基本方法第六节动物细胞培养的方法和操作方式第七节动物细胞生物反应器及其检测控制系统第八节动物细胞产品的纯化方法和质量要求第九节动物细胞制药的前景和展望第一节概述1665年英国物理学家Hooke通过自制的显微镜观察切成薄片的软木时看到死细胞的细胞壁RobertHooke及其制作的显微镜（1）发现细胞和细胞学说创立：Leeuwenhoek真正首次观察到了活细胞荷兰学者安东·范·列文虎克和他的显微镜，以及他绘制的来自人口腔中的细菌Schleiden和Schwann创立了细胞学说◆1838年，M.J.Schleiden发表《植物发生论》◆1839年，M.J.Schwann发表《关于动植物的结构和生长的一致性的显微研究》◆1858年，R.Virchow对细胞学说进行了重要补充①认为细胞是有机体，一切动植物都是由细胞发育而来,并由细胞和细胞产物所构成②每个细胞作为一个相对独立的单位，既有它“自己的”生命,又对与其它细胞共同组成的整体的生命有所助益③新的细胞可以通过老的细胞繁殖产生细胞学说的基本
内容
财务内部控制制度的内容财务内部控制制度的内容人员招聘与配置的内容项目成本控制的内容消防安全演练内容
（2）组织培养或细胞培养：1885年德国人Roux用生理盐水培养鸡胚组织，使之存活数月1897年，Loeb证明从血液和结缔组织中分离得到的细胞可以在血清和血浆中存活1903年，Jolly观察到蝾螈细胞在体外可以进行分裂组织和细胞培养的早期萌芽实验1907年，Harrison成功地在凹玻片的淋巴液内无菌条件下培养了离体的蛙胚神经组织，并观察到神经细胞突起的生长过程，由此开创了现代细胞培养的新纪元原代培养原代培养：用直接从机体获得的细胞进行的培养称为原代培养这种培养过程主要是采用无菌操作的方法，把组织（或器官）从动物体内取出，经酶消化处理，使分散成单个细胞，然后在人工条件下培养，使其不断地生长和繁殖原代培养是建立各种细胞系的第一步原代培养的细胞一般传至10代左右就不易传下去了，细胞生长出现停滞，大部分细胞衰老死亡，但有极少数细胞可以度过“危机”而继续传代下去这些存活的细胞一般又可以顺利地传代40-50代次，并且保持原有的染色体的二倍体数量及接触抑制的行为，很多学者把这种传代细胞成为”细胞株（CellStrain）”一般情况下当细胞株传至50代以后又要出现“危机”，不能在传下去。但如果有部分细胞发生了遗传突变，并带有癌细胞的特点，又有可能在培养条件下无限制地传代下去，这种传代细胞称为“细胞系（CellLine）。细胞系细胞的特点是染色体明显改变，一般呈亚二倍体或非整倍体，失去接触性抑制的细胞，容易传代下去细胞株：从原代培养细胞群中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群，最多能传至40-50代细胞系：从肿瘤组织培养建立的细胞群或培养过程中发生突变或转化的细胞，可无限繁殖动物细胞原代培养过程图传代细胞培养传代细胞培养：离体培养的细胞群体增殖达到一定密度时，细胞的生长和分裂速度就会减慢甚至停止，如不及时分离传代培养，细胞将逐渐衰老死亡传代培养是指:细胞从一个培养瓶以1：2或其他比率转移，接种到另一培养瓶的培养。贴壁培养细胞的传代通常是采用胰蛋白酶消化，把细胞分散成单细胞再传代，而悬浮型生长细胞则用直接传代法或离心法传代（3）细胞工程学时代对细胞进行人工改造及培养以使其为人类服务的时代包括真核细胞的基因重组、导入、扩增和表达的理论和技术，细胞融合的理论和技术，细胞器特别是细胞核移植的理论和技术，染色体改造的理论和技术，转基因动、植物的理论和技术，细胞大量培养的理论和技术，以及产物分离纯化的理论和技术（4）细胞工程以细胞为单位，按人们的意志，应用细胞生物学、分子生物学等理论和技术，有目的地进行精心设计，精心操作，使细胞的某些遗传特性发生改变，从而达到改良或产生新品种的目的，以及使细胞增加或重新获得产生某种特定产物的能力，从而在离体条件下进行大量培养、增殖，并提取出对人类有用的产品细胞工程是细胞水平上的生物工程。细胞工程所使用的技术主要是细胞培养、细胞分化的定向诱导、细胞融合和显微注射等细胞工程与基因工程相结合，前景更为广阔（5）细胞工程制药成为现代制药技术中常用的手段1949年，Enders及同事发表了第一篇关于培养细胞中生长病毒的报道，为以后采用细胞培养技术生产疫苗奠定了基础随着基因工程的发展，人们逐渐地认识到有许多基因产物不能在原核细胞内表达，它们需要经过真核细胞所特有的翻译后修饰过程，以及正确的切割、折叠后，才能具有与天然分子一样的功能和抗原性。这就使得动物细胞一跃成为了重要的宿主细胞，用以生产各种各样的重要生物制品动物细胞培养生产的重要生物制品：疫苗、淋巴因子、纤维蛋白酶原激活剂、单克隆抗体、红细胞生成素、过氧化物歧化酶等这些药品对临床诊断、治疗和预防，包括病毒、癌症、心血管疾病和外伤等疾病的治疗都有着重要的意义。其中有一些已被批准用于临床，成为商品经过几十年的发展至今，动物细胞已成为了生物技术药物最重要的表达或生产系统，这种局面仍会持续并且其所占的比例有逐年增大的趋势从2000年以后FDA批准的生物技术药物来看，动物细胞表达系统更受到FDA和各大制药公司的重视美国FDA在2000年以后批准的创新生物技术药物，用酵母表达的有2种，用大肠杆菌表达的只有4种，而通过动物细胞培养的生物技术产品则有22种美国之所以在生物技术制药领域摇摇领先，最主要的原因就是其动物细胞表达和生产的产品是其生物技术制药的主力军
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