MicroRNA-590-3p调控LRIG1基因表达增强胶质母细胞瘤的抗放射性

MicroRNA-590-3p调控LRIG1基因 表 关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf 达增强胶质母细胞瘤的抗放射性背景和目的相关研究发现MicroRNA(miR)-590可能在肿瘤的发生,发展中起着重要作用。然而至今为止,miR-590在胶质瘤中相关表达及其作用如何还尚不清楚。本研究旨在探索miR-590在人类神经胶质瘤组织和抗放射性的人类胶质母细胞瘤细胞(U251R)中的表达,并且在体外实验中进一步探讨miR-590-3p对U251R放射敏感性的影响及其相关的分子机制。本研究通过RT-qPCR实验检测发现在人类神经胶质瘤组织和抗放射性的人类胶质母细胞瘤细胞中高表达;并且与低级别胶质瘤相比,在高级别胶质瘤中miR-590-3p的表达水平显著增高。进一步通过MTT,细胞克隆以及流式细胞 分析 定性数据统计分析pdf销售业绩分析模板建筑结构震害分析销售进度分析表京东商城竞争战略分析 技术发现:miR-590-3p抑制剂通过抑制细胞增殖,减少细胞集落形成能力和增加细胞凋亡率,增强了U251R细胞的辐射敏感性。荧光素酶报告实验证实富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)是miR-590-3p直接靶向调节基因。此外,本研究发现在胶质瘤细胞U251R中通过敲低LRIG1基因表达从而使得miR-590-3p抑制细胞活力,克隆形成的能力和细胞凋亡速率衰减。总之,本研究首次揭示了miR-590-3p在人脑胶质瘤组织和耐放射人类成胶质细胞瘤细胞中表达上调;miR-590-3p通过直接靶向LRIG1增强了人类胶质细胞瘤细胞的抗辐射能力。这项研究可能提供潜在的治疗策略以防止人脑胶质瘤的抗辐射能力。胶质瘤占所有脑和中枢神经系统肿瘤的30%左右。胶质母细胞瘤是最常见的恶性神经胶质瘤。胶质母细胞瘤患者的中位生存时间仅为4.9个月。胶质母细胞瘤细胞的抗辐射治疗是在人脑胶质瘤的治疗中的一大障碍。因此,探索胶质母细胞瘤细胞的耐辐射疗法的机制,并找出有效的放射增敏剂对于胶质母细胞瘤的治疗是极其重要的。MicroRNAs(miRNAs或miRs)是一类小的,功能性的非编码RNA,大小约为20个核苷酸左右,其主要的作用方式是调控靶向mRNA在转录后水平的表达,从而发挥作用。现在大量的研究 证明 住所证明下载场所使用证明下载诊断证明下载住所证明下载爱问住所证明下载爱问 特定的miRNA在组织中不同的表达,可能起到抑制肿瘤或者促进肿瘤生长的作用,当然在肿瘤的发展过程中包括肿瘤的抗辐射性。人类miR-590家族拥有两个成熟的成员,分别的miR-590-3p和miR-590-5p。相关研究发现miR-590在肿瘤发展中起着潜在作用,包括乳腺癌,子宫颈癌,透明细胞肾细胞癌,和肝细胞癌。然而,到现在为止没有关于miR-590在人脑胶质瘤中的表达和功能的相关报告。在这项研究中,我们首次研究miR-590-3p和miR-590-5p在人脑胶质瘤组织和抗放射性的人类胶质母细胞瘤细胞(U251R)的表达,并且我们通过体外实验检测miR-590-3p对U251R细胞放疗敏感性的影响。此外,本文阐明了miR-590-3p作为新的直接靶标对放射敏感度产生了影响。一、材料和 方法 快递客服问题件处理详细方法山木方法pdf计算方法pdf华与华方法下载八字理论方法下载 1.通过使用microRNA.orgdatabase、theDatabaseonPredicted和PublishedMicroRNAs(miRWalk),我们先前证明了MicroRNA-590-3p(miR-590-3p)与几乎所有被分析过的恶性脑肿瘤具有较强关联性。抗放射性的人脑恶性胶质母细胞瘤U251细胞(U251R)的建立。3.使用实时定量PCR(qRT-PCR)分别检测非瘤脑组织和人类胶质瘤组织标本中miR-590-3p表达情况。4.本研究通过RT-qPCR和免疫印迹分析检验了miR-590-3p,miR-590-5p和LRIG1在抗放射性细胞U251R中的表达。5.通过MTT,集落形成和流式细胞技术检测miR-590-3p对U251R细胞抗放射敏感性的影响。使用westernblot检测LRIG1蛋白表达情况。7.荧光素酶报告实验证明LRIG1是miR-590-3p调节的直接靶标。实验相关数据使用SPSS18.0来进行统计,用均值± 标准 excel标准偏差excel标准偏差函数exl标准差函数国标检验抽样标准表免费下载红头文件格式标准下载 差来表示数据。组与组之间的数据比较采用常规的t检验进行。根据目前统计学标准,认为P值小于0.05时,可以认为两组之间的差异明显,具有统计学差异。二、结果1.miR-590在人脑胶质瘤组织中的表达。在人脑胶质瘤组织中,本研究使用RT-qPCR检验了miR-590-3p和miR-590-5p的表达水平。如图1所示,与正常脑组织相比,在人脑胶质瘤组织中miR-590-3p的mRNA表达水平显著增强。此外,本研究发现在高级别人脑胶质瘤(Ⅲ-Ⅳ级)中,miR-590-3p表达水平比低级别人脑胶质瘤(Ⅰ-Ⅱ级)更高。然而,在正常脑组织与人脑胶质瘤组织之间,miR-590-5p的mRNA表达水平并没有任何差别。抗放射性的人脑恶性胶质母细胞瘤U251细胞(U251R)的建立。实验结果显示:与U251细胞相比,U251R细胞表现出更高的细胞生存能力。集落形成实验的结果证实U251R细胞集落形成能力明显高于U251细胞。此外,U251R细胞比U251细胞细胞凋亡率更低。3.miR-590和LRIG1在U251R细胞中的表达。本研究通过RT-qPCR和免疫印迹分析检验了miR-590-3p,miR-590-5p和LRIG1在抗放射性细胞U251R中的表达。RT-qPCR的分析结果表明,与U251细胞相比,在U251R细胞中miR-590-3p的表达水平显著提高;然而,在U251和U251R细胞之间,miR-590-5p的表达水平没有明显不同。免疫印迹分析的结果证实,与U251细胞相比,在U251R细胞中LRIG1蛋白质的表达水平下调。4.miR-590-3p对U251R细胞抗放射敏感性的影响。为了探讨miR-590-3p对U251R细胞抗放射敏感性的影响,将miR-590-3p抑制剂转染到U251R细胞中,并且细胞在6Gy红外下暴露24h。本研究证实:在转染miR-590-3p抑制剂细胞中,miR-590-3p的mRNA表达水平减少到对照组的15%。MTT检测结果显示,与对照组相比,转染miR-590-3p抑制剂的细胞表现出细胞生存能力显著降低。在转染miR-590-3p抑制剂细胞中,细胞集落形成能力也降低。此外,流式细胞技术检测表明转染miR-590-3p抑制剂细胞显著增加细胞凋亡率。5.LRIG1是miR-590-3p调节的直接靶标。为了揭示miR-590-3p和LRIG1之间的关系,构造了包含野生型或者突变体潜在靶点miR-590-3p的LRIG13′UTR并且将miR-590-3p模拟物转染到HEK293细胞中。荧光素酶报告分析实验结果表明,miR-590-3p模拟物显著降低了野生型LRIG13′UTR的荧光素酶活性,而突变体的LRIG13′UTR荧光素酶活性并不受miR-590-3p模拟物影响。6.LRIG1介导了miR-590-3p对U251R细胞抗放射敏感性的影响。为了探讨LRIG1是否介导了miR-590-3p对U251R细胞抗放射敏感性的影响,LRIG1siRNA被转染到U251R细胞中,从而沉默LRIG1的表达,细胞在6Gy红外暴露24h。实验结果显示在U251R细胞中,miR-590-3p抑制剂显著增加LRIG1蛋白质的表达,但增加LRIG1蛋白的表达量被LRIG1siRNA消除了。同时,LRIG1衰减了miR-590-3p对U251R细胞抗放射敏感性的影响。本研究证实miR-590-3p的抑制降低miR-590-3p的表达从而导致细胞生存能力和集落形成能力下降,细胞凋亡率增加;然而,通过转染LRIG1siRNA,这些影响被消除了。在miR-590-3p抑制剂+任意siRNA组和miR-590-3p抑制剂+LRIG1siRNA组之间,细胞生存能力,集落形成能力和细胞凋亡率明显不同。三、结论在目前的研究中,本研究首先证明了miR-590-3p在人脑胶质瘤组织中高表达,并且在高级别的胶质瘤的表达水平高于低级别胶质瘤。这些数据表明miR-590-3p可能与人脑胶质瘤的发生和发展有着密切的关系。对于大多数的首次诊断为癌症患者来说,放射治疗是必不可少的治疗。直到现在,一些microRNAs已经被证实与人脑胶质瘤细胞的放射疗感性有关,如miR-181a,miR-124,miR-26a等。在我们目前的研究中,我们首先发现与原始胶质母细胞瘤细胞株相比,在抗放射性胶质母细胞瘤细胞株中,miR-590-3p的表达水平明显高于原始胶质母细胞瘤细胞株。然后,为了检验miR-590-3p在胶质母细胞瘤细胞的放疗敏感性的重要作用,我们进行了相应的体外实验研究。我们发现下调miR-590-3p的表达增强了抗放射性胶质母细胞瘤细胞U251R的放疗敏感性,这表现在抑制细胞增殖,降低集落形成能力,增加细胞凋亡率。这些结果表明miR-590-3p减少了胶质母细胞瘤细胞的放疗敏感性。富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)是一种跨膜蛋白,作为一个肿瘤抑制基因存在不同的人类癌细胞中。LRIG1下调与患者的不良预后有关。先前的研究表明,LRIG1在人脑胶质瘤中表达水平经常降低,并且LRIG1的表达水平与人脑胶质瘤的恶性程度有着密切的关系。据报道,LRIG1表达水平的上调抑制了恶性人脑胶质瘤细胞生长并且诱导细胞凋亡。反之,下调LRIG1表达水平可以促进人脑胶质瘤细胞的增殖,同时增强了胶质瘤细胞的侵袭能力。此外,有部分研究表明LRIG1参与人类癌细胞的化疗敏感性的调节。研究证实LRIG1会使人脑胶质瘤细胞对顺铂和替莫唑胺敏感性增加(TMZ)。最近,杨等人表明LRIG1表达水平与人脑胶质母细胞瘤细胞的放疗敏感性有关,并且LRIG1过度表达提高了抗放射性的人脑恶性胶质瘤U251细胞的放疗敏感性。我们发现在抗放射性的人脑胶质母细胞瘤细胞中LRIG1的表达下调,这与之前的研究结果一致。此外,荧光素酶报告分析实验表明LRIG1是miR-590-3p的直接靶标。在U251R细胞中,miR-590-3p抑制对细胞生存能力、集落形成能力和细胞凋亡率的影响可以通过LRIG1的敲低得到减弱。这些结果阐明,LRIG1介导了miR-590-3p对U251R细胞抗放疗敏感性的影响。总之,本研究首先证实在人脑胶质瘤细胞中,miR-590-3p作为一个潜在的抗放射性的靶标,并且LRIG1在介导miR-590-3p对人脑胶质瘤细胞抗放疗敏感性方面有着密切的关系。在人脑胶质瘤中,我们的发现提高了对microRNAs和放疗敏感性之间关系的理解,并可能提供潜在的治疗策略以防止胶质瘤细胞的抗放射性。