Thedocumentwasfinallyrevisedon2021核酸定量与光吸收值260/280；260/230&核酸定量核酸在波长260nm处有最高吸收峰。吸收紫外光的性质是嘌呤环和嘧啶环的共轭双键系统所具有的，所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它们的物质，不论是核苷、核苷酸或核酸都有吸收紫外光的特性。但紫外法不能区分DNA和RNA，只能用来鉴定核酸的纯度和含量。蛋白质由于含有芳香氨基酸，因此也能吸收紫外光。通常蛋白质的吸收高峰在280nm波长处，在260nm处的吸收值公为核酸的十分之一或更低，故核酸样品中蛋白质含量较低时对核酸的紫外测定影响不大。RNA的260nm与280nm吸收的比值在以上；DNA的260nm与280nm吸收的比值则在左右。当样品中蛋白质含量较高时比值即下降。核酸的定量DNA和RNA都有吸收紫外光的性质，它们的吸收高峰在260nm波长处，每种核酸的分子构成不一，因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸，事先要选择对应的系数。如：1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA，37μg/ml的ssDNA，40μg/ml的RNA，30μg/ml的寡核苷酸。测试后的吸光值经过上述系数的换算，从而得出相应的样品浓度，这些由分光光度计内预设的程序执行，因此，测试前选择正确的程序，测试样品的类型，首先测试空白液，然后再测试样品，注意输入样品稀释倍数。如何避免吸光值漂移读数不稳定可能是实验者最头痛的问
题
快递公司问题件快递公司问题件货款处理关于圆的周长面积重点题型关于解方程组的题及答案关于南海问题
。灵敏度越高的仪器，表现出的吸光值漂移越大。事实上，分光光度计的设计原理和工作原理，允许吸光值在一定范围内变化，即仪器有一定的准确度和精确度。核酸本身物化性质溶解核酸的缓冲液的pH值、离子浓度等在测试时，离子浓度太高也会导致读数漂移，因此建议使用pH值一定、离子浓度较低的缓冲液（如TE）可大大稳定读数。核酸的吸光值受pH值和缓冲液离子浓度影响。只有在一定的pH值和低离子浓度的条件下（如10mMTris-HClpH），才能得到精确的
检测
工程第三方检测合同工程防雷检测合同植筋拉拔检测方案传感器技术课后答案检测机构通用要求培训
结果。水的pH值不稳定，可能导致检测误差。一些缓冲液在紫外范围内存在自身吸收，为了确保准确测量，请使用与悬浮或洗脱样品时相同的缓冲液。样品的稀释浓度同样是不可忽视的因素，由于样品中不可避免存在一些细小的颗粒，尤其是核酸样品。这些小颗粒的存在干扰测试效果。为了最大程度减少颗粒对测试结果的影响，要求核酸吸光值至少大于，吸光值最好在A。在此范围内，颗粒的干扰相对较小，结果稳定。从而意味着样品的浓度不能过低，或者过高（超过光度计的测试范围）。操作因素如混合要充分，否则吸光值太低，甚至出现负值；混合液不能存在气泡，空白液无悬浮物，否则读数漂移剧烈；必须使用相同的比色杯测试空白液和样品，否则浓度差异太大；换算系数和样品浓度单位选择一致；不能采用窗口磨损的比色杯；样品的体积必须达到比色杯要求的最小体积等多个操作事项。各波长具体含义及相关问题A260nm是核酸最高吸收峰的吸收波长，最佳测量值的范围为至。如果不在此范围，稀释或浓缩样品，使之在此范围内；如果吸光度小于，检查是否存在操作因素（如移液不准确，样品内有悬浮物等）影响。DNA样品的A260吸光度值是否>。（请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值<）；A280nm,A270nm是蛋白最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA的A260/A280比值为，纯RNA为。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚类物质的污染，需要纯化样品。比值=相当于50％蛋白质/DNA溶液.酚的最大吸收峰在270nm。A230nm是碳水化合物最高吸收峰的吸收波长，比值可进行核酸样品纯度评估：纯DNA和RNA的A260/A230比值为。若比值小于标明样品被碳水化合物（糖类）、盐类或有机溶剂污染，需要纯化样品。A230产生负值主要是由于在很低DNA浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230的负值会被校正。A320nm或A340nm为检测溶液样品的浊度和其他干扰因子。该值应该接近。如果不是，标明溶液中有悬浮物，需要纯化样品。纯样品的A320一般是0。A260/A280和A260/A230是核酸纯度的指示值。纯度好的DNA或RNA，在下A260/A280的比值应该在或。纯净的样品比值大于（DNA）或者（RNA）。如果比值低于或者，表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、盐（胍盐）等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于。当％BSA蛋白质污染时，蛋白污染会导致260和280的数值都下降，其净结果是260/280比值下降，但260/280的比值变化并不显着，正如分子克隆3所说。但蛋白残留会导致230的数值显着上升，显着影响260/230的比值。也就是说，如果RNA样品的260/280＝，260/230＝，那么就应该考虑污染原因不是胍盐残留，而是蛋白残留.酚的最大吸收峰在270。酚的残留会显着的增加230、260和280的数值，同时酚的吸收峰与核酸的吸收峰合并后，最大吸收峰向270方向偏移，也就是说最大吸收峰在270附近。也就是说，如果RNA样品的260/280=1~,260/230=1~，那么污染原因就应该考虑是酚残留。胍盐对RNA样品吸收有显着影响，会在小于230nm处产生大的吸收峰。胍盐残留不会影响260和280的数值，对260/280的比值不会造成大的影响，当然也不影响RNA定量。但胍盐残留对260/230比值具有明显影响。例如本例中260/230的比值小于时，260/280的比值还>2。也就是说，如果RNA样品的260/280>=2，260/230<1，那么污染原因就应该考虑是胍盐残留。其他：用分光光度计测量RNA时，用水而不是用TE缓冲液稀释RNA样品会造成A260/A280比值下降。原因是低离子强度和低pH溶液会增加280nm处的光吸收值。氯仿离心后取上清的时候千万不要贪多，那样就很容易被蛋白污染，所以现在一般取400ul左右。当260/230<1时，只有两种情况。一是胍盐污染，二是蛋白污染。
浙公网安备 33021202002483