白细胞计数实验报告白细胞计数和分类目的：掌握血涂片制备的操作要领、瑞氏染色方法、正常外周血五种白细胞形态特点、原理：各种白细胞必须经过染色，才易于区分其类别。常用者为瑞氏（Wright’s）染色法和姬姆萨(Giemsa)染色法。测定外周血液中各种白细胞的相对比值，以观察其数量、形态和质量变化，通过显微镜观察染色血涂片，计算血液中各类白细胞的百分率，称为白细胞分类计数。利用白细胞总数和各类白细胞的百分率，即可计算每mm3血液中各类白细胞的绝对值。实验器材：香柏油、盖玻片、推片、采血针或注射器、小滴管、消毒棉球、瑞氏染液、pH6.4~6.8磷酸盐缓冲液、蒸馏水、计数板及专用盖片、针1ml刻度移液管、1mlEP管、光学显微镜。20ul刻度移液管、推片实验步骤白细胞分类1．血片制作：取一滴血，滴于洁净无油脂的玻片一端。左手持玻片，右手再取边缘光滑的另一玻片作为推片。将推片边缘置于血滴前方，然后向后拉，当与血滴接触后，血即均匀附在二玻片之间。此后以二玻片约呈30—45度的角度平稳地向前推至玻片另一端。推时角度要一致，用力应均匀，即推出均匀的血膜（血膜不可过厚、过薄）。将制好的血涂片晾干，不可加热。注：（1）良好涂片标准：１)呈头、体、尾舌形２)血膜厚薄适宜３)两边留有空隙（2）涂片好坏与下列因素有关：1）血滴大小2）推片与玻片之间角度3）推片速度2、血涂片的染色步骤：（1）用蜡笔在血膜两端各划一道线，以免染料外溢，置涂片于染色架上。（2）滴加瑞氏染液，共计七八滴数，以盖满血膜为度，静置1分钟。（3）再滴加等量的磷酸缓冲盐溶液，轻轻摇动，并轻吹液体使染色液与缓冲液混合均匀，静置15分钟。（4）用清水冲洗。切勿先倾去染液再冲洗，否则沉淀物附于血膜上不宜出去。冲洗后斜置血涂片于空气中干燥。或先用滤纸吸取水分迅速干燥，即可镜检。3、白细胞分类计数：先用低倍镜检查涂片及染色是否均匀。然后加一不数右，计上不数下实验结果白细胞总数白细胞=(35+42+39+37)/20*10^9=7.65*10^9/L中性粒细胞65个,占65%单核细胞5个,占5%淋巴细胞:27个,占27%嗜酸性粒细胞3个,占2%嗜碱性粒细胞1个,占1%注意事项1、.采血时针刺深度必须适当，不能过度挤压，防止组织液渗入或采血时间太长引起血液凝固。2、白细胞总数在参考范围内，大方格间的细胞数不得相差10个以上，两次重复计数误差不得超过10％。3、按一定顺序移动视野。4、染色时切勿使染液干涸，否则发生不易去掉的沉淀。5、水冲洗时间不宜过长，否则会脱色。6、血涂片不可过厚思考题1．白细胞核不着色可能是因为操作中那种误差引起的？
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