DNA提取完美全血基因组DNA快速提取试剂盒（离心柱型）DNA提取的目的基因组DNA的制备是基因分析的前提构建文库；PCR；SouthernBlots；RFLP；PFGE荧光定量PCR；CGHDNA测序；DNA克隆等掌握基因组DNA提取的基本方法DNA提取的原理独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。器材与试剂无水...
全血基因组DNA快速提取试剂盒（离心柱型）DNA提取的目的基因组DNA的制备是基因分析的前提构建文库；PCR；SouthernBlots；RFLP；PFGE荧光定量PCR；CGHDNA测序；DNA克隆等掌握基因组DNA提取的基本方法DNA提取的原理独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。器材与试剂无水乙醇、灭菌水、恒温水浴箱、1.5ml离心管、常温高速离心机、冰箱、离心管架、移液器、吸头等。DNA提取的步骤破碎细胞提取纯化操作步骤（以200μl全血提取举例）操作前处理：1、第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇!2、此试剂盒中蛋白酶K为冻干粉状，应予以短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解（浓度为20mg/ml），溶解后立即按照每次使用量(20微升)分装冻存，-20℃保存。3、开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。样本前处理：1.、冻存的抗凝血液使用前溶解应在37℃水浴迅速溶解。2.、抗凝血提取前需要彻底混匀后再吸取实验所需的体积。3、为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。1、200ul样本放入1.5ml离心管2、20μl蛋白酶K溶液，室温15分钟（期间颠倒混匀几次）3、200μl结合液CB，立刻剧烈颠倒轻摇，充分混匀，70℃放置10分钟如果全血起始量小于200μl，则用缓冲液BB补足到200μl。如果起始量介于200μl-300μl之间，则后续操作需要按照比例增加试剂用量。如果起始量介于300μl-1毫升之间，则需要先进行红细胞裂解操作。100μl异丙醇（陈旧血加200μl异丙醇），剧烈颠倒轻摇上述各操作步骤中适当力度充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，但不可用手剧烈振荡，以免剪切DNA。清亮沉淀续上上一步所得溶液和絮状沉淀都加入吸附柱Ⅵ中（吸附柱放入收集管中），10,000rpm离心30秒，倒掉收集管中的废液。吸附柱Ⅵ1、500μl抑制物去除液IR，12,000rpm离心30秒，弃废液。核酸吸附漂洗去杂将吸附柱Ⅵ放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液。接下2、加入700μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm离心30秒，弃掉废液。3、加入500μl漂洗液WB，12,000rpm离心30秒，弃掉废液。续上取出吸附柱Ⅵ，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热），室温放置3-5分钟，12,000rpm离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2分钟，12,000rpm离心1分钟。洗脱DNA（洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于50μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量）DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在-20℃DNA保存1、DNA在储存前要确保纯化得到的核酸的纯度。2、纯化得到的基因组DNA最好溶解在Tris缓冲液（pH8.0)里，因为大片段的基因组DNA在酸性水溶液中不稳定，易水解。结束语渴望梦想的光芒，不要轻易说失望Writeintheend,sendasentencetoyou,eagertodreamoflight,don'teasilysaydisappointed为方便学习与回顾本课程，请在下载后进行查阅和编辑，疑问之处请直接联系老师Fortheconvenienceoflearningandreviewingthiscourse,pleasecheckandedititafterdownloading.Ifyouhaveanyquestions,pleasecontacttheteacherdirectly
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