实验五新生儿溶血病（Hemolyticdiseaseofthenewborn，HDN）新生儿溶血病的定义HDN是指因母、婴血型不合而引起的胎儿或新生儿同种免疫性溶血，出现黄疸、贫血、水肿、肝脾肿大，甚至死胎、新生儿死亡等溶血病的症状和合并症。HDN的分类ABO-HDNRh-HDN其他血型系统-HDNABO-HDN和Rh-HDN的区别ABO-HDNRh-HDN病因ABO血型不和Rh血型不和母亲血型O型多见Rh阴性婴儿血型A、B、AB型Rh阳性发病率3-5%较低免疫刺激不需孕产史、输血史首发胎数第一胎第二胎（外祖母学说除外）直抗-～1+1+以上放散液制备冷冻、热放散乙醚放散换血治疗O型RBCRh血型同母亲AB型血浆ABO血型同婴儿型或O型血新生儿溶血病
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的方法及原理新生儿ABO及Rh血型鉴定“三项试验”：直抗试验游离试验释放试验1、准备：离心分离血清和RBC，生理盐水洗涤RBC3次，取少量RBC配成3~5％的RBC悬液。血清和洗好的压积RBC备用。2、新生儿ABO及Rh血型鉴定:试管法。3、直接抗球蛋白试验:实验方法3~5%RBC1滴抗球蛋白试剂2滴3000rpm离心15s凝集：阳性无凝集加阳性对照细胞凝集：阴性无凝集：抗球蛋白试剂失效游离试验■原理检测新生儿血清中是否存在针对新生儿RBC血型抗原的IgG血型抗体。检测出A型－－－抗AB型－－－抗BAB型－－－抗A、抗B或抗A、BRh阳性－－－抗D。游离试验（抗球蛋白卡法）ABO-HDN游离试验A型RBCB型RBCO型RBC婴儿血清Ac管50μl25μlBc管50μl25μlOc管50μl25μlRh-HDN游离试验1号细胞2号细胞3号细胞婴儿血清150μl25μl250μl25μl350μl25μl37℃孵育15min，以1030rpm离心10min。观察结果。ABO-HDN游离试验结果判断AcBcOc意 义+--存在游离的抗A抗体-+-存在游离的抗B抗体++-存在游离的抗A、抗B抗体或抗A、B抗体+/-+/-+存在游离的ABO血型系统以外抗体---没有游离抗体只有当血清中检出相应抗体，同时新生儿RBC上又存在对应抗原时才认为游离试验是阳性。Rh-HDN游离试验结果判断：任何一管出现凝集则血清中存在不规则抗体（抗－D?进一步做抗体鉴定)。3管均不出现凝集则血清中不存在不规则抗体。放散试验原理利用特殊的方法将致敏在新生儿红细胞上的抗体放散下来，然后再检测放散液中的抗体。放散液制备1.热放散2.乙醚放散：1份RBC1份盐水2份乙醚振摇1min（排气）离心3min上层乙醚中层RBC基质下层放散液吸管吸出放散液，置37℃水浴中30min，除尽乙醚，然后鉴定抗体。取洗涤压积RBC1份（1ml左右）生理盐水1份上清液即为放散液56℃水浴轻摇7分钟立即离心+放散液中抗体的检测（卡法）ABO-HDN放散试验酶处理AC酶处理BC酶处理OC放散液酶A管50μl25μl酶B管50μl25μl酶O管50μl25μlRh-HDN放散试验酶处理1号细胞2号细胞3号细胞放散液150μl25μl250μl25μl350μl25μl37℃孵育15min，以1030rpm离心10min。观察结果。释放试验结果判断ABO-HDN放散试验结果判断酶处理Ac酶处理Bc酶处理Oc意 义+--释放出IgG抗A抗体-+-释放出IgG抗B抗体++-释放出IgG抗A、抗B抗体或抗A，B抗体+/-+/-+释放出ABO血型系统以外抗体（加做谱细胞）---未释放出抗体只有当放散液中检出相应抗体，同时新生儿RBC上又存在对应抗原时才认为释放试验是阳性。Rh-HDN放散试验结果判断：任何一孔出现凝集则放散出不规则抗体（抗－D？抗体鉴定)。3孔均不出现凝集则没有放散出不规则抗体。新生儿溶血病检测的结果判断直抗试验游离试验释放试验结论---不能证实为由血型抗体引起的新生儿溶血病+--可疑为新生儿溶血病-+-可疑为新生儿溶血病--+证实为ABO新生儿溶血病+-+证实为ABO新生儿溶血病++-证实为ABO新生儿溶血病-++证实为ABO新生儿溶血病+++证实为ABO新生儿溶血病
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