鸡新城疫病毒的红细胞凝集试验和凝集抑制试验操作方法
摘要： NDV是引起新城疫的病原体，新城疫又叫亚洲鸡瘟。本病具有高度的传染性，发病急，致死率高。对养禽业发展构成了严重威胁，是世界养禽业最重要的疾病之一。为有效地控制新城疫病毒，对21日龄的1000雏鸡注射鸡新城疫灭活苗进行免疫，并对其抗体效价进行监测。红细胞凝集试验和凝集抑制试验是监测鸡新城疫免疫状态的一种简便，快捷，经济的血清学方法。次试验可作为监测鸡群免疫效果，疫苗使用效果和制定合理免疫程序的依据。
关键词：鸡新城疫 抗体效价 监测 试验
为掌握病毒的红细胞凝集试验和凝集抑制试验的操作方法，对21日龄的1000只雏鸡注射了鸡新城疫灭活苗后9天，进行随机抽样检查。作HI抗体滴度的测定，操作方法如：
1. 原理:NDV一个很重要的生物学特性就是能吸附于鸡，火鸡，鸭，鹅及某些哺乳动物（人，豚鼠）的红细胞
表
关于同志近三年现实表现材料材料类招标技术评分表图表与交易pdf视力表打印pdf用图表说话 pdf
面，并引起红细胞凝集，而这种血凝现象能被NDV的抗体的抑制。
2. 器材：2---5mL注射器、离心管、离心机、试管架、生理盐水、鸡新城疫疫苗弱毒Ⅳ系、1％鸡红细胞悬液。
3. 操作步骤：
①红细胞悬液的制作（0.7—1﹪）浓度低反应时间越长。
阿氏液：血液=1：1 肝素：血液=1：10
取2mL阿氏液加2mL成年鸡血液于离心管中摇匀，放入离心机1500rPm,5min.吸取上清液及上层白细胞后加适量生理盐水混匀离心，重复三次，用生理盐水配成1﹪浓度。
②HA
孔号 (uL) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
}↘ }↘ }↘ }↘ }↘ }↘ }↘ }↘ }↘ }↘ }↘50
鸡新城疫病毒 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
振荡器上振荡1—2min. 18℃--22℃作用15min后观察结果。
结果 # # # # # # # + — — — —
结果表示病毒液的HA效价为27 ，HI时病毒Ag液50uL内须含4个凝集单位，测病毒Ag液作32倍稀释。
③HI
孔号（uL） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
生理盐水 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 100 50
}↘ }↘ }↘ }↘ }↘ }↘ }↘ }↘ }↘ }↘50
待检血清 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
Ag(4个单位) 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
振荡器上振荡1—2min. 18℃--22℃作用20min。
红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50
振荡器上振荡1—2min. 18℃--22℃作用30min后观察结果。
结果 — — — — — — — — + # — #
则HI抑制效价为28
④结果报告;这次抽样率为鸡群的2﹪，共计20个血清样，80﹪HI抑制效价为29鸡群免疫成功。
⑤讨论： 鸡的免疫临界水平为27.高于此水平可适当推迟免疫时间，低于此水平应进行接种，流行地区，应提高临界值。接种后2-3周检测HI抗体效价，惹提高2个滴度以表示免疫成功，惹无明显提高，免疫失败，需加免。雏鸡新城疫母源抗体HI滴度在23或23以下时，应进行首次免疫接种。
浙公网安备 33021202002483